Karaciğer metastazları Klinik öncesi fare modeli
Summary
Karaciğer metastazlarının klinik öncesi bir sıçangil modeli, hemispleen enjeksiyon tekniği ile gerçekleştirilir.
Abstract
Sayısız fare modelleri, insan kanserleri çalışma ve kanser tedavisi ve kalkınma anlayışı ilerletmek için geliştirilmiştir. Burada, sinjenik mürin pankreas tümörü hücreleri hemispleen enjeksiyon ile karaciğer metastazlarının klinik öncesi, kemirgen pankreatik tümör modeli tarif edilmektedir. Bu model, karaciğere metastatik hastalığı olan hastalarda klinik durumların bir çoğu taklit eder. Fareler sürekli metastatik sürecinin incelenmesi, deneysel tedavi test ve tümör immünoloji araştırma için izin karaciğer metastazı gelişir.
Introduction
Pankreas duktal adenokarsinom (PDA) Amerika Birleşik Devletleri 1 kansere bağlı ölümlerin dördüncü önde gelen nedenidir. Metastatik PDA hastalar için beş yıllık sağkalım% 2-12 1'dir. Pankreas kanseri için adjuvan kemoterapi ve bugün her zamankinden daha etkili olmasına rağmen, hala yeni tedaviler için umutsuz bir ihtiyaç duyulmaktadır.
Yeni tedavilerin geliştirilmesi güvenilir klinik öncesi hayvan modellerinde gerektirir. , Deri altı tümör modelleri kullanmak için basit olmasına rağmen, dezavantajları, insan kanserlerinde görülen tümör ilerlemesi ve mikroçevrelerde metastaz taklit etmek için, bu tümörlerin yetersizlik içerir. Bu p53 ve Kras knock-onkojenik mutasyonların (KMG modeli) 2 ve bir soy YFP izleyicinin (PKCY model) KMG modeli içeren genetik olarak fare gibi genetik olarak modeller, 3 immunocompete doğal olarak oluşan tümörlerin çalışma için izin verirnt farenin. Buna ek olarak, tümör mikro değiştirilmemiş ve daha yakın insan tümör progresyonu görülene benzemektedir. Ne yazık ki, tümör gelişim zamanlaması zor deneysel tedavilerin çalışma yapar, bu model, içinde değişkendir. Ayrıca, bu farelerin geriye dönük melezleştirme zaman ve her zaman mümkün değildir, finansal bağlılık, önemli bir miktarda enerji gerektirmektedir. Son olarak, implante ksenogreft PDA fare modelleri değişmiş fareleri, ya da yoktur tümör mikroçevrelerde immünokompromize gerektirecek. Bunun bir sonucu olarak, bu klinik öncesi modellerinde ortaya deneysel tedavilerin etkinliği sıklıkla insan klinik deneylerinde 4 tekrarlanabilir değildir.
Bu hemisplenectomy fare modeli C57BL / 6 farelerinin 5, 6 türetilmiş bir çok tümörijenik, metilkolantren kaynaklı pankreatik tümör hücre soyu olan Panc02 tümör hücrelerini kullanır. Ayrıca, diğer sıçangil PDA hücre çizgileri KMG mikrofon türetilmişE Bu modelde kullanılabilir. Schulick ve ark. Önce bir hemisplenectomy tekniğini geliştirmiş ve kolon kanseri metastazı 7 genden fare modeli oluşturduk. Bu hemisplenectomy modeli (Şekil 1) yeni terapötik ajanların 7-10 soruşturma için borç verme bağışıklığı farelerde tutarlı ve eşit tümör aşılama sunuyor.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bir hemispleen enjeksiyon tekniği ile karaciğer, pankreas kanser metastazı bu klinik öncesi fare modeli, karaciğere metastatik hastalığı olan hastaların klinik ve immünolojik hastalıkların birçoğu aynaları tarif edilen birinci modelidir. Bu model, diğer sıçangil modellerinde fazla birkaç avantaj sunar. Farelerin sadece% 30 karaciğer ve metastaz oluşumu zamanlamasına metastazları geliştirir pankreas kanseri transjenik modelleri oldukça değişkendir farklı İlk olarak, bu model, farelerin% 100&#…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
KF ve KO KS ile birlikte ilk yazarları co edilir
Bu çalışma AHPBA Kardeşliği (KS), NIH K23 CA148964-01 (LZ), Tıp Johns Hopkins Yüksekokulu Klinik Bilim İnsanı Ödülü (LZ), Virágh Vakfı ve Johns Hopkins Atla Virágh Pankreas Kanseri Merkezi (EMJ ve kısmen desteklenmiştir LZ), Ulusal Pankreas Vakfı (LZ), Lefkofsky Aile Vakfı (LZ), Gastrointestinal Kanserler P50 CA062924 yılında NCI SPORE (EMJ, LZ), Lustgarten Vakfı (LZ) ve Sol Goldman Pankreas Kanseri Merkezi hibeler (KS , BHE, LZ).
