Приобретение высококачественного цифрового видео из<em> Drosophila</em> Личинки и взрослые особи поведения от боковой перспективе
Summary
Здесь мы опишем простой и широко доступного технику микроскопии на приобретение высококачественного цифрового видео Drosophila взрослого и личинок мутантных фенотипов с боковой перспективе.
Abstract
Дрозофилы является мощным экспериментальная модель системы для изучения функции нервной системы. Генные мутации, которые вызывают дисфункцию нервной системы часто производят жизнеспособный личинок и взрослых, которые имеют передвижения, дефектные фенотипы, которые трудно адекватно описать с текстом или полностью представляют с одной фотографического изображения. Текущие режимы научных публикаций, однако, поддерживает представление цифрового видео СМИ как дополнительного материала, чтобы сопровождать рукопись. Здесь мы опишем простой и широко доступного технику микроскопии для получения высококачественного цифрового видео как дрозофилы личинок и взрослых фенотипов с боковой перспективе. Видео из личинок и взрослых передвижения от побочного зрения выгодно, потому что это позволяет наблюдать и анализировать тонких различий и вариаций в аберрантных поведения локомотивных. Мы успешно использовали технику для визуализации и количественной aberranт ползет поведения в третий личинок возрастной стадии, в дополнение к взрослым мутантных фенотипов и поведения в том числе ухода.
Introduction
Общая плодовой мушки дрозофилы является мощным экспериментальная модель системы для изучения функции нервной системы 1-3. Эволюционная сохранение структуры и функции нервной системы с человека, а также простота генетических манипуляций и огромный массив генетических инструментов делает Drosophila премьерный организм для моделирования человеческого нейродегенеративных заболеваний 4. Генные мутации, вызывающие дисфункции нервной системы часто приводит к жизнеспособным мутант личинок и взрослых дрозофилы с нарушением двигательной. Фенотипы наблюдаемые в нервной системы дефектных мутантов включают снижение темпов передвижения, аномальным координации и спастических движений у взрослых, а также дефицит в перистальтического сокращения стене мускулатуры и частичный паралич личинок. Эти фенотипы были использованы в разработке высокопроизводительных генетических экранов и опорно-двигательного анализов мутантных личинок 5, 6 и 7-10 взрослых дрозофилы направлена на количественное определение нарушения локомоции и идентификации генов, необходимых для функции нервной системы. В то время как эти подходы являются чрезвычайно полезными для количественного личинок и взрослых локомотивных поведения, они не в состоянии передать качественную информацию о каждом конкретном девиантным поведением. Например, в то время как мутант третьего личинки возрастной стадии могут проявлять измененных параметров передвижения, в поведенческой анализа, это может быть непонятно, является ли это результатом изменений в художественной перистальтических сокращений в течение цикла ползать, общее отсутствие координации, или частичным параличом задней тела стена мускулатура. Здесь мы опишем простой и широко доступного технику микроскопии для получения высококачественного цифрового видео Drosophila взрослого и личинок фенотипов локомотивных от боковой перспективе. Цифровое видео приобрела у боковой перспективе позволяет прямое наблюдение и анализ тонких различий в Локомотиве поведения от более информативное ориентации бокового обзора.
Protocol
Representative Results
Discussion
Сила Дрозофилы 'ы в качестве модельной системы для изучения функции нервной системы значительной мере обусловлено сходимости мощных генетических инструментов доступных и широкого круга надежных поведенческих анализов развитой. Здесь мы представляем простой и широко доступн?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы хотели бы выразить признательность Александру Опи для технической помощи и поддержки, Джеймс Бартон за предоставление видео повествование, и Рамона Flatz и Joellen Суини за появление в сопроводительном видео. Эта работа была поддержана MJ Мердок Благотворительный фонд (грант № 2012205 на JED).
Materials
| Trinocular Stereozoom Microscope | Olympus Corporation | SZ6145TR | ½ C-mount was removed and replaced with 1x C-mount |
| 1X C-mount | Leeds Precision Instruments | LSZ-1XCMT2 | |
| Digital Camera Coupler (43mm thread) | Qioptiq Imaging Solutions | 25-70-10-02 | |
| 58mm to 48mm Step Down Ring | B&H Video | GBSDR5848 | |
| 48mm to 43mm Step Down Ring | B&H Video | GBSDR4843 | |
| Lensmate Adapter Kit for Canon G10 | LensMateOnline.com | ||
| Canon PowerShot G10 Digital Camera | Canon U.S.A., Inc. | ||
| 1.5ml Spectroscopic PolystereneCuvette | Denville Scientific | U8650-4 |
References
- Zhang, B., Freeman, M. R., Waddell, S. . Drosophila neurobiology: a laboratory manual. , (2010).
- Frank, C. A., et al. New approaches for studying synaptic development, function, and plasticity using Drosophila as a model system. J Neurosci. 33, 17560-17568 (2013).
- Mudher, A., Newman, T. . Drosophila : a toolbox for the study of neurodegenerative disease. , (2008).
- Bilen, J., Bonini, N. M. Drosophila as a model for human neurodegenerative disease. Annu Rev Genet. 39, 153-171 (2005).
- Jakubowski, B. R., Longoria, R. A., Shubeita, G. T. A high throughput and sensitive method correlates neuronal disorder genotypes to Drosophila larvae crawling phenotypes. Fly (Austin). 6, 303-308 (2012).
- Caldwell, J. C., Miller, M. M., Wing, S., Soll, D. R., Eberl, D. F. Dynamic analysis of larval locomotion in Drosophila chordotonal organ mutants). Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 16053-16058 (2003).
- Jahn, T. R., et al. Detection of early locomotor abnormalities in a Drosophila model of Alzheimer’s disease. J Neurosci Methods. 197, 186-189 (2011).
- Donelson, N. C., et al. High-resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the "tracker" program. PLoS ONE. 7, e37250 (2012).
- Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. High-resolution video tracking of locomotion in adult Drosophila melanogaster. J Vis Exp. (24), (2009).
- Colomb, J., Reiter, L., Blaszkiewicz, J., Wessnitzer, J., Brembs, B. Open source tracking and analysis of adult Drosophila locomotion in Buridan’s paradigm with and without visual targets. PLoS ONE. 7, e42247 (2012).
- Demerec, M. . Biology of Drosophila. , (1965).
- Barron, A. B. Anaesthetising Drosophila for behavioural studies. J Insect Physiol. 46, 439-442 (2000).
- Greenspan, R. J. . Fly pushing : the theory and practice of Drosophila genetics.. , (2004).
- Duncan, J. E., Lytle, N. K., Zuniga, A., Goldstein, L. S. The Microtubule Regulatory Protein Stathmin Is Required to Maintain the Integrity of Axonal Microtubules in Drosophila. 8, e683244 (2013).
- Belmont, L. D., Mitchison, T. J. Identification of a protein that interacts with tubulin dimers and increases the catastrophe rate of microtubules. Cell. 84, 623-631 (1996).
- Cassimeris, L. The oncoprotein 18/stathmin family of microtubule destabilizers. Curr Opin Cell Biol. 14, 18-24 (2002).
