وما قبل السريرية الفئران نموذج من الانبثاث الكبدي
Summary
A، نموذج الفئران قبل السريرية الانبثاث الكبدي تنفيذ عبر تقنية الحقن hemispleen.
Abstract
وقد وضعت العديد من نماذج الفئران لدراسة السرطانات البشرية وتعزيز فهم علاج السرطان والتنمية. هنا، يتم وصف وقبل السريرية، نموذج الفئران ورم البنكرياس الانبثاث الكبد عن طريق الحقن hemispleen من الخلايا السرطانية في البنكرياس الفئران مسانج. هذا النموذج يقلد الكثير من الحالات السريرية في المرضى الذين يعانون من المرض المنتشر في الكبد. الفئران تتطور باستمرار الانبثاث في كبد السماح للتحقيق في عملية النقيلي، اختبار العلاج التجريبي، والبحوث ورم المناعة.
Introduction
غدية الأقنية البنكرياسية (PDA) هو رابع سبب لوفيات السرطان ذات الصلة في الولايات المتحدة 1. بقاء خمس سنوات لمرضى PDA النقيلي هو 2-12٪ 1. على الرغم من أن العلاج الكيميائي المساعد والمواد الجديدة المساعدة لسرطان البنكرياس هو أكثر فعالية اليوم من أي وقت مضى، لا يزال هناك حاجة ماسة لعلاجات جديدة.
تطوير علاجات جديدة تستلزم النماذج الحيوانية قبل السريرية موثوقة. على الرغم من أن نماذج ورم تحت الجلد هي واضحة للاستخدام، وتشمل عيوب عدم قدرة هذه الأورام إلى metastasize وتحاكي تطور الورم وmicroenvironments ينظر في السرطانات البشرية. النماذج المعدلة وراثيا، مثل الماوس المعدلة وراثيا تحتوي على البروتين p53 KRAS والضربة القاضية في الطفرات أنكجنيك (نموذج KPC) 2 ونموذج مؤسسة البترول الكويتية مع النسب التتبع YFP (نموذج PKCY) 3 تسمح لدراسة الأورام التي تحدث بشكل طبيعي في immunocompeteالفئران الإقليم الشمالي. بالإضافة إلى ذلك، المكروية الورم هي دون تغيير وتشبه عن كثب ما تشهده تطور الورم البشري. للأسف، توقيت تطوير ورم متغير ضمن هذه النماذج، الأمر الذي يجعل من الصعب دراسة العلاجات التجريبية. بالإضافة إلى ذلك، backcrossing من هذه الفئران يتطلب قدرا كبيرا من الوقت والالتزام المالي، وهي ليست دائما ممكنة. أخيرا، تستلزم نماذج الماوس طعم أجنبي PDA زرع المناعة الفئران، والتي غيرت أو microenvironments الورم غائبة. ونتيجة لذلك، فإن فعالية العلاجات التجريبية أثبتت في هذه النماذج قبل السريرية غالبا ما تكون غير قابلة للتكرار في التجارب السريرية البشرية 4.
هذا نموذج الفأر hemisplenectomy يستخدم الخلايا السرطانية Panc02، والتي هي، ميثيل كولانترين يسببها البنكرياس خط الخلية السرطانية مكون للأورام عالية المستمدة من C57BL / 6 الفئران 5، 6. بالإضافة إلى ذلك، خطوط الخلايا PDA الفئران الأخرى المستمدة من هيئة التصنيع العسكري مؤسسة البترول الكويتيةه يمكن استخدامها في هذا النموذج. Schulick وآخرون قد وضعت سابقا تقنية hemisplenectomy وخلق نموذج الفأر مسانج الانبثاث سرطان القولون 7. هذا النموذج hemisplenectomy (الشكل 1) تقدم ثابت ومتساو التلقيح الورم في الفئران مناعيا الإقراض نفسها إلى التحقيق في العوامل العلاجية رواية 7-10.
