En Prekliniska mus modell av levermetastaser
Summary
En preklinisk, musmodell av levermetastaser utförs via ett hemispleen injektionsteknik.
Abstract
Många musmodeller har utvecklats för att studera mänskliga cancerformer och främja förståelsen för cancerbehandling och utveckling. Här är en preklinisk, mus pankreastumör modell av levermetastaser via en hemispleen injektion av syngena murina pankreastumörceller beskrivs. Denna modell härmar många av de kliniska tillstånd hos patienter med metastaserad sjukdom till levern. Möss konsekvent utveckla metastaser i levern möjliggör undersökning av metastaserande process, experimentell terapi testning och tumörimmunologi forskning.
Introduction
Bukspottskörteln duktal adenocarcinom (PDA) är den fjärde vanligaste orsaken till cancerrelaterade dödsfall i USA 1. Den femåriga överlevnaden för patienter med metastaser handdator är 2-12% 1. Även adjuvant och neoadjuvant kemoterapi för cancer i bukspottskörteln är effektivare i dag än någonsin, fortfarande finns ett desperat behov av nya terapier.
Utvecklingen av nya läkemedel kräver pålitliga prekliniska djurmodeller. Även subkutana tumörmodeller är enkla att använda, nackdelar inkluderar oförmåga dessa tumörer att metastasera och härma tumörprogression och mikromiljöer ses i humana cancerformer. Genmanipulerade modeller, till exempel genetiskt modifierade musen innehåller Kras och p53 knock-in onkogena mutationer (KPC-modellen) 2 och KPC modell med YFP härstamning spårämne (den PKCY modellen) 3 möjliggöra studier av naturligt förekommande tumörer i immunocompetent möss. Dessutom är tumörmikroomgivningen obearbetat och mer nära liknar den som ses i humana tumörprogression. Tyvärr, är tidpunkten för tumörutveckling variabla inom dessa modeller, vilket gör det svårt att studera experimentella behandlingar. Dessutom återkorsning av dessa möss kräver en betydande mängd tid och finansiellt åtagande, vilket inte alltid är möjligt. Slutligen nödvändiggör implanterade modeller xenograft PDA mus nedsatt immunförsvar möss, som har ändrats eller frånvarande tumörmikromiljöer. Som ett resultat av effekten av experimentella terapier demonstreras i dessa prekliniska modeller ofta inte reproducerbara i humana kliniska försök 4.
Denna hemisplenectomy musmodell utnyttjar Panc02 tumörceller, som är en starkt tumörframkallande, metylkolantren inducerad pankreatisk tumörcellinje härledd från C57BL / 6 möss 5, 6. Dessutom kan andra murina cellinjer PDA härledd från KPC mice kan användas i denna modell. Schulick et al. Har tidigare utvecklat en hemisplenectomy teknik och skapade en syngen musmodell av koloncancermetastaser 7. Denna hemisplenectomy modell (figur 1) ger konsekventa och lika tumörinokulation hos immunkompetenta möss utlåning sig till utredningen av nya terapeutiska medel 7-10.
Protocol
Representative Results
Discussion
Denna preklinisk musmodell för cancer i bukspottskörteln metastaser till levern via en hemispleen injektionsteknik är den första modellen som beskrivs som speglar många av de kliniska och immunologiska förhållanden patienter med metastaserad sjukdom till levern. Denna modell erbjuder flera fördelar jämfört med andra murina modeller. Först, till skillnad från transgena modeller av cancer i bukspottskörteln, där endast 30% av mössen utvecklar metastaser i levern och tidpunkten för metastaser bildning är g…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
KF och KO är co första författare tillsammans med KS
Detta arbete stöddes delvis av AHPBA Fellowship (KS), NIH K23 CA148964-01 (LZ), Johns Hopkins School of Medicine Clinical Scientist Award (LZ), Viragh Foundation och Skip Viragh bukspottskörteln Cancer Center vid Johns Hopkins (EMJ och LZ), National Pancreas Foundation (LZ), den Lefkofsky Family Foundation (LZ), NCI SPORE i Gastrointestinal cancer P50 CA062924 (EMJ, LZ), den Lustgarten Foundation (LZ), och Sol Goldman bukspottkörtelcancer Center bidrag (KS , BHE, LZ).
