Yüksek-Kalite Dijital Video Edinme<em> Drosophila</em> Bir Yanal Perspektifinden Larva ve Yetişkin Davranışları
Summary
Burada bir yanal bakış açısıyla Drosophila yetişkin ve larva mutant fenotip yüksek kaliteli dijital video elde etmek için basit ve yaygın olarak erişilebilir mikroskopi tekniği açıklar.
Abstract
Drosophila melanogaster sinir sistemi işlevini çalışmak için güçlü bir deneysel model sistem. Sinir sistemi işlev bozukluğuna yol açan gen mutasyonu genellikle Sadece varlığını sürdürebilmiş larvalara ve uygun bir metin ya da tamamen tarif tek bir fotoğrafik görüntü ile temsil zordur lokomosyon bozuk fenotiplere sahiptir yetişkin üretir. Bilimsel yayın mevcut modları, ancak, el yazması eşlik ek malzeme olarak dijital video medya sunulması destekler. Burada bir yanal açıdan hem Drosophila larva ve yetişkin fenotipleri yüksek kaliteli dijital video elde etmek için basit ve yaygın olarak erişilebilir mikroskopi tekniği açıklar. Sapkın lokomotif davranışları gözlem ve ince ayrımları ve varyasyonları analiz sağlar çünkü bir yan görünümden larva ve ergin lokomosyon Video avantajlıdır. Biz başarıyla görselleştirmek ve aberran ölçmek için tekniği kullandıkt tımar dahil yetişkin mutant fenotipleri ve davranışlar yanı sıra, üçüncü larva davranışları sürün.
Introduction
Yaygın meyve sineği Drosophila Melanogaster'in sinir sistemi 1-3 işlevi çalışmak için güçlü bir deneysel model sistem. Evrimsel yapısı ve insan ile sinir sistemi fonksiyonunun korunması, hem de genetik manipülasyon kolaylığı ve genetik araçlar geniş bir dizi Drosophila insan nörodejeneratif hastalıklar 4 modellemek için, ilk organizma sağlar. Sinir sistemi işlev bozukluğuna yol açan gen mutasyonu genellikle bozulmuş harekete karşı canlı mutant larva ve yetişkin Drosophila neden olur. Sinir sistemi bozuk mutantların hepsinde gözlenen fenotipleri lokomosyon, anormal koordinasyon ve erişkinlerde spastik hareketlerinin oranı yanı sıra, gövde duvarı arasında kas kasılması peristaltik eksikliği, ve larvaların kısmi felç azaltılmasıdır. Bu fenotipler yüksek verimli genetik ekranlar ve mutant larva 5 lokomosyon tahlillerinin geliştirilmesinde istismar edilmiş, Lokomosyon bozukluğu miktarının ve sinir sisteminin fonksiyonu için gerekli olan genleri tespit etmeyi amaçlayan 6 ve yetişkin 7-10 Drosophila. Bu yaklaşımlar larva ve ergin lokomotif davranışları ölçmek için son derece yararlı olmakla birlikte, her spesifik anormal davranışları hakkında nitel bilgi iletmek için başarısız. Mutant üçüncü instar larvası bir davranış tahlilinde, değiştirilmiş lokomosyon parametreleri sergileyebilir sırasında bu tarama döngüsü sırasında ritmik kasılmalar peristaltik değişimlerden koordinasyon genel eksikliği ya da arka gövde kısmi felç sonucudur, örneğin, belirsiz olabilir duvar kas. Burada bir yanal bakış açısıyla Drosophila yetişkin ve larva lokomotif fenotipleri yüksek kaliteli dijital video elde etmek için basit ve yaygın olarak erişilebilir mikroskopi tekniği açıklar. Lateral perspektiften alınan dijital video Locomotiv ince ayrımlar doğrudan gözlem ve analiz sağlarBir daha bilgilendirici yan görünüm oryantasyon e davranışlar.
