신생아 마우스의 정맥 주사
Summary
소아 질환의 동물 모델은 초기 발병과 적극적인 질병의 진행을 경험할 수 있습니다. 임상 어린 마우스 모델에 관련된 치료 전달 기술적 어려울 수있다. 이 프로토콜은 생후 두 생후 일 이내 신생 쥐 비 침습적 정맥 주입 방법을 설명한다.
Abstract
정맥 주사는 치료제를 제공하기 위해 임상 적으로 적용 가능한 방법이다. 성인 설치류 큰 동물의 경우, 정맥 주사는 기술적으로 가능하고 일상이다. 그러나 일부 마우스 모델은 잠재적 인 치료의 관리가 어려워 빠른 진행과 질병의 조기 발병을 가질 수 있습니다. 시간 (또는 안면) 정맥은 마우스에서 이어 버드에 전방 및 해부 현미경을 사용하여 머리의 어느 한쪽에 생후 명확 처음 이틀 동안 표시된다. 이 윈도우 동안, 시간적 정맥 50 μl의 최대 양으로 주입 될 수있다. 주사는 안전하고 잘 새끼와 어미 모두 허용합니다. 전형적인 주입 과정은 강아지가 홈 케이지로 복귀 된 후 1-2 분 이내에 완료된다. 제 생후함으로써 정맥 시각화 어렵고 주입 과정은 기술적으로 불안정해진다. 이 기술은 아데노 – 관련 바이러스 (AAV) VECT의 전달을 위해 사용되어왔다차례로 선택한 바이러스 혈청 형에 따라 동물의 수명을 거의 몸 전체, 안정적인 형질 전환 유전자 발현을 제공 할 수 있습니다 ORS.
Introduction
소아 질병의 쥐 모델에서 중추 신경계 (CNS)에 대한 치료제의 배달는 도전 할 부분이 남아있다. 모델 신생아 질병 상태를 직접 CNS 내에서 적절한 구조에 삽입하기 어려울 수 있으므로 소형 및 발달 미숙 한 것을 마우스. 치료제의 혈관 내 주입 CNS 1-5과 3,5-9 망막을 포함한 몸 전체에 세포, 약물, 또는 바이러스 벡터를 제공 할 수있는 비 침습적, 내약성 방법이다. 이전 출판물은 해부 현미경 11, 12 않고, transilluminator가 10, 11을 사용하여 시간적 얼굴 정맥 주입을 설명, 또는 두 사람을 요구하는 것은 (10)를 삽입 할 수 있습니다. 한 개인이 새끼를 주입 할 수 있으며, 광원은 시간적 정맥이 강아지를 만지고 고정 표면 외과 테이프의 필요성 또는 강아지의 부착을 제거하지 않은 볼 때문에 프로토콜에서 설명 주입 기술은 유리한transilluminator가 11 등. 마우스에 아데노 – 관련 바이러스 벡터 혈청 형 9 (AAV9)의 전달은 뇌와 척수 (그림 1)를 통해 신경 세포와 성상 세포에 강력한 표현을 생성합니다. 피상적 시간적 안면 정맥 내로 바이러스 벡터의 전달을 확실하게 혈관 신경 근육 질환 소아 척수 근육 위축 (SMA) 2,4,13,14을 치료하는 신생아 마우스에서 다양한 연구에 사용 된 궁극적으로 처리 된 마우스의 수명을 증가되었다.
신생아 쥐의 혈관 내 주입도 효과적으로 말초 신경계 및 말초 기관 (그림 2)을 대상으로합니다. AAV의 주입 후, 후근 신경절, 간, 심장, 골격근, 폐, 그리고 창자의 myenteric 신경 얼기의 전달은 1,3,6,7,15을 관찰되었다. CNS와 주변의 대폭적인 전달은 글로벌 표현을 필요로하는 질병에 대한 분사 이상이 방법을 만든다이러한 고셔병 (16) 및 기타 리소좀 저장 질환 17, 18, 판자의 질병과 관련된 신경 ceroid lipofuscinoses, 19 Bardet-Biedl 증후군, 유아 (20)에서 발생하는 증상의 발병에 유전 적 다중 시스템 장애로 형질 전환 유전자,. 혈관 신생 생쥐에 주입은 모델링 시스템 전체 소아 질환의 신규 한 방법으로 고려되어야한다. 이 기술은 큰 동물 모델 5,21로 번역 한 내용 및 혈관 내 주입 이미 치료제를 전달 임상 적으로 허용되는 방법으로 존재한다.
현재의 프로토콜은 출생 후 하루 2 사출 늦어도 피상적 인 시간적 얼굴 정맥을 통해 신생아 쥐에 에이전트를 도출하는 간단하고 효율적인 방법을 설명하는 하나의 완성 할 수있다, 개인 연습을 잘 새끼와 어미 모두 허용됩니다. 새끼 최소한의 고통을 경험하고 신속하게 복구 할 수 있습니다. ImportanTLY, 성공적인 주입은 관리 에이전트의 글로벌 배달 될 것입니다. 이 프로토콜은 바이러스 벡터, 신생아 쥐에 제약 제제 또는 세포의 전달에 적합하다.
Protocol
Representative Results
Discussion
CNS 또는 몸 전체 에이전트의 혈관 배달 질환의 신생아 쥐 모델에서 어렵다. 설명 프로토콜은 정맥 최소한의 장비 요구 사항에 신생아 쥐에 솔루션을 관리 할 수있는 빠르고, 비교적 비 침습적 방법입니다. 시간적 얼굴 정맥을 육안으로 볼 수 있지만, 주사는 특히 unpracticed 인젝터, 현미경 및 광섬유 광원의 사용과 높은 정확도를 가질 수있다. 신생아 마우스에서 혈관 내 주사는 높은 성공률 <sup…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 금융 지원을위한 SMA의 NINDS, FightSMA, 가족을 인정하고 싶습니다. SEGL은 NINDS 훈련 보조금 # 5T32NS077984-02에 의해 지원됩니다.
Materials
| Name of Material/ Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| Thinpro Insulin Syringe | Terumo | SS30M3009 | 3/10cc, 3/8" needle, 30G, 1 per mouse |
| Evans Blue Dye | Sigma-Aldrich | E2129 | Dilute to 1% with 1X Phosphate Buffered Saline |
| Cotton Tipped Applicators | Fisher Scientific | 23-400-101 | |
| Fiber Optic Light Source | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
| Dissecting Microscope |
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