Murino Experimental Modelo de desenvolvimento do tumor original e Peritoneal Metástase<em> via</em> Ortotópico injetar células do ovário Carcinoma

Summary

Para esclarecer o processo de várias etapas de difusão peritoneal de carcinoma dos ovários, o presente estudo apresenta um modelo experimental murino de desenvolvimento do tumor original e metástases através de inoculação peritoneal ortotópico com essas células tumorais.

Abstract

carcinoma epitelial do ovário (EOC) está associada a um prognóstico ruim porque mostra disseminação peritoneal. Para melhorar o prognóstico, é importante controlar a disseminação peritoneal. No entanto, ainda não está claro como as células tumorais separar de lesões primárias e anexar ao mesotélio. O estabelecimento de um modelo animal apropriado é necessário para obter uma compreensão do mecanismo de disseminação peritoneal in vivo. No estudo actual, introduz-se o processo a partir da injecção local de células EOC para dentro da superfície do ovário murino para o desenvolvimento de metástases, incluindo o peritoneu e os órgãos distantes. Foram utilizados ratinhos nus fêmea (BALB / c nu / nu) com 8 semanas de idade. Sob um campo de vista microscópico, células EOC (1 x 10 ⁵ células / ml de matriz de médio extracelular (ECM) à base de hidrogel / ovário unilateral / mouse) foram injetados em ovários murino através de uma abordagem retroperitoneal pelo flanco dorsal. Este método proposto é um less procedimento invasivo para o mouse e minimiza os danos ao ovário. Aqui, descrevemos os passos metodológicos para o desenvolvimento da formação do tumor original e metastático do EOC.

Introduction

Carcinoma epitelial do ovário (EOC) representa a maior taxa de mortalidade relacionada ao câncer entre as doenças malignas ginecológicas ^1. EOC está associada a um mau prognóstico, principalmente devido ao seu final sintomatologia, e é muitas vezes associado a várias disseminações intraperitoneal e metástases à distância ^2-4. disseminação peritoneal é um processo multi-passo. Em primeiro lugar, as células de tumor a partir de separar as lesões primárias, e migrar para dentro da cavidade abdominal. Quando as células tumorais anexar ao mesotélio peritoneal, eles começam a invadir os tecidos através do mesotélio ^5,6. A fim de melhor compreender a biologia do tumor (por exemplo, a progressão do câncer e resposta terapêutica), modelos de ratos fornecer uma riqueza de informações. Um xenoenxerto de cancro humano com células é amplamente utilizada para modelos de ratos em que as células de cancro humano são inoculados por via subcutânea, por via intraperitoneal, por via intravenosa, e ortotopicamente. Um modelo animal com um ortotopicamente grafted tumor pode gerar mais eficientemente e com precisão os resultados que reflectem o ambiente tumoral em seres humanos, em comparação com um modelo animal com um tumor heterotopicamente enxertado. Por isso, para muitos tumores humanos, os modelos de transplante ortotópico foram estabelecidas ^7-11.

Aqui, descrevemos a inoculação ortotópico de células EOC humanos através de uma abordagem retroperitoneal pelo flanco dorsal, que tem capacidade de invasão limitada em comparação com a inoculação ventral. Esta técnica pode proporcionar uma variedade de informações úteis sobre EOC, particularmente o mecanismo de difusão intraperitoneal.

Protocol

O protocolo de tratamento segue as orientações para a experimentação animal adotado pela Universidade de Nagoya. 1. Preparação de suspensões de células linha de células humanas ovário clara carcinoma de células. Manter ES-2 em células 12 meio RPMI-1640 com 10% de soro fetal de bovino (FBS) e penicilina / estreptomicina (penicilina: 100 unidades / ml, estreptomicina: 0,1 mg / ml). As células de cultura a 37 ° C em uma incubadora de CO 2 …

Representative Results

Seis ratinhos nus tinham os seus ovários inoculados com a linha de células de carcinoma de células claras humano ES-2, tal como descrito no presente protocolo. Como mostrado na Figura 1A, após 2 semanas, 5 dos 6 ratos tinha um tumor no ovário inoculados com células ES-2, mas não havia nenhum tumor no ovário contralateral sem inoculação (utilizado como um controlo). Além disso, 2 dos 5 camundongos mostraram várias disseminações peritoneal com ascite. C…

Discussion

Os modelos animais são essenciais para analisar os mecanismos de desenvolvimento de tumores, progressão, metástase, e a eficácia do fármaco contra as células cancerosas. Os ratinhos portadores de células cancerosas do ovário humano, também têm sido usados ​​como um modelo animal. Aqui, descrevemos um procedimento menos invasivo para a administração de células tumorais de ovário em um sítio ortotópico. Usando este procedimento, a inoculação para o ovário através de uma abordagem retroperitoneal pe…

Materials

Matrigel matrix	BD	354234	ECM-based hydrogel
Insulin syringe	TERUMO	SS-05M2913	1/2cc, 29Gx1/2"
Suturing needle with suture			11mm, 3/8, Nylon6-0
Reflex 7mm Wound Clip Applier	CellPoint Scientific	204-1000
Reflex 7mm wound clips	CellPoint Scientific	203-1000