דגם Murine פרה של גרורות כבדית
Summary
מודל פרה קליני, עכברי של גרורות בכבד מבוצע באמצעות טכניקת הזרקת hemispleen.
Abstract
מודלים עכבריים רבים פותחו כדי ללמוד סרטן בבני אדם ולקדם את ההבנה של טיפול בסרטן ובפיתוח. כאן, מודל פרה קליני, עכברי לבלב גידול של גרורות בכבד באמצעות הזרקת hemispleen של תאים סרטניים syngeneic עכבריים לבלב מתואר. מודל זה מחקה רב של המצבים הקליניים בחולים עם מחלה גרורתית בכבד. עכברים לפתח באופן עקבי גרורות בכבד ומאפשר לחקירה של התהליך גרורתי, בדיקת טיפול ניסיוני, ומחקר אימונולוגיה גידול.
Introduction
אדנוקרצינומה ductal הלבלב (PDA) הוא הגורם המוביל הרביעי של מקרי מוות מסרטן הקשורים בארצות הברית 1. ההישרדות של חמש שנים עבור חולים עם מחשב כף יד גרורתי היא 2-12 1%. למרות שטיפול כימותרפי אדג'וונטי וneoadjuvant לסרטן לבלב הוא יעיל יותר היום מאשר אי פעם, עדיין נותר צורך נואש בטיפולים חדשניים.
פיתוח תרופות חדשניות מחייב מודלים של בעלי חיים פרה קליניים אמין. למרות שהמודלים של גידול תת עורי הם קלים לשימוש, חסרונות כוללים את חוסר היכולת של גידולים אלה לשלוח גרורות ולחקות את התקדמות הגידול וmicroenvironments ראתה בסרטן בבני אדם. מודלים מהונדסים גנטי, כגון עכבר המהונדס גנטי המכיל קראס וp53 לדפוק במוטציות סרטניות (מודל KPC) 2 ומודל KPC עם נותב שושלת YFP (מודל PKCY) 3 יאפשר לחקר גידולים מתרחשים באופן טבעי בimmunocompeteעכברי NT. בנוסף, microenvironment הגידול הוא ללא שינוי ודומה יותר לזו שנצפתה בהתקדמות גידול אנושית. לרוע המזל, העיתוי של התפתחות גידולים הוא משתנה בתוך המודלים האלה, שהופך אותו קשים ללמוד טיפולים ניסיוניים. בנוסף, backcrossing של עכברים אלו דורש כמות משמעותית של זמן והתחייבות כספית, וזה לא תמיד אפשרי. לבסוף, מודלים עכבר מחשב כף יד xenograft מושתלים מחייבים דיכוי חיסוני בעכברים, אשר שינו או microenvironments גידול נעדרה. כתוצאה מכך, יעילותם של טיפולים ניסיוניים הוכיחו במודלים פרה אלה הן לעתים קרובות לא לשחזור בניסויים קליניים בבני אדם 4.
מודל עכבר hemisplenectomy זה מנצל תאי גידול Panc02, שהם קו סרטני מאוד, methylcholanthrene מושרה לבלב תאי גידול נגזר מעכברי C57BL / 6 5, 6. בנוסף, שורות תאים אחרות עכבריות מחשב כף יד נובעות ממיקרופון KPCדואר ניתן להשתמש במודל זה. Schulick et al. פתח בעבר טכניקת hemisplenectomy ויצרתי מודל עכבר syngeneic של גרורות סרטן מעי גס 7. מודל hemisplenectomy זה (איור 1) מציע חיסון גידול עקבי ושווה בעכברים עם מערכת חיסון הלוואות עצמו לחקירה של סוכנים טיפוליים חדשניים 7-10.
Protocol
Representative Results
Discussion
מודל זה פרה קליני עכברי של גרורות בסרטן לבלב בכבד באמצעות טכניקת הזרקת hemispleen הוא הדגם הראשון שתואר, שמשקף רבים של מצבים הקליניים ואימונולוגיים של חולים עם מחלה גרורתית בכבד. מודל זה מציע מספר יתרונות על פני מודלים עכבריים אחרים. ראשית, בניגוד למודלים מהונדסים של סרטן…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
KF וKO הם שיתוף המחברים הראשונים יחד עם KS
עבודה זו נתמכה בחלקה על ידי AHPBA המלגה (KS), NIH K23 CA148964-01 (LZ), בית הספר לרפואה ג'ונס הופקינס קליני פרס המדען (LZ), Viragh קרן והמרכז דלג Viragh סרטן הלבלב באוניברסיטה ג'ונס הופקינס (EMJ ו LZ), הקרן הלאומית ללבלב (LZ), Lefkofsky קרן המשפחה (LZ), SPORE NCI בCA062924 P50 הסרטן במערכת העיכול (EMJ, LZ), הקרן לוסטגרטן (LZ), ומענקי סול גולדמן לבלב מרכז הסרטן (KS , BHE, LZ).
