Um modelo murino de hemorragia subaracnóide

Summary

Um modelo de rato padronizado de hemorragia subaracnóide por Círculo intraluminal de Willis perfuração é descrito. Perfuração de vasos e hemorragia subaracnóide são monitorados pela monitorização da pressão intracraniana. Além disso os vários parâmetros vitais são registadas e controlada para manter as condições fisiológicas.

Abstract

Nesta publicação de vídeo de um modelo padronizado rato de hemorragia subaracnóide (HSA) é apresentado. Sangramento é induzida pelo Círculo endovascular de Willis perfuração (CWP) e comprovada por pressão intracraniana (PIC) de monitoramento. Assim, uma distribuição homogênea de sangue em espaços subaracnóide em torno da circulação arterial e fissuras do cerebelo é alcançado. Fisiologia animal é mantido por entubação, ventilação mecânica, monitorização contínua e on-line de vários parâmetros fisiológicos e cardiovasculares: temperatura corporal, pressão arterial sistêmica, freqüência cardíaca e saturação de hemoglobina. Deste modo, a pressão de perfusão cerebral pode ser firmemente monitorado resultando em um volume variável de menos de sangue extravasado. Isto permite uma melhor padronização de perfuração filamento endovascular em ratos e faz todo o modelo altamente reprodutível. Assim, é facilmente disponível para os estudos farmacológicos e fisiopatológicos no tipo selvagem e genéticaly alterada ratinhos.

Introduction

HAS é o subtipo tempos com o resultado menos benéfica para os pacientes: 40% dos pacientes morrem dentro de um mês após o sangramento ¹ e sobreviventes raramente têm um resultado clinicamente favorável.

A grande maioria da SAHOS espontâneas (80%) são causados ​​pela ruptura de aneurismas intracranianos, que são na sua maioria localizadas ao longo da anterior e posterior da artéria, a artéria basilar, artéria cerebral média (MCA) ² comunicando.

Tais aneurismas são difíceis de modelar em animais e, portanto, os modelos animais de SAH são realizadas quer por injecção do sangue para dentro do espaço / ventrículos cerebrais subaracnoideos ou por perfuração de um navio de endovascular subaracnóide.

Injeção de sangue autólogo na cisterna magna é de fácil execução e reprodutível, como o volume de sangue pode ser controlada diretamente ^3. Infelizmente, alguns aspectos da fisiopatologia da HAS, por exemplo, olesão do vaso, não pode ser modelado por este procedimento. Outra abordagem técnica para indução de HAS é a abertura de uma veia intracisternal ^4.

No entanto, o CWP intraluminal no ramo MCA parece ser o processo de que os modelos da fisiopatologia em seres humanos mais estreita ^5. O método foi desenvolvido e descrito pela primeira vez em ratos por Bederson e colegas, e ao mesmo tempo por Veelken e colegas ^6,7. Mais tarde, o modelo da perfuração intraluminal foi adaptado para ratinhos ^8,9. Um filamento é introduzido na artéria carótida externa (ECA) e avançada até à base do crânio, através da artéria carótida interna (ICA). No ponto de ramificação do MCA filamento perfura o vaso e induz a uma hemorragia no espaço subaracnóide da base do crânio. O sangue, em seguida, distribui para o espaço subaracnóide restante ao longo de fissuras e vasos sanguíneos. A hemorragia é parada pela formação de coágulos no local da perfuração, mas rebleedings, which são muitas vezes prejudiciais em pacientes ^{de 10,} pode ocorrer. Por conseguinte, o modelo de filamentos endovascular se tornou um modelo amplamente usado HAS durante os últimos anos. A desvantagem mais citada do modelo filamento perfuração é que o volume de sangramento não pode ser diretamente controlado e pode, portanto, ser variável. Esta variabilidade pode ser significativamente reduzido por um rígido controle de fisiologia animal e pós-hemorrágica ICP.

Os ratos têm a grande vantagem de que um grande número de estirpes geneticamente modificados estão disponíveis. No entanto, devido ao seu pequeno tamanho procedimentos cirúrgicos tendem a ser mais complexo do que em espécies maiores, por exemplo, ratos ou coelhos. Portanto, a redução de escala de técnicas desenvolvidas para os ratos para os ratos costumam não leva aos resultados desejados, por exemplo, como os ratos têm um peso corporal e volume de sangue muito limitadas técnicas não invasivas para a pressão arterial e análise de gases sanguíneos, bem como para a saturação de hemoglobina e monitoramento da freqüência cardíacatem que ser aplicada sempre que possível. Por conseguinte, o objectivo da publicação é descrever o modelo da perfuração de filamentos para HSA em ratinhos e para demonstrar como este modelo pode ser realizado de uma forma padronizada e altamente reprodutível.

Protocol

Todos os procedimentos cirúrgicos foram submetidos à revisão ética e aprovado pelo governo da Alta Baviera (número de referência: 55.2-1-54-2532.3-13-13 e -2532-136-11). Os animais são macho C57BL / 6 com um peso corporal de aproximadamente 25 g. 1. Preparação animal Induzir a anestesia, colocando o mouse em uma câmara. Lave a câmara com 5% de isoflurano até que o animal perde a consciência. Injectar anestésicos pré-misturados por via intraperitoneal: o fe…

Representative Results

Mortalidade Uma vez que a técnica de cirurgia é dominado o procedimento não provocou quaisquer mortalidade intra-operatória. Além disso o sangramento pode ser conseguida em quase todos os animais. Mortalidade pós-operatória é de 30-40%, com a maior parte dos animais morrer no dia 1 após a cirurgia (Figura 5). ICP valores após SAH O ICP antes de sangramento é de cerca de 4 mmHg. Sangramento resulta em um aumento a…

Discussion

As opções de tratamento após SAH são escassos e pouco ineficaz. Portanto, a fisiopatologia da lesão cerebral pós-hemorrágica precisa ser mais bem compreendidos, a fim de identificar novos alvos terapêuticos e desenvolver novas abordagens terapêuticas. Padronizado e modelos animais bem reprodutíveis em animais geneticamente modificados, ou seja, ratos, são cruciais para tais investigações. O modelo CWP tornou-se um modelo amplamente utilizado para a HAS, uma vez que se assemelha a fisiopatologia em …

Materials

			Equipment
operation microscope	Leica	KL2500
isoflurane vaporizer	Harvard Instruments	Continuous Flow Vaporizer
respirator	Hugo Sachs	Minivent 845
microcapnograph	Hugo Sachs	Type 340
temperature controller	FHC	DC Temperature Controller
dental drill	Paggen	Labset- N
ICP monitor	Codman	ICP monitor
blood pressure monitor	AD Instruments	Bridge Amp FE221
syringe pump	World Precision Instruments	SP101IZ
pulsoximeter	Kent Scientific	MouseSTAT
LDF	Perimed	Periflux 5000
analog data monitor	AD Instruments	Power Lab 16/35
			Material
cement for ICP probe fixation	Speiko	Carboxylate cement
glue for LDF probe fixation	Bob Smith Industries	Cyanoacrylate glue (Maxi Cure and Insta Set)
venous catheter	Johnson & Johnson	Jelco winged i.v. catheter; REF 4076	modified intubation tube
tubing for femoral catheter	Smiths Medical	Fine Bore Polythene Tubing; ID 0.28 mm OD 0.61 mm; REF 800/100/100	cut to 30 cm length
filament for vessel perforation	Ethicon	Prolene 5-0	cut to 12 mm length
surgical equipment	Fine Scientific Instruments	forceps medical #5, vessel scissors 8 cm, microclip 4 mm jaw