Materials
| Cell culture media and components | will vary depending on cell line | ||
| Phosphate Buffered Saline | Gibco by Life Technologies | 10010-023 | |
| 15 mL centrifigure tubes | Corning | 430052 | |
| Curved Operating Scissor | Roboz Surgical Store | RS-6835 | |
| Micro dissecting Graefe Forceps | Roboz Surgical Store | RS-5130 | |
| Needle holder (regular) | World Precision Instruments, Inc | ||
| 3-0 or 4-0 suture | courtesy of dept of surgery, Johns Hopkins | ||
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, small, angled | Teleflex | 137085 | |
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, medium, angled | Teleflex | 237115 | |
| Weck Horizon medium ligating clips | Teleflex | 002200 | |
| Weck Horizon small ligating clips | Teleflex | 001200 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 3/8" slip tip | Becton Dickinson | 309625 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 5/8" slip tip | Becton Dickinson | 309597 | |
| 9 mm Autoclip Applier | Mikron | 427630 | |
| 9 mm Autoclip | Becton Dickinson | 427631 | |
| Heating pad | Sunbeam | CAT93 | |
| 70% Ethanol | sold by numerous vendors | ||
| Ketamine Hydrochloride | Hospira | 22395DD | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma | X1251 |
Riferimenti
- American Cancer Society. . Cancer Facts & Figures. , (2013).
- Clark, C. E., Beatty, G. L., Vonderheide, R. H. Immunosurveillance of pancreatic adenocarcinoma: insights from genetically engineered mouse models of cancer. Cancer letters. 279, 1-7 (2009).
- Rhim, A. D., et al. EMT and dissemination precede pancreatic tumor formation. Cell. 148, 349-361 (2012).
- Frese, K. K., Tuveson, D. A. Maximizing mouse cancer models. Nature reviews. Cancer. 7, 645-658 (2007).
- Corbett, T. H., et al. Induction and chemotherapeutic response of two transplantable ductal adenocarcinomas of the pancreas in C57BL/6 mice. Cancer research. 44, 717-726 (1984).
- Leao, I. C., Ganesan, P., Armstrong, T. D., Jaffee, E. M. Effective depletion of regulatory T cells allows the recruitment of mesothelin-specific CD8 T cells to the antitumor immune response against a mesothelin-expressing mouse pancreatic adenocarcinoma. Clinical and translational science. 1, 228-239 (2008).
- Jain, A., et al. Synergistic effect of a granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transduced tumor vaccine and systemic interleukin-2 in the treatment of murine colorectal cancer hepatic metastases. Annals of surgical oncology. 10, 810-820 (2003).
- Yoshimura, K., et al. Selective targeting of antitumor immune responses with engineered live-attenuated Listeria monocytogenes. Cancer research. 66, 1096-1104 (2006).
- Yoshimura, K., et al. Live attenuated Listeria monocytogenes effectively treats hepatic colorectal cancer metastases and is strongly enhanced by depletion of regulatory T cells. Cancer research. 67, 10058-10066 (2007).
- Olino, K., et al. Tumor-associated antigen expressing Listeria monocytogenes induces effective primary and memory T-cell responses against hepatic colorectal cancer metastases. Annals of surgical oncology. 19, 597-607 (2012).
- Hingorani, S. R., et al. Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice. Cancer cell. 7, 469-483 (2005).
- Marion, A., Aoudi, W., Basarab, A., Delachartre, P., Vray, D. Blood flow evaluation in high-frequency, 40 MHz imaging: a comparative study of four vector velocity estimation methods. Ultrasonics. 50, 683-690 (2010).
- Zheng, L., et al. Tyrosine 23 phosphorylation-dependent cell-surface localization of annexin A2 is required for invasion and metastases of pancreatic cancer. PloS one. 6, e19390 (2011).
