A نموذج من الفئران تحت العنكبوتية نزف
Summary
يوصف نموذج الفأر موحدة من نزيف تحت العنكبوتية من قبل الدائرة داخل اللمعة ويليس ثقب. ويتم رصد ثقب السفينة وتحت العنكبوتية النزيف عن طريق مراقبة ضغط داخل القحف. بالإضافة تسجل مختلف المعايير الحيوية والتي تسيطر عليها للحفاظ على الظروف الفسيولوجية.
Abstract
في هذا المنشور الفيديو يتم تقديم نموذج الفأر موحدة من نزيف تحت العنكبوتية (SAH). نزيف يسببها دائرة اللف ويليس انثقاب (فريق العمل) وثبت من خلال الضغط داخل الجمجمة (ICP) الرصد. وبذلك يتم التوصل إلى توزيع الدم متجانسة في الأماكن المحيطة تحت العنكبوتية تداول الشرايين وشقوق المخيخ. يتم الاحتفاظ فسيولوجيا الحيوان التنبيب والتهوية الميكانيكية، والرصد المستمر على الخط من مختلف الفسيولوجية والقلب والأوعية الدموية المعلمات: درجة حرارة الجسم، النظامية ضغط الدم ومعدل ضربات القلب، والهيموغلوبين التشبع. وبالتالي الضغط نضح الدماغي يمكن رصدها بإحكام مما أدى إلى حجم أقل من الدم متغير extravasated. وهذا يسمح لتوحيد أفضل من اللف ثقب خيوط في الفئران ويجعل نموذج كامل تكرار للغاية. وبالتالي فإنه متاحة بسهولة للدراسات الدوائية والفيزيولوجية المرضية في النوع البري وراثيةغيرت لاي الفئران.
Introduction
SAH هو نوع فرعي السكتة الدماغية مع أقل نتائج مفيدة للمرضى: 40٪ من المرضى يموتون في غضون شهر بعد 1 النزيف ونادرا ما يكون الناجين نتيجة إيجابية سريريا.
وتحدث الغالبية العظمى من SAHS عفوية (80٪) من خلال تمزق تمدد الأوعية الدموية داخل الجمجمة والتي يقع معظمها على طول الأمامي والخلفي التواصل الشريان، الشريان القاعدي، والشريان الدماغي الأوسط (MCA) 2.
مثل تمدد الأوعية الدموية يصعب نموذج في الحيوانات، وبالتالي يتم تنفيذ النماذج الحيوانية من SAH إما عن طريق حقن الدم في الفضاء / البطينين الدماغي تحت العنكبوتية أو عن طريق ثقب اللف سفينة تحت العنكبوتية.
حقن الدم الذاتي في ماجنا صهريج من السهل القيام بها وقابلة للتكرار، حيث بلغ حجم الدم يمكن التحكم مباشرة 3. للأسف بعض جوانب الفيزيولوجيا المرضية SAH، على سبيل المثالإصابة السفينة، لا يمكن أن تكون على غرار هذا الإجراء. آخر النهج التقني لتحريض SAH هو افتتاح الوريد داخل الصهريج 4.
ومع ذلك، فإن فريق العمل داخل اللمعة في فرع MCA يبدو أن الإجراء الذي نماذج الفيزيولوجيا المرضية في البشر أوثق 5. وقد تم تطوير أسلوب ووصف لأول مرة في الفئران عن طريق Bederson والزملاء، وفي الوقت نفسه من خلال Veelken وزملاؤه 6،7. في وقت لاحق تم تعديل نموذج ثقب داخل اللمعة على الفئران 8،9. يتم إدراج خيوط في الشريان السباتي الخارجي (ECA) وتأهل إلى قاعدة الجمجمة عن طريق الشريان السباتي الداخلي (ICA). عند نقطة المتفرعة من MCA خيوط يثقب السفينة ويؤدي الى نزيف في الفضاء تحت العنكبوتية في قاعدة الجمجمة. الدم ثم يوزع في الفضاء تحت العنكبوتية المتبقية على طول الشقوق والأوعية الدموية. نزيف توقفت قبل تشكيل جلطة في موقع ثقب، ولكن rebleedings، ذوي الخوذات البيضاءوغالبا ما تكون ضارة معنوى في المرضى 10، يمكن أن يحدث. وفقا لذلك، اصبحت نموذجا خيوط اللف نموذج SAH تستخدم على نطاق واسع خلال السنوات القليلة الماضية. العيب أكثر ما ذكر من طراز خيوط انثقاب هو أن نزيف حجم لا يمكن التحكم فيها مباشرة، وبالتالي قد تكون متغيرة. يمكن أن تخفض بشكل كبير من قبل هذا التباين رقابة مشددة من علم وظائف الأعضاء الحيوانية وآخر النزفية-ICP.
الفئران لديها ميزة كبيرة أن عددا كبيرا من السلالات المعدلة وراثيا المتوفرة. ولكن نظرا لصغر حجمها تميل العمليات الجراحية لتكون أكثر تعقيدا مما كانت عليه في الأنواع الكبيرة، مثل الفئران أو الأرانب. وبالتالي فإن خفض الحجم تقنيات المتقدمة للفئران على الفئران في كثير من الأحيان لا يؤدي إلى النتائج المرجوة، على سبيل المثال كما الفئران لديها محدودة جدا وزن الجسم وحجم الدم التقنيات موسع لضغط الدم وتحليل غازات الدم وكذلك لتشبع الهيموجلوبين ورصد معدل ضربات القلبيجب أن تطبق كلما كان ذلك ممكنا. وفقا لذلك، فإن الهدف من المنشور الحالي هو وصف نموذج ثقب خيوط للSAH في الفئران وإظهار كيف يمكن تنفيذ هذا النموذج بطريقة موحدة وقابلة للتكرار للغاية.
