Доклинические мышиной модели метастазами в печени
Summary
Доклинические, мышиной модели метастазами в печени осуществляется через инъекции технику hemispleen.
Abstract
Многочисленные мышиные модели были разработаны для изучения человека рака и улучшить понимание лечения рака и развития. Здесь, доклинические, мышиный поджелудочной модель опухоли печеночных метастазов через hemispleen инъекции сингенных мышиных панкреатических опухолевых клеток описана. Эта модель имитирует многие из клинических условиях у пациентов с метастазами в печень. Мыши последовательно развиваются метастазы в печени, позволяя для исследования метастатического процесса, экспериментальной проверки терапии, и иммунологии опухолей исследований.
Introduction
Протока поджелудочной железы аденокарциномы (PDA) является четвертой по значимости причиной, связанных с раком смертей в Соединенных Штатах 1. Пятилетняя выживаемость пациентов с метастатическим КПК является 2-12% 1. Хотя адъювантной и неоадъювантной химиотерапии рака поджелудочной железы является более эффективным сегодня, как никогда, все еще остается отчаянную необходимость новых видов лечения.
Развитие новой терапии требует надежных доклинических моделей животных. Хотя подкожные моделях опухолей просты в использовании, недостатки включают неспособность этих опухолей к метастазированию и имитировать прогрессирование опухоли и микросреды видел в человеческих раковых клеток. Генно-инженерные модели, такие, как генно-инженерного мыши, содержащей Kras и p53 нокаут в онкогенных мутаций (модель KPC) 2 и модель КЗК с клонов индикатора YFP (модель PKCY) 3 позволяют по изучению естественных опухолей в immunocompeteмышей NT. Кроме того, микросреда опухоли не изменяется и больше напоминает, что видел в опухолевой прогрессии человеческого. К сожалению, сроки развития опухоли можно изменять в этих моделях, что делает его трудно изучать экспериментальные методы лечения. Кроме того, возвратное скрещивание этих мышей требуется значительное количество времени и финансовых обязательств, что не всегда возможно. Наконец, имплантированные модели ксенотрансплантат PDA мыши вызывают необходимость иммунитетом мышей, которые изменили или отсутствующих микросреды опухоли. В результате, эффективность экспериментальных методов лечения продемонстрировали в этих доклинических моделей часто не воспроизводимы в человеческих клинических испытаний 4.
Эта модель использует мышь hemisplenectomy Panc02 опухолевых клеток, которые в высшей степени онкогенными, индуцированной метилхолантреном поджелудочной железы линии опухолевых клеток, полученная из мышей C57BL / 6 5, 6. Кроме того, другие мышиные линии PDA клеток, полученных от микрофона KPCE может быть использован в этой модели. Schulick др. Ранее разработали методику hemisplenectomy и создал сингенную модель мыши рака толстой кишки метастазы 7. Это hemisplenectomy модель (Рисунок 1) предлагает последовательное и равное прививку опухоли в иммунокомпетентных мышей кредитных себя к исследованию новых терапевтических агентов 7-10.
Protocol
Representative Results
Discussion
Это доклинические мышиной модели рака поджелудочной метастазов рака в печень через инъекции технику hemispleen является первой моделью описано, что отражает многие из клинических и иммунологических условий больных с метастазами в печень. Эта модель имеет ряд преимуществ по сравнению с др…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
KF и КО являются со первая авторов наряду с KS
Эта работа была частично поддержана в AHPBA Fellowship (KS), NIH K23 CA148964-01 (LZ), Johns Hopkins Школа Медицины клинический научный Award (LZ), Viragh Фонд и Центр Пропустить Viragh рака поджелудочной железы в Университете Джона Хопкинса (EMJ и LZ), Национальный Поджелудочная железа Foundation (LZ), Lefkofsky Фонд семьи (LZ), SPORE NCI в двенадцатиперстной кишки P50 CA062924 (EMJ, LZ), Lustgarten Foundation (LZ), и гранты Sol Goldman поджелудочной Центр исследования рака (KS , ППТ, LZ).