Protocol
Representative Results
Discussion
Sinir sistemi işlevini incelemek için bir model sistem olarak Drosophila melanogaster 'in gücü, büyük ölçüde mevcut güçlü genetik araçları yakınsama ve geliştirilen güçlü davranışsal testlerin geniş bir dizi kaynaklanmaktadır. Burada bir yanal bakış açısıyla Drosophila yetişkin ve larva lokomotif fenotipleri yüksek kaliteli dijital video elde etmek için basit ve yaygın olarak erişilebilir mikroskopi tekniğini sunuyoruz. Başarıyla tanımlama ve posterior felç şi…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar Video anlatım sağlamak için teknik yardım ve destek, James Barton için Alexandra Opie'yi kabul etmek istiyoruz ve beraberindeki video görünmesi için Ramona Flatz ve Joellen Sweeney. Bu çalışma MJ Murdock Charitable Trust (JED Hibe No 2012205) tarafından desteklenmiştir.
Materials
| Trinocular Stereozoom Microscope | Olympus Corporation | SZ6145TR | ½ C-mount was removed and replaced with 1x C-mount |
| 1X C-mount | Leeds Precision Instruments | LSZ-1XCMT2 | |
| Digital Camera Coupler (43mm thread) | Qioptiq Imaging Solutions | 25-70-10-02 | |
| 58mm to 48mm Step Down Ring | B&H Video | GBSDR5848 | |
| 48mm to 43mm Step Down Ring | B&H Video | GBSDR4843 | |
| Lensmate Adapter Kit for Canon G10 | LensMateOnline.com | ||
| Canon PowerShot G10 Digital Camera | Canon U.S.A., Inc. | ||
| 1.5ml Spectroscopic PolystereneCuvette | Denville Scientific | U8650-4 |
References
- Zhang, B., Freeman, M. R., Waddell, S. . Drosophila neurobiology: a laboratory manual. , (2010).
- Frank, C. A., et al. New approaches for studying synaptic development, function, and plasticity using Drosophila as a model system. J Neurosci. 33, 17560-17568 (2013).
- Mudher, A., Newman, T. . Drosophila : a toolbox for the study of neurodegenerative disease. , (2008).
- Bilen, J., Bonini, N. M. Drosophila as a model for human neurodegenerative disease. Annu Rev Genet. 39, 153-171 (2005).
- Jakubowski, B. R., Longoria, R. A., Shubeita, G. T. A high throughput and sensitive method correlates neuronal disorder genotypes to Drosophila larvae crawling phenotypes. Fly (Austin). 6, 303-308 (2012).
- Caldwell, J. C., Miller, M. M., Wing, S., Soll, D. R., Eberl, D. F. Dynamic analysis of larval locomotion in Drosophila chordotonal organ mutants). Proc Natl Acad Sci U S A. 100, 16053-16058 (2003).
- Jahn, T. R., et al. Detection of early locomotor abnormalities in a Drosophila model of Alzheimer’s disease. J Neurosci Methods. 197, 186-189 (2011).
- Donelson, N. C., et al. High-resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the "tracker" program. PLoS ONE. 7, e37250 (2012).
- Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. High-resolution video tracking of locomotion in adult Drosophila melanogaster. J Vis Exp. (24), (2009).
- Colomb, J., Reiter, L., Blaszkiewicz, J., Wessnitzer, J., Brembs, B. Open source tracking and analysis of adult Drosophila locomotion in Buridan’s paradigm with and without visual targets. PLoS ONE. 7, e42247 (2012).
- Demerec, M. . Biology of Drosophila. , (1965).
- Barron, A. B. Anaesthetising Drosophila for behavioural studies. J Insect Physiol. 46, 439-442 (2000).
- Greenspan, R. J. . Fly pushing : the theory and practice of Drosophila genetics.. , (2004).
- Duncan, J. E., Lytle, N. K., Zuniga, A., Goldstein, L. S. The Microtubule Regulatory Protein Stathmin Is Required to Maintain the Integrity of Axonal Microtubules in Drosophila. 8, e683244 (2013).
- Belmont, L. D., Mitchison, T. J. Identification of a protein that interacts with tubulin dimers and increases the catastrophe rate of microtubules. Cell. 84, 623-631 (1996).
- Cassimeris, L. The oncoprotein 18/stathmin family of microtubule destabilizers. Curr Opin Cell Biol. 14, 18-24 (2002).
