A preclínicos modelo murino de metástasis hepática
Summary
Un modelo preclínico, murino de metástasis hepáticas realiza a través de una técnica de inyección hemispleen.
Abstract
Se han desarrollado numerosos modelos murinos para estudiar los cánceres humanos y avanzar en la comprensión de tratamiento y desarrollo del cáncer. Aquí, se describe un modelo preclínico, de páncreas murino tumoral de las metástasis hepáticas por medio de una inyección hemispleen de las células tumorales pancreáticas murinos singénicos. Este modelo imita muchas de las condiciones clínicas en pacientes con enfermedad metastásica en el hígado. Los ratones desarrollan consistentemente metástasis en el hígado permitiendo para la investigación del proceso metastásico, las pruebas de terapia experimental, la investigación y la inmunología tumoral.
Introduction
Adenocarcinoma ductal pancreático (PDA) es la cuarta causa principal de muertes relacionadas con el cáncer en los Estados Unidos 1. La supervivencia de cinco años para los pacientes con PDA metastásico es 2-12% 1. Aunque la quimioterapia adyuvante y neoadyuvante para el cáncer de páncreas es hoy más eficaz que nunca, sigue existiendo una necesidad desesperada de nuevas terapias.
El desarrollo de nuevas terapias requiere modelos animales preclínicos fiables. Aunque los modelos de tumores subcutáneos son sencillos de usar, inconvenientes incluyen la incapacidad de estos tumores y metástasis a imitar la progresión tumoral y microambientes visto en los cánceres humanos. Modelos de ingeniería genética, tales como el ratón ingeniería genética que contiene Kras y p53 knock-in mutaciones oncogénicas (el modelo KPC) 2 y el modelo KPC con un trazador de linaje YFP (el modelo PKCY 3) permiten el estudio de tumores que ocurren naturalmente en immunocompeteratones NT. Además, el microambiente tumoral se altera y se asemeja más estrechamente a la observada en la progresión tumoral humano. Por desgracia, el calendario de desarrollo de tumores es variable dentro de estos modelos, lo que hace difícil el estudio de terapias experimentales. Además, el retrocruzamiento de estos ratones requiere una cantidad significativa de tiempo y compromiso financiero, que no siempre es factible. Por último, los modelos de PDA xenoinjerto de ratón implantadas, requieran ratones, que han alterado o microambientes tumorales ausentes inmunocomprometidos. Como resultado, la eficacia de terapias experimentales demostrado en estos modelos preclínicos a menudo no son reproducibles en ensayos clínicos humanos 4.
Este modelo de ratón hemisplenectomy utiliza células tumorales Panc02, que son una, inducida por metilcolantreno de páncreas línea celular de tumor altamente tumorigénico derivado de ratones C57BL / 6 5, 6. Además, otras líneas celulares PDA murinos derivan del micrófono KPCe se puede utilizar en este modelo. Schulick et al. Han desarrollado previamente una técnica hemisplenectomy y ha creado un modelo de ratón singénico de metástasis de cáncer de colon 7. Este modelo hemisplenectomy (Figura 1) ofrece la inoculación del tumor consistente e iguales en ratones inmunocompetentes se presta a la investigación de nuevos agentes terapéuticos 7-10.
Protocol
Representative Results
Discussion
Este modelo murino preclínica de la metástasis del cáncer de páncreas al hígado a través de una técnica de inyección hemispleen es el primer modelo descrito que refleja muchas de las condiciones clínicas e inmunológicas de los pacientes con enfermedad metastásica en el hígado. Este modelo ofrece varias ventajas sobre otros modelos murinos. En primer lugar, a diferencia de modelos transgénicos de cáncer de páncreas en la que sólo el 30% de los ratones desarrollan metástasis en el hígado y el momento de …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
KF y KO son co primeros autores, junto con KS
Este trabajo fue apoyado en parte por el AHPBA Fellowship (KS), NIH K23 CA148964-01 (LZ), la Escuela de Medicina Johns Hopkins premio Clinical Scientist (LZ), Fundación Viragh y el Centro de Cáncer Skip Viragh pancreático en la Universidad Johns Hopkins (EMJ y LZ), la Fundación Nacional de Páncreas (LZ), la Fundación Lefkofsky Familia (LZ), el NCI SPORE en Gastrointestinal Cánceres P50 CA062924 (EMJ, LZ), la Fundación Lustgarten (LZ), y las subvenciones del Centro de Cáncer Sol Goldman pancreático (KS , BHE, LZ).