Materials
| Cell culture media and components | will vary depending on cell line | ||
| Phosphate Buffered Saline | Gibco by Life Technologies | 10010-023 | |
| 15 mL centrifigure tubes | Corning | 430052 | |
| Curved Operating Scissor | Roboz Surgical Store | RS-6835 | |
| Micro dissecting Graefe Forceps | Roboz Surgical Store | RS-5130 | |
| Needle holder (regular) | World Precision Instruments, Inc | ||
| 3-0 or 4-0 suture | courtesy of dept of surgery, Johns Hopkins | ||
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, small, angled | Teleflex | 137085 | |
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, medium, angled | Teleflex | 237115 | |
| Weck Horizon medium ligating clips | Teleflex | 002200 | |
| Weck Horizon small ligating clips | Teleflex | 001200 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 3/8" slip tip | Becton Dickinson | 309625 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 5/8" slip tip | Becton Dickinson | 309597 | |
| 9 mm Autoclip Applier | Mikron | 427630 | |
| 9 mm Autoclip | Becton Dickinson | 427631 | |
| Heating pad | Sunbeam | CAT93 | |
| 70% Ethanol | sold by numerous vendors | ||
| Ketamine Hydrochloride | Hospira | 22395DD | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma | X1251 |
Riferimenti
- American Cancer Society. . Cancer Facts & Figures. , (2013).
- Clark, C. E., Beatty, G. L., Vonderheide, R. H. Immunosurveillance of pancreatic adenocarcinoma: insights from genetically engineered mouse models of cancer. Cancer letters. 279, 1-7 (2009).
- Rhim, A. D., et al. EMT and dissemination precede pancreatic tumor formation. Cell. 148, 349-361 (2012).
- Frese, K. K., Tuveson, D. A. Maximizing mouse cancer models. Nature reviews. Cancer. 7, 645-658 (2007).
- Corbett, T. H., et al. Induction and chemotherapeutic response of two transplantable ductal adenocarcinomas of the pancreas in C57BL/6 mice. Cancer research. 44, 717-726 (1984).
- Leao, I. C., Ganesan, P., Armstrong, T. D., Jaffee, E. M. Effective depletion of regulatory T cells allows the recruitment of mesothelin-specific CD8 T cells to the antitumor immune response against a mesothelin-expressing mouse pancreatic adenocarcinoma. Clinical and translational science. 1, 228-239 (2008).
- Jain, A., et al. Synergistic effect of a granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transduced tumor vaccine and systemic interleukin-2 in the treatment of murine colorectal cancer hepatic metastases. Annals of surgical oncology. 10, 810-820 (2003).
- Yoshimura, K., et al. Selective targeting of antitumor immune responses with engineered live-attenuated Listeria monocytogenes. Cancer research. 66, 1096-1104 (2006).
- Yoshimura, K., et al. Live attenuated Listeria monocytogenes effectively treats hepatic colorectal cancer metastases and is strongly enhanced by depletion of regulatory T cells. Cancer research. 67, 10058-10066 (2007).
- Olino, K., et al. Tumor-associated antigen expressing Listeria monocytogenes induces effective primary and memory T-cell responses against hepatic colorectal cancer metastases. Annals of surgical oncology. 19, 597-607 (2012).
- Hingorani, S. R., et al. Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice. Cancer cell. 7, 469-483 (2005).
- Marion, A., Aoudi, W., Basarab, A., Delachartre, P., Vray, D. Blood flow evaluation in high-frequency, 40 MHz imaging: a comparative study of four vector velocity estimation methods. Ultrasonics. 50, 683-690 (2010).
- Zheng, L., et al. Tyrosine 23 phosphorylation-dependent cell-surface localization of annexin A2 is required for invasion and metastases of pancreatic cancer. PloS one. 6, e19390 (2011).