Protocol
Representative Results
Discussion
هذا نموذج الفئران قبل السريرية لورم خبيث في البنكرياس السرطان إلى الكبد عن طريق تقنية الحقن hemispleen هو النموذج الأول وصف يعكس العديد من الحالات السريرية والمناعية للمرضى الذين يعانون من المرض المنتشر في الكبد. هذا النموذج يقدم العديد من المزايا على نماذج الفئران الأخ…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
KF وKO وشارك في أول الكتاب إلى جانب KS
وأيد هذا العمل في جزء من زمالة AHPBA (KS)، NIH K23 CA148964-01 (LZ)، وكلية جونز هوبكنز للطب جائزة السريرية عالم (LZ)، ومؤسسة Viragh ومركز السرطان تخطي Viragh البنكرياس في جامعة جونز هوبكنز (EMJ و LZ)، المؤسسة الوطنية البنكرياس (LZ)، وLefkofsky الأسرة مؤسسة (LZ)، وSPORE NCI في الجهاز الهضمي السرطان P50 CA062924 (EMJ، LZ)، ومؤسسة Lustgarten (LZ)، ومنح مركز سول غولدمان سرطان البنكرياس (KS ، BHE، LZ).
Materials
| Cell culture media and components | will vary depending on cell line | ||
| Phosphate Buffered Saline | Gibco by Life Technologies | 10010-023 | |
| 15 mL centrifigure tubes | Corning | 430052 | |
| Curved Operating Scissor | Roboz Surgical Store | RS-6835 | |
| Micro dissecting Graefe Forceps | Roboz Surgical Store | RS-5130 | |
| Needle holder (regular) | World Precision Instruments, Inc | ||
| 3-0 or 4-0 suture | courtesy of dept of surgery, Johns Hopkins | ||
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, small, angled | Teleflex | 137085 | |
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, medium, angled | Teleflex | 237115 | |
| Weck Horizon medium ligating clips | Teleflex | 002200 | |
| Weck Horizon small ligating clips | Teleflex | 001200 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 3/8" slip tip | Becton Dickinson | 309625 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 5/8" slip tip | Becton Dickinson | 309597 | |
| 9 mm Autoclip Applier | Mikron | 427630 | |
| 9 mm Autoclip | Becton Dickinson | 427631 | |
| Heating pad | Sunbeam | CAT93 | |
| 70% Ethanol | sold by numerous vendors | ||
| Ketamine Hydrochloride | Hospira | 22395DD | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma | X1251 |
Riferimenti
- American Cancer Society. . Cancer Facts & Figures. , (2013).
- Clark, C. E., Beatty, G. L., Vonderheide, R. H. Immunosurveillance of pancreatic adenocarcinoma: insights from genetically engineered mouse models of cancer. Cancer letters. 279, 1-7 (2009).
- Rhim, A. D., et al. EMT and dissemination precede pancreatic tumor formation. Cell. 148, 349-361 (2012).
- Frese, K. K., Tuveson, D. A. Maximizing mouse cancer models. Nature reviews. Cancer. 7, 645-658 (2007).
- Corbett, T. H., et al. Induction and chemotherapeutic response of two transplantable ductal adenocarcinomas of the pancreas in C57BL/6 mice. Cancer research. 44, 717-726 (1984).
- Leao, I. C., Ganesan, P., Armstrong, T. D., Jaffee, E. M. Effective depletion of regulatory T cells allows the recruitment of mesothelin-specific CD8 T cells to the antitumor immune response against a mesothelin-expressing mouse pancreatic adenocarcinoma. Clinical and translational science. 1, 228-239 (2008).
- Jain, A., et al. Synergistic effect of a granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transduced tumor vaccine and systemic interleukin-2 in the treatment of murine colorectal cancer hepatic metastases. Annals of surgical oncology. 10, 810-820 (2003).
- Yoshimura, K., et al. Selective targeting of antitumor immune responses with engineered live-attenuated Listeria monocytogenes. Cancer research. 66, 1096-1104 (2006).
- Yoshimura, K., et al. Live attenuated Listeria monocytogenes effectively treats hepatic colorectal cancer metastases and is strongly enhanced by depletion of regulatory T cells. Cancer research. 67, 10058-10066 (2007).
- Olino, K., et al. Tumor-associated antigen expressing Listeria monocytogenes induces effective primary and memory T-cell responses against hepatic colorectal cancer metastases. Annals of surgical oncology. 19, 597-607 (2012).
- Hingorani, S. R., et al. Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice. Cancer cell. 7, 469-483 (2005).
- Marion, A., Aoudi, W., Basarab, A., Delachartre, P., Vray, D. Blood flow evaluation in high-frequency, 40 MHz imaging: a comparative study of four vector velocity estimation methods. Ultrasonics. 50, 683-690 (2010).
- Zheng, L., et al. Tyrosine 23 phosphorylation-dependent cell-surface localization of annexin A2 is required for invasion and metastases of pancreatic cancer. PloS one. 6, e19390 (2011).
