嗅鞘细胞移植周围神经损伤后，以评估功能恢复
Summary
嗅鞘细胞（嗅鞘细胞）是神经嵴细胞，使初级嗅觉神经元的生长。此特定属性可用于蜂窝移植。我们在座细胞移植的基础上在喉上神经损伤模型中使用嗅鞘细胞的模型。
Abstract
嗅鞘细胞（嗅鞘细胞）是神经嵴细胞，使增长的主要嗅觉神经元和再生。事实上，主嗅觉系统的特征在于，其以产生新的神经细胞即使在成年动物的能力。这种特殊的能力，部分原因是嗅鞘细胞的存在而对神经营造良好的微环境。嗅鞘细胞的这种特性已被用于细胞移植，如脊髓损伤模型。虽然外周神经系统有较大容量的神经损伤比对中枢神经系统后再生，完整的章节后，面部喉神经切断术的过程中，特别轴突再生长诱导错误路由。具体来说，喉返神经（RLN）的全切片诱导导致声带联带运动异常轴突再生。在这种特定的模型中，我们发现，嗅鞘细胞移植有效地增加轴突再生。
的同时存在于嗅黏膜（OM-嗅鞘细胞）和嗅球（OB-嗅鞘细胞）亚群的几个ve_content“>嗅鞘细胞构成的。我们在座细胞移植的基础上在利用嗅鞘细胞的这些不同亚群的典范喉返神经损伤模型，利用这种模式，OB-嗅鞘细胞和OM-嗅鞘细胞的原代培养的喉返神经第吻合后移植于基底膜。术后2个月，我们评估移植的动物通过互补分析的基础上videolaryngoscopy，肌电图（EMG）和组织学研究。首先，videolaryngoscopy使我们能够评估喉功能，特别是肌肉cocontractions现象，然后，肌电图的分析表明丰富性和肌肉的活动同步。最后，基于甲苯胺蓝染色的组织学研究中所允许的数量和分布的量化有髓纤维。总之，我们在这里描述了如何分离，培养，IDEntify和嗅鞘细胞移植从OM和OB RLN段吻合术，以及如何评估和分析轴突的再生和喉功能这些移植细胞的效率之后。
Introduction
主嗅觉系统包括两个不同的部分;嗅粘膜（OM）在中枢神经系统外周神经系统和嗅球（OB）。主嗅觉系统的特征在于主嗅觉神经元（PON）的自我更新整个生命中哺乳动物物种的能力。这种能力是由可能的，因为神经干细胞在OM的存在。 PON的生长和再生从OM到OB是由专门的神经胶质细胞称为嗅鞘细胞（嗅鞘细胞）促进。嗅鞘细胞是其从OM的PON到OB 1的神经发生创造了有利的微环境神经嵴细胞。因此，嗅鞘细胞可以在OM和OB构成细胞2,3的不同亚群被发现。嗅鞘细胞的不同属性有铅科学家将其用于细胞移植在几个神经系统病变范式4。事实上，嗅鞘细胞产生生长因子，减少胶质瘢痕，公关表参轴突再生，并且可以自由交融与星形胶质细胞5,6。然而，这些研究绝大多数是基于对脊髓损伤（SCI），其中一些已经用于嗅鞘细胞周围神经损伤（PNI）7,8之后。
虽然周围神经系统有很大的容量神经损伤后再生，科室齐全诱发异常的轴突再生。事实上，面部或喉返神经（RLN）完全横断后误传的轴突产生肌肉cocontractions叫联带运动。因此，它是最重要的，提出PNI的一个模型，不仅量化轴突再生长，但也评估肌肉收缩的效率。在文献中描述了最常见的模式是基于面部神经病变9,10。在这个模型中，功能性评估是基于对晶须运动10的恢复。然而，它是复杂的，以证明MOV的效率对此语句和歧视的肌肉cocontractions现象。在这里我们提出基于一个喉返神经损伤模型。这种模式不仅允许轴突再生和声带运动，但也是这些运动细胞移植11,12后的效率和功能的评价。该协议提供了一个喉返神经节/吻合模型一步步的程序，以文化和嗅鞘细胞移植从OM和OB和术后评估动物。
Protocol
Representative Results
Discussion
这里介绍的技术使嗅鞘细胞，以研究细胞移植在周围神经损伤模型一个有用的模型。细胞培养协议相对简单，可以很容易地进行。在另一方面，外科手术，在喉返神经的特定部分/吻合，需要经验的，必须由合格的人员。
在这个协议中描述的方法强调重要因素集中，以便获得可能的最佳结果。首先，有机质分解过程中，我们建议仔细解剖，以获得唯一的嗅觉，而不是呼吸道上?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者要感谢ADIR（爱德住所辅助Insuffisants Respiratoires）和基金会去l'Avenir酒店提供的财政支持，以及博士查波斯巴纳比 – 海德编辑稿件。
Materials
| DMEM/F12 | Invitrogen | E3521T |
| FBS | Invitrogen | E3387M |
| Penicilin/streptomycin | Invitrogen | 1152-8876 |
| HBSS | Invitrogen | M3467Y |
| Trypsin-EDTA | Invitrogen | M3513P |
| Cacodylate | Merck | 1.03256.0100 |
| DDSA | BIOVALLEY | 00563-450 |
| MNA | BIOVALLEY | 00886-450 |
| BDMA | BIOVALLEY | 00141-100 |
| POLYBED 812 | BIOVALLEY | 08791-500 |
| PE anti-mouse | BD Bioscience | 550589 |
| Matrigel GFR | BD Bioscience | 356231 |
| Collagenase A | Roche | 10103586001 |
| Mouse anti P75 | Chemicon | MAB 365 |
| 11.0 Wire | Ethicon | FG 2881 |
| Toluidine Blue | RAL DIAGNOSTICS | 361590-0025 |
| Centrifuge | Sigma | Sigma 2-16PK |
| Incubator | Thermo scientific | |
| Laminar flow hood | Faster | BH-EN 2003 S |
| Flow cytometer | BD Bioscience | FACSCalibur |
| Microscope | Zeiss | |
| Videolaryngoscope | Karl Storz Endoskope | Telecam SL NLSC 20212120 |
| Acquisition system | ADInstruments | Powerlab system |
| Pyramitome Ultramicrotomy System | Leica | Ultracut S |
| Image analysis system | Explora Nova | Mercator |
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