Summary

Murine flexor कण्डरा चोट और मरम्मत सर्जरी

Published: September 19, 2016
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Summary

हाथ में flexor tendons सामान्यतः घायल हुए हैं, बिगड़ा हाथ समारोह के लिए अग्रