간내 종양 성장에 대한 간 절제술의 영향
Summary
A high incidence of tumor recurrence after resection of liver metastases remains an unsolved problem. The illustrated mouse model may be useful to investigate the reasons for such recurrences. It combines a liver resection model with intrahepatic tumor cell injection for the first time.
Abstract
전이성 간 병변의 절제 후 종양 재발의 높은 발생률은 미해결 문제로 남아있다. 일상적인 임상 영상에 의해 검출하지 않은 작은 종양 세포 예금은, 간 절제술 후 간 재생 인자에 의해 자극 될 수있다. 이 요인은 종양 재발에 중요한있는, 그러나 완전히 명확하지 않다.
제시된 마우스 모델 간 절제술 후 재발 성 악성 병변의 발달에서 중요한 역할을하는 메커니즘을 탐구하는 데 유용 할 수있다. 이 모델은 생쥐의 간 조직 제거 및 (주사) 종양 유도의 정의 양의-수행하기 쉬운 재현 기술을 결합합니다. 동물은 단일 개복술, 30 %의 간 절제술, 또는 70 %의 간 절제술 중 처리 하였다. 모든 동물은이어서 나머지 간 조직으로 종양 세포 주입을 받았다. 관찰 2 주 후, 간 종양 크기와 중량을 평가 하였다면역 조직 화학에 의해 조사 하였다.
70 %의 간 절제술 후 종양 부피 및 중량을 크게 단독 개복술 (p <0.05)과 비교하여 증가 하였다. 또한, 면역 조직 화학 (사료된다)를 절제 군에서 증가 된 종양 증식률 (p <0.05).
이러한 결과는 간내 종양 성장 간 재생 메커니즘의 영향을 보여준다. 조직 학적 정밀 검사 또는 RNA 분석 등의 방법으로 결합 된 설명 마우스 모델은 간에서 종양 성장 및 전이 재발에 관여하는 다른 요인 규명을위한 기반이 될 수 있습니다. 포스트 간절 전이의 환경에서 특정 문제를 탐색 할 때 술 관찰의 길이와 같은 변수들의 상당수는 주사 또는 주입 및 간 절제술의 타이밍에 사용되는 세포주는 멀티 앵글을 제공한다. 이 절차의 제한은 프입니다thorization 적절한 동물 실험 시설 및 특정 장비의 취득에 동물 절차, 액세스를 수행 할 수 있습니다.
Introduction
대장 암 (CRC)은 모든 악성 종양의 약 9 %를 차지한다. 그것은 미국과 전 세계 두, 세 번째 가장 흔한 암이다. 30 만에서 CRC 범위에서 글로벌 사망률은 1 년 당 50 만 이상합니다. 환자의 20 %는 대장 종양의 발견에 간 전이 고통. 절제 전이는 일반적으로 부분 간 절제술의 2,3에 의해 처리된다. 개선 된 수술 기법, 새로운 복합 전략과 절제 전이의 새로운 정의는 환자 4의 증가에 대한 가능한 부분 간 절제술의 치료를 렌더링합니다.
보조 간 악성 종양의 재발은, 그러나, 현대 위장 수술에 도전 임상 적 후유증이다. 간 전이 절제술을 시행 CRC 환자는 자신의 남은 간 5에서 새로운 종양을 개발의 30 ~ 50 %의 확률. 따라서,에 대한 추가 연구가 요구된다간 전이의 재발에 관여하는 메커니즘.
약 70 %의 간 절제술은 일반적으로 나머지 간 조직에서 몇 주 내에 보상된다. 이 재생이 성장 인자 베타 (TGF-β), 혈관 내피 성장 인자 바뀌는 인터루킨 6 (IL-6), 종양 괴사 인자 알파 (TNF-α), 간세포 성장 인자 (HGF) 등의 사이토 카인을 포함한 여러 메커니즘을 수반 (VEGF ) 매트릭스 메탈로 프로테아제 (MMP-2와 MMP-9) 및 CXC 케모카인-6-11. 이러한 물질은 간 재생을 지원하며, 또한 일상적인 임상 촬상에 의해 검출되지 않은 나머지 간 작은 종양 세포 침전물의 성장을 유도하여 주 및 보조 간 종양의 높은 재발률을 담당 할 수있다. 이 인과 관계는 지금까지 입증되지 않았습니다.
다음과 같은 가설이 설정되었다. 부분 간 절제술 후, 증식 인자 그 라이브에 대한 책임이 있습니다R 비대는 간에서 이전에 알려지지 않은 종양 세포의 증식을 유도 할 수있다. 마우스 모델의 간 절제술 종양 유도의 기술을 조합 한 설계되었다. 서른 무 흉선 누드 foxn1nu / 뉴 쥐 10 마리씩 세 군으로 나누었다. 이들을 각각 단독 개복술 (그룹 A) 중 하나를 처리하고, 30 %의 간 절제술 (그룹 B), 또는 70 %의 간 절제술 (그룹 C). 모든 그룹의 동물이어서 휴면 종양 세포를 시뮬레이션 간 정의 된 나머지 부분으로 종양 세포 주입을 받았다. 다음 2 주 동안 관찰과 동물은 종양의 성장과 간 비대을 평가.