Materials
| Cell culture media and components | will vary depending on cell line | ||
| Phosphate Buffered Saline | Gibco by Life Technologies | 10010-023 | |
| 15 mL centrifigure tubes | Corning | 430052 | |
| Curved Operating Scissor | Roboz Surgical Store | RS-6835 | |
| Micro dissecting Graefe Forceps | Roboz Surgical Store | RS-5130 | |
| Needle holder (regular) | World Precision Instruments, Inc | ||
| 3-0 or 4-0 suture | courtesy of dept of surgery, Johns Hopkins | ||
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, small, angled | Teleflex | 137085 | |
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, medium, angled | Teleflex | 237115 | |
| Weck Horizon medium ligating clips | Teleflex | 002200 | |
| Weck Horizon small ligating clips | Teleflex | 001200 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 3/8" slip tip | Becton Dickinson | 309625 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 5/8" slip tip | Becton Dickinson | 309597 | |
| 9 mm Autoclip Applier | Mikron | 427630 | |
| 9 mm Autoclip | Becton Dickinson | 427631 | |
| Heating pad | Sunbeam | CAT93 | |
| 70% Ethanol | sold by numerous vendors | ||
| Ketamine Hydrochloride | Hospira | 22395DD | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma | X1251 |
Riferimenti
- American Cancer Society. . Cancer Facts & Figures. , (2013).
- Clark, C. E., Beatty, G. L., Vonderheide, R. H. Immunosurveillance of pancreatic adenocarcinoma: insights from genetically engineered mouse models of cancer. Cancer letters. 279, 1-7 (2009).
- Rhim, A. D., et al. EMT and dissemination precede pancreatic tumor formation. Cell. 148, 349-361 (2012).
- Frese, K. K., Tuveson, D. A. Maximizing mouse cancer models. Nature reviews. Cancer. 7, 645-658 (2007).
- Corbett, T. H., et al. Induction and chemotherapeutic response of two transplantable ductal adenocarcinomas of the pancreas in C57BL/6 mice. Cancer research. 44, 717-726 (1984).
- Leao, I. C., Ganesan, P., Armstrong, T. D., Jaffee, E. M. Effective depletion of regulatory T cells allows the recruitment of mesothelin-specific CD8 T cells to the antitumor immune response against a mesothelin-expressing mouse pancreatic adenocarcinoma. Clinical and translational science. 1, 228-239 (2008).
- Jain, A., et al. Synergistic effect of a granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transduced tumor vaccine and systemic interleukin-2 in the treatment of murine colorectal cancer hepatic metastases. Annals of surgical oncology. 10, 810-820 (2003).
- Yoshimura, K., et al. Selective targeting of antitumor immune responses with engineered live-attenuated Listeria monocytogenes. Cancer research. 66, 1096-1104 (2006).
- Yoshimura, K., et al. Live attenuated Listeria monocytogenes effectively treats hepatic colorectal cancer metastases and is strongly enhanced by depletion of regulatory T cells. Cancer research. 67, 10058-10066 (2007).
- Olino, K., et al. Tumor-associated antigen expressing Listeria monocytogenes induces effective primary and memory T-cell responses against hepatic colorectal cancer metastases. Annals of surgical oncology. 19, 597-607 (2012).
- Hingorani, S. R., et al. Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice. Cancer cell. 7, 469-483 (2005).
- Marion, A., Aoudi, W., Basarab, A., Delachartre, P., Vray, D. Blood flow evaluation in high-frequency, 40 MHz imaging: a comparative study of four vector velocity estimation methods. Ultrasonics. 50, 683-690 (2010).
- Zheng, L., et al. Tyrosine 23 phosphorylation-dependent cell-surface localization of annexin A2 is required for invasion and metastases of pancreatic cancer. PloS one. 6, e19390 (2011).