Protocol
Representative Results
Discussion
خيارات العلاج بعد SAH شحيحة ومعظمها عديمة الجدوى. لذا الفيزيولوجيا المرضية من تلف في الدماغ بعد النزفية يحتاج إلى أن يفهم كذلك من أجل تحديد أهداف علاجية جديدة وتطوير مناهج علاجية جديدة. موحدة ونماذج حيوانية استنساخه بشكل جيد في الحيوانات المعدلة وراثيا، أي الفئر…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
يتم تمويل البحوث الحالية من قبل مؤسسة البحوث Solorz-زاك.
Materials
| Equipment | |||
| operation microscope | Leica | KL2500 | |
| isoflurane vaporizer | Harvard Instruments | Continuous Flow Vaporizer | |
| respirator | Hugo Sachs | Minivent 845 | |
| microcapnograph | Hugo Sachs | Type 340 | |
| temperature controller | FHC | DC Temperature Controller | |
| dental drill | Paggen | Labset- N | |
| ICP monitor | Codman | ICP monitor | |
| blood pressure monitor | AD Instruments | Bridge Amp FE221 | |
| syringe pump | World Precision Instruments | SP101IZ | |
| pulsoximeter | Kent Scientific | MouseSTAT | |
| LDF | Perimed | Periflux 5000 | |
| analog data monitor | AD Instruments | Power Lab 16/35 | |
| Material | |||
| cement for ICP probe fixation | Speiko | Carboxylate cement | |
| glue for LDF probe fixation | Bob Smith Industries | Cyanoacrylate glue (Maxi Cure and Insta Set) | |
| venous catheter | Johnson & Johnson | Jelco winged i.v. catheter; REF 4076 | modified intubation tube |
| tubing for femoral catheter | Smiths Medical | Fine Bore Polythene Tubing; ID 0.28 mm OD 0.61 mm; REF 800/100/100 | cut to 30 cm length |
| filament for vessel perforation | Ethicon | Prolene 5-0 | cut to 12 mm length |
| surgical equipment | Fine Scientific Instruments | forceps medical #5, vessel scissors 8 cm, microclip 4 mm jaw |
Riferimenti
- Cahill, J., Zhang, J. H. Subarachnoid hemorrhage: is it time for a new direction. Stroke. 40, 86-87 (2009).
- van Gijn, J., Kerr, R. S., Rinkel, G. J. Subarachnoid haemorrhage. Lancet. 369, 306-318 (2007).
- Lin, C. L., et al. A murine model of subarachnoid hemorrhage-induced cerebral vasospasm. J. Neurosci. Methods. 123, 89-97 (2003).
- Altay, T., et al. A novel method for subarachnoid hemorrhage to induce vasospasm in mice. J. Neurosci. Methods. 183, 136-140 (2009).
- Feiler, S., Friedrich, B., Scholler, K., Thal, S. C., Plesnila, N. Standardized induction of subarachnoid hemorrhage in mice by intracranial pressure monitoring. J. Neurosci. Methods. 190, 164-170 (2010).
- Bederson, J. B., Germano, I. M., Guarino, L. Cortical blood flow and cerebral perfusion pressure in a new noncraniotomy model of subarachnoid hemorrhage in the rat. Stroke. 26, 1086-1091 (1995).
- Veelken, J. A., Laing, R. J., Jakubowski, J. The Sheffield model of subarachnoid hemorrhage in rats. Stroke. 26, 1279-1283 (1995).
- Kamii, H., et al. Amelioration of vasospasm after subarachnoid hemorrhage in transgenic mice overexpressing CuZn-superoxide dismutase. Stroke. 30, 867-871 (1999).
- Parra, A., et al. Mouse model of subarachnoid hemorrhage associated cerebral vasospasm: methodological analysis. Neurol. Res. 24, 510-516 (2002).
- Broderick, J. P., Brott, T. G., Duldner, J. E., Tomsick, T., Leach, A. Initial and recurrent bleeding are the major causes of death following subarachnoid hemorrhage. Stroke. 25, 1342-1347 (1994).
- Thal, S. C., Plesnila, N. Non-invasive intraoperative monitoring of blood pressure and arterial pCO2 during surgical anesthesia in mice. J. Neurosci. Methods. 159, 261-267 (2007).
- Hockel, K., Trabold, R., Scholler, K., Torok, E., Plesnila, N. Impact of anesthesia on pathophysiology and mortality following subarachnoid hemorrhage in rats. Exp. Transl. Stroke Med. 4, 5 (2012).
- Wang, Z., Schuler, B., Vogel, O., Arras, M., Vogel, J. What is the optimal anesthetic protocol for measurements of cerebral autoregulation in spontaneously breathing mice?. Exp. Brain Res. 207, 249-258 (2010).
- Schwartz, A. Y., Masago, A., Sehba, F. A., Bederson, J. B. Experimental models of subarachnoid hemorrhage in the rat: a refinement of the endovascular filament model. J. Neurosci. Methods. 96, 161-167 (2000).
- Feiler, S., Plesnila, N., Thal, S. C., Zausinger, S., Scholler, K. Contribution of matrix metalloproteinase-9 to cerebral edema and functional outcome following experimental subarachnoid hemorrhage. Cerebrovasc. Dis. 32, 289-295 (2011).