목적은 사후 간절 종양 형성에 역할을 할 수있는 분자 병인 인자를 검색하는 데 사용될 수있는 모델을 생성 하였다. 이 방법을 평가하는데 유용 할 수 간 재생에 관련된 내분비 인자 원점; 간내 다치 대한 책임 메커니즘또는 간 절제술 후 성장; 간내 및 종양 성장의 유도에 필요한 간 절제술 볼륨. 그들은 근본적 생물학적 원리의 이해와 개선 된 치료법에 의해 인간에게 이익을 기대할 수있다 기술의 발전에 기여할 것을 약속 때문에 다음 메소드는 동물에서 수행되었다. 때문에 이러한 문제에 관여하는 메커니즘, 그것은 시험 관내 방법은 인간 병리의 현실적인 표현을 제공 할 수 있으므로 생체 내에서 검사했다.
이 연구는 종양의 재발을 감소시키기위한 예방 적 치료 옵션에 대한 관련 목표의 발견으로 이어질 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
설치류에서 수술을 수행 이전 실험 바이어스를위한 소스로 봉사 할 수 있었다 특정 변수를 식별 할 수 있었다. 안전하고 유효한 결과를 얻기 위해, 다음과 같은주의 사항을 고려하십시오.
일상적인 사전 연산 금식 간 재생 (13, 14)를 억제 할 수 간 지방증 (12), 발생할 수 있습니다. 그것은 따라서 사용하지 않는 것이 좋습니다. 간세포의 가장 높은 유사 분열 활?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
특별 감사는 기술적 인 질문에 그의 도움 박사 벤자민 Motsch로 이동합니다. 저자는 또한 멀티미디어 지원을 위해 박사 마커스 Forschner 및 BIRK 뮐러을 인정하고 싶습니다, 그녀의 편집 전문 지식에 대한 에리카 Magelky 리사 호르 눙 박사 롤랜드 Jurgons 모든 프란츠 – Penzoldt-센터, 대학 교수 스테판 폰 Hörsten ( 동물의 취급 및 관리에 자신의 전문성에 대한 에를 랑겐). 우리는 MC38 종양 세포를 제공하기위한 임상 화학 연구소, 하이델베르크, 독일 대학의 의학 교수 만하임 교수 마이클 Neumaier 감사합니다.
본 작품은 학위 취득에 대한 요구 사항의 이행을 수행 하였다 박사는 "의대를." 프리드리히 – 알렉산더 – 대학 에를 랑겐 – 뉘른베르크 (FAU)에서.
Materials
| Equipment | |||
| Operation Microscope | Zeiss | OPMI-1 FC S21 | |
| Induction Cage (Plexiglas Box) | UNO BV, Netherlands | 180000132 | |
| Flowmeter + Connection Kit | UNO BV, Netherlands | 180000008 | |
| UNO Vaporizer Sigma Delta | UNO BV, Netherlands | 180000002 | |
| Key Filler for Anesthetic | UNO BV, Netherlands | 180000010 | |
| Activated Charcoal Filter Adsorber | UNO BV, Netherlands | 180000140 | |
| Gas Exhaust Unit | UNO BV, Netherlands | 180000118 | |
| Face Mask for mouse | UNO BV, Netherlands | 180000065 | |
| Vaporizer Stand | UNO BV, Netherlands | 180000006 | |
| Heat lamp | Physitemp Instruments | HL-1 | |
| Styrofoam Pad | RAYHER | 30074000 | |
| Third Hand Tool | TOOLCRAFT | ZD-10F | |
| Precision Scales | Kern | EW 220-3NM | |
| Scales | Kern | EMB 500-1 | |
| Sliding Caliper | MIB | MIB 82026100 | |
| Microdissection forceps | Braun/Aesculap | BD195R | |
| Microdissection scissors | Braun/Aesculap | FD100R | |
| Microdissection needle holder | Braun/Aesculap | BM563R | |
| Retractor | Fine Science Tools (F.S.T.) | No. 17001-0 | Type: Bowmann |
| Clamp | Braun/Aesculap | BJ002R | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Expendable Items | |||
| (NOTE: Quantities are per animal and procedure) | |||
| Foliodrape sterile cover (45x75cm) | Hartmann | 2775001 | |
| Sterile Cotton Swabs (2x) | Hartmann | 4700151 | Peha |
| Sterile fluid (0,9%NaCl) | Braun | 3570310 | PZN=04454809 |
| Disinfectant (Softasept – 250ml) | Braun | 3887138 | PZN=0762008808505018 |
| 2 x 1ml syringe (Injekt-F ) | Braun | 9166017V | |
| 26G canula (Sterican) – for Carprofen injection | Braun | 4665457 | |
| 30G canula (Sterican) – for Tumor injection | Braun | 4656300 | |
| Caprofen (=Rimadyl) | Pfizer | QM01AE91 | |
| Metamizole (=Novaminsulfon) | Ratiopharm | 16543.00.00 | |
| 4-0 Vicryl suture | Ethicon | J835G | |
| 5-0 Prolene suture | Ethicon | 8618G | |
| SafeLock Flex-Tube 1.5mL | Eppendorf | 22363778 | |
| 4×4 Gauze Sponge | Kendall/Covidien | UPC: 728795135355 | ASIN: B005BFQTWM |
| Large paperclip | ACCO | A7072510G | |
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Animals | |||
| Female athymic nude-foxn1nu/nu | Harlan Laboratories B.V. | Code 069 | |
Riferimenti
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