Materials
| Cell culture media and components | will vary depending on cell line | ||
| Phosphate Buffered Saline | Gibco by Life Technologies | 10010-023 | |
| 15 mL centrifigure tubes | Corning | 430052 | |
| Curved Operating Scissor | Roboz Surgical Store | RS-6835 | |
| Micro dissecting Graefe Forceps | Roboz Surgical Store | RS-5130 | |
| Needle holder (regular) | World Precision Instruments, Inc | ||
| 3-0 or 4-0 suture | courtesy of dept of surgery, Johns Hopkins | ||
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, small, angled | Teleflex | 137085 | |
| Weck Horizon Open Ligating Clip Applier, medium, angled | Teleflex | 237115 | |
| Weck Horizon medium ligating clips | Teleflex | 002200 | |
| Weck Horizon small ligating clips | Teleflex | 001200 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 3/8" slip tip | Becton Dickinson | 309625 | |
| Syringe, 1 cc, tb syringe, 5/8" slip tip | Becton Dickinson | 309597 | |
| 9 mm Autoclip Applier | Mikron | 427630 | |
| 9 mm Autoclip | Becton Dickinson | 427631 | |
| Heating pad | Sunbeam | CAT93 | |
| 70% Ethanol | sold by numerous vendors | ||
| Ketamine Hydrochloride | Hospira | 22395DD | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma | X1251 |
Riferimenti
- American Cancer Society. . Cancer Facts & Figures. , (2013).
- Clark, C. E., Beatty, G. L., Vonderheide, R. H. Immunosurveillance of pancreatic adenocarcinoma: insights from genetically engineered mouse models of cancer. Cancer letters. 279, 1-7 (2009).
- Rhim, A. D., et al. EMT and dissemination precede pancreatic tumor formation. Cell. 148, 349-361 (2012).
- Frese, K. K., Tuveson, D. A. Maximizing mouse cancer models. Nature reviews. Cancer. 7, 645-658 (2007).
- Corbett, T. H., et al. Induction and chemotherapeutic response of two transplantable ductal adenocarcinomas of the pancreas in C57BL/6 mice. Cancer research. 44, 717-726 (1984).
- Leao, I. C., Ganesan, P., Armstrong, T. D., Jaffee, E. M. Effective depletion of regulatory T cells allows the recruitment of mesothelin-specific CD8 T cells to the antitumor immune response against a mesothelin-expressing mouse pancreatic adenocarcinoma. Clinical and translational science. 1, 228-239 (2008).
- Jain, A., et al. Synergistic effect of a granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-transduced tumor vaccine and systemic interleukin-2 in the treatment of murine colorectal cancer hepatic metastases. Annals of surgical oncology. 10, 810-820 (2003).
- Yoshimura, K., et al. Selective targeting of antitumor immune responses with engineered live-attenuated Listeria monocytogenes. Cancer research. 66, 1096-1104 (2006).
- Yoshimura, K., et al. Live attenuated Listeria monocytogenes effectively treats hepatic colorectal cancer metastases and is strongly enhanced by depletion of regulatory T cells. Cancer research. 67, 10058-10066 (2007).
- Olino, K., et al. Tumor-associated antigen expressing Listeria monocytogenes induces effective primary and memory T-cell responses against hepatic colorectal cancer metastases. Annals of surgical oncology. 19, 597-607 (2012).
- Hingorani, S. R., et al. Trp53R172H and KrasG12D cooperate to promote chromosomal instability and widely metastatic pancreatic ductal adenocarcinoma in mice. Cancer cell. 7, 469-483 (2005).
- Marion, A., Aoudi, W., Basarab, A., Delachartre, P., Vray, D. Blood flow evaluation in high-frequency, 40 MHz imaging: a comparative study of four vector velocity estimation methods. Ultrasonics. 50, 683-690 (2010).
- Zheng, L., et al. Tyrosine 23 phosphorylation-dependent cell-surface localization of annexin A2 is required for invasion and metastases of pancreatic cancer. PloS one. 6, e19390 (2011).
