Summary

收购高品质的数字视频<em>果蝇</em>从横向角度看幼虫及成虫行为

Published: October 04, 2014
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Summary

在这里,我们描述了一个简单而普及显微镜技术来获得高品质的数字果蝇成虫和幼虫突变表型的视频从横向的角度来看。

Abstract

黑尾果蝇是用于研究神经系统的功能的有力的实验模型系统。造成神经系统功能紊乱的基因突变往往产生可行的幼虫,并有运动缺陷表型,很难用文字充分说明,或用一个摄影图像完全代表成年人。科学出版的电流模式,但是,支持提交的数字视频媒体作为补充材料陪手稿。在这里,我们描述了从横向的角度获得高品质的数字均果蝇幼虫和成虫的表型视频的简单和普及显微技术。影片从一个侧面视图幼虫和成虫的运动是有利的,因为它允许观察和微妙的区别和变化的分析,异常机车的行为。我们已经成功地使用该技术来可视化和量化aberran吨爬行在三龄幼虫的行为,除了成人突变表型和行为,包括梳理。

Introduction

共同果蝇黑腹果蝇是用于研究神经系统1-3的功能的有力的实验模型系统。结构和神经系统与人类的功能进化保守性,以及易于遗传操作和遗传工具繁多,使果蝇的首映有机体来模拟人类神经退行性疾病4。引起的神经系统的机能障碍的基因突变往往导致活突变体的幼虫和成虫的果蝇与受损的运动。在神经系统有缺陷的突变体观察到的表型包括降低速率运动,异常协调,和痉挛性运动中的成年人,以及在体壁肌肉的蠕动收缩缺陷,和幼虫局部麻痹。这些表型都被利用于高通量遗传筛选和突变体幼虫5的运动测定法的发展,6和成人7-10 果蝇旨在量化运动障碍和识别所必需的神经系统的功能的基因。而,这些方法是用于定量幼虫和成虫机车行为极为有用,它们不能传达关于每个特定的异常行为的定性信息。例如,尽管突变体三龄幼虫可在行为分析表现出改变的运动参数,它可能是不清楚的,如果这是在爬行周期改变在节奏蠕动收缩,一般缺乏协调,或者在后体的局部麻痹的结果墙肌肉。在这里,我们描述了从横向的角度获得高品质的数字果蝇成虫和幼虫的表型机车视频的简单和普及显微技术。从横向的角度来看收购数字视频可以直接观察locomotiv微妙的区别和分析Ë行为的更翔实的侧面视图方向。

Protocol

1,体视显微镜系统注意:尽管该协议是很容易适应地耦合到一台数码相机以获取视频的能力几乎任何立体显微镜系统中,提供了在我们的实验中使用的(表的材料/设备)的系统上的信息。 使用三目体视显微镜连接到一个商业的数码相机获取数字视频。 为了夫妻商用数码相机的立体显微镜的三目口,取出立体显微镜的光电管口的½xC型并用1X C型取代。 安…

Representative Results

我们已经成功地使用这种技术来获得和量化与损失的stathmin基因的功能( 图2)14相关联的幼虫行为表型。在中stathmin基因编码划分的微管蛋白二聚体的可溶性微管蛋白的游泳池的微管调节蛋白和微管结合,并促进其分解15,16。中stathmin功能是必需的,以保持在周围神经14的轴突微管的完整性。中断在果蝇三龄幼虫的结果在表型中stathmin活性,?…

Discussion

果蝇的实力作为研究神经系统的功能模型系统主要来自强大的遗传工具可用收敛性和强大的行为分析的广泛的发展。在这里,我们提出了从横向的角度获得高品质的数字果蝇成虫和幼虫的表型机车视频的简单和普及显微技术。我们已经成功地使用这种方法来表征和量化后麻痹的严重程度“尾巴翻转'通过直接测量,该尾部从水平轴在爬行周期14所提出的最大角度在神经系统…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

作者要感谢亚历山大欧派提供技术援助和支持,詹姆斯·巴顿提供视频旁白和雷蒙娜Flatz和Joellen斯威尼对于出现在影随行。这项工作是由MJ默多克慈善信托基金(批准号:2012205,以JED)的支持。

Materials

Trinocular Stereozoom Microscope Olympus Corporation SZ6145TR ½ C-mount was removed and replaced with 1x C-mount
1X C-mount Leeds Precision Instruments LSZ-1XCMT2
Digital Camera Coupler (43mm thread) Qioptiq Imaging Solutions 25-70-10-02
58mm to 48mm Step Down Ring B&H Video GBSDR5848
48mm to 43mm Step Down Ring B&H Video GBSDR4843
Lensmate Adapter Kit for Canon G10 LensMateOnline.com
Canon PowerShot G10 Digital Camera Canon U.S.A., Inc.
1.5ml Spectroscopic PolystereneCuvette Denville Scientific U8650-4

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Cite This Article
Zenger, B., Wetzel, S., Duncan, J. Acquisition of High-Quality Digital Video of Drosophila Larval and Adult Behaviors from a Lateral Perspective. J. Vis. Exp. (92), e51981, doi:10.3791/51981 (2014).

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