Intralinfática imunoterapia e vacinação em camundongos
Summary
Vacinação profilática e terapêutica, muitas vezes não estimulam fortes respostas imunes, devido à semana de drenagem da vacina para os gânglios linfáticos e, consequentemente, fraco envolvimento das células do sistema imunológico. Por injecção directa de vacina para os nódulos linfáticos, assim chamada injecção intralinfática, a eficácia da vacina pode ser fortemente melhorada e as doses de vacina podem ser reduzidos.
Abstract
Vacinas são tipicamente injectado subcutaneamente ou intramuscularmente para estimulação de respostas imunes. O sucesso desta requer drenagem eficiente da vacina para os nódulos linfáticos onde as células apresentadoras de antigénio pode interagir com os linfócitos para a geração das respostas imunitárias desejadas. A força e o tipo de respostas imunitárias induzidas também depender da densidade ou da frequência de interacções bem como o microambiente, especialmente o teor de citocinas. Como apenas uma fração mínima de vacinas perifericamente injetados atinge os gânglios linfáticos, a vacinação de camundongos e humanos foram realizados por injecção directa da vacina em linfonodos inguinais, ou seja, injeção intralinfática. No homem, o procedimento é guiada por ultra-sons. Nos ratos, uma pequena (5-10 mm) incisão é feita na região inguinal de animais anestesiados, o nó de linfa é localizada e imobilizada com uma pinça, e um volume de 10-20 mL da vacina é injectada sob controle visual.A incisão é fechada com um único ponto com suturas cirúrgicas. Os ratinhos foram vacinados com ADN de plasmídeo, ARN, péptidos, proteínas, partículas, e bactérias, bem como adjuvantes, e foi observada forte melhoria da resposta imune contra todos os tipos de vacinas. O método intralinfática da vacinação é especialmente adequada em situações onde a vacinação convencional produz imunidade insuficientes ou quando a quantidade de vacina disponível é limitado.
Introduction
As vacinas são tipicamente injectados por via subcutânea ou intramuscular para a estimulação de respostas imunitárias. O sucesso deste procedimento requer a drenagem eficiente da vacina para os nódulos linfáticos onde as células apresentadoras de antigénio pode interagir com os linfócitos para a geração de t-e as respostas de células-B. Além disso, a força e o tipo de respostas imunitárias induzidas também depender da densidade ou da frequência de tais interacções, bem como o próprio microambiente, especialmente o teor de citocinas. Como apenas uma pequena fração de uma vacina injetada em um tecido periférico atinge um gânglio linfático, a vacinação de camundongos e humanos por injeção direta de vacina para os gânglios linfáticos, o site foram gerados respostas imunes, foram realizados. No homem, o procedimento é guiada por ultra-sons, um procedimento também utilizados para a administração de agentes de imagem para visualização de diagnóstico e do sistema linfático. Em ratinhos, o procedimento é invasivo. Aqui, uma pequena (5-10 mm) incision é feita na região inguinal de animais anestesiados 1, o nó de linfa é localizada e imobilizada com uma pinça, e um volume de 10-20 mL da vacina é injectada sob controlo visual, 10 ul é usado para as primeiras injecções e em ratos jovens com linfonodos pequenos, enquanto que 20 l pode ser injetado em linfonodos do mais velho ou camundongos já vacinadas, que têm nódulos linfáticos maiores. A incisão pode ser fechada com um único ponto com suturas cirúrgicas. Por este método, os ratos foram vacinados com plasmídeo de DNA de 2,3, o RNA mensageiro 4, 1,3,5,6 péptido, proteína 7-10, as partículas 11, 12 bactérias, bem como adjuvantes de 7,13, e uma forte melhoria da imunitário respostas contra todos os tipos de vacinas têm sido observados. O método intralinfática da vacinação é especialmente adequada em situações onde a vacinação convencional produz imunidade insuficiente, ou quando a quantidade de vacina disponível é limitado ou very dispendioso. Em humanos, o método intralinfática de imunização foi aplicada a pacientes alérgicos 14,15 ou para pacientes com cancro 16-21. Embora a noção corrente de que o método é intralinfática é mais invasiva do que outros métodos de injectáveis, tais como injecções intramusculares e subcutâneas, a percepção da dor não é maior do que após a punção venosa de 15. Espera-se que a vacinação intralinfática vai se tornar uma alternativa ou complemento a outros métodos de vacinas profiláticas e terapêuticas, especialmente. Este artigo descreve em pormenor a forma como o processo de vacinação intralinfática é realizada em ratinhos. Todos os procedimentos descritos, foram aprovados pela Agência Veterinária Cantonal de Zurique e realizada de acordo com as diretrizes federais suíços e directivas relativas à protecção dos animais utilizados para fins científicos.
Protocol
Representative Results
Discussion
Imunização intralinfática e imunoterapia demonstraram ser apropriados para a estimulação de ambas as respostas de anticorpos e respostas de células-T. Como demonstrado neste vídeo-artigo, o procedimento de vacinação é intralinfática um método rápido e fácil para estimular fortes respostas imunitárias em ratinhos. Um cirurgião treinado pode realizar o procedimento durante 3-4 min. A sessão também pode ser compartilhada entre dois cirurgiões onde normalmente é fazer a anestesia ea sutura eo segundo cir…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores são gratos pela ajuda experimental no desenvolvimento do método de imunização em camundongos intralinfática de Iris Erdmann, Barbara von Beust, e Julia Maria Martínez-Gómez. Obrigado também a Maggy Arras e Nikola Cesarovic por nos deixar usar seu teatro cirúrgico para esta produção de vídeo.
Materials
| Ketamine (Ketasol-100) | Graeub AG, Switzerland | Anesthetics | |
| Xylazine (Rompun) | Bayer, Germany | Anesthetics | |
| Viscotears Eye-Gel | Novartis, Switzerland | To keep eyes from drying out during anesthesia. | |
| BD Micro-Fine 0.5 ml | BD Medical, France | 29 G Insulin syringes with permanently attached needles | |
| 6-0 Dermalon Monofilament nylon | Covidien, MA, USA | For sutures (0.7 metric, 18G, 45 cm, Blue) | |
| Curved forceps, 4.5 inch | Polymed, Switzerland | For incision and holding of lymph node | |
| Straight surgical scissors, 4.5 inch | Polymed, Switzerland | For incision | |
| Needle holder, 5.5 inch | Polymed, Switzerland | To close incision with suture | |
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