Materials
| Cell culture media and components | will vary depending on cell line | ||
| Phosphate Buffered Saline | Gibco by Life Technologies | 10010-023 | |
| 15 mL centrifigure tubes | Corning | 430052 | |
| Curved Operating Scissor | Roboz Surgical Store | RS-6835 | |
| Micro dissecting Graefe Forceps | Roboz Surgical Store | RS-5130 | |
| Needle holder (regular) | World Precision Instruments, Inc | ||
| 3-0 or 4-0 suture | courtesy of dept of surgery, Johns Hopkins | ||
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, small, angled | Teleflex | 137085 | |
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, medium, angled | Teleflex | 237115 | |
| Weck Horizon medium ligating clips | Teleflex | 002200 | |
| Weck Horizon small ligating clips | Teleflex | 001200 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 3/8" slip tip | Becton Dickinson | 309625 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 5/8" slip tip | Becton Dickinson | 309597 | |
| 9 mm Autoclip Applier | Mikron | 427630 | |
| 9 mm Autoclip | Becton Dickinson | 427631 | |
| Heating pad | Sunbeam | CAT93 | |
| 70% Ethanol | sold by numerous vendors | ||
| Ketamine Hydrochloride | Hospira | 22395DD | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma | X1251 |
Riferimenti
- American Cancer Society. . Cancer Facts & Figures. , (2013).
- Clark, C. E., Beatty, G. L., Vonderheide, R. H. Immunosurveillance of pancreatic adenocarcinoma: insights from genetically engineered mouse models of cancer. Cancer letters. 279, 1-7 (2009).
- Rhim, A. D., et al. EMT and dissemination precede pancreatic tumor formation. Cell. 148, 349-361 (2012).
- Frese, K. K., Tuveson, D. A. Maximizing mouse cancer models. Nature reviews. Cancer. 7, 645-658 (2007).
- Corbett, T. H., et al. Induction and chemotherapeutic response of two transplantable ductal adenocarcinomas of the pancreas in C57BL/6 mice. Cancer research. 44, 717-726 (1984).
- Leao, I. C., Ganesan, P., Armstrong, T. D., Jaffee, E. M. Effective depletion of regulatory T cells allows the recruitment of mesothelin-specific CD8 T cells to the antitumor immune response against a mesothelin-expressing mouse pancreatic adenocarcinoma. Clinical and translational science. 1, 228-239 (2008).
- Jain, A., et al. Synergistic effect of a granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transduced tumor vaccine and systemic interleukin-2 in the treatment of murine colorectal cancer hepatic metastases. Annals of surgical oncology. 10, 810-820 (2003).
- Yoshimura, K., et al. Selective targeting of antitumor immune responses with engineered live-attenuated Listeria monocytogenes. Cancer research. 66, 1096-1104 (2006).
- Yoshimura, K., et al. Live attenuated Listeria monocytogenes effectively treats hepatic colorectal cancer metastases and is strongly enhanced by depletion of regulatory T cells. Cancer research. 67, 10058-10066 (2007).
- Olino, K., et al. Tumor-associated antigen expressing Listeria monocytogenes induces effective primary and memory T-cell responses against hepatic colorectal cancer metastases. Annals of surgical oncology. 19, 597-607 (2012).
- Hingorani, S. R., et al. Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice. Cancer cell. 7, 469-483 (2005).
- Marion, A., Aoudi, W., Basarab, A., Delachartre, P., Vray, D. Blood flow evaluation in high-frequency, 40 MHz imaging: a comparative study of four vector velocity estimation methods. Ultrasonics. 50, 683-690 (2010).
- Zheng, L., et al. Tyrosine 23 phosphorylation-dependent cell-surface localization of annexin A2 is required for invasion and metastases of pancreatic cancer. PloS one. 6, e19390 (2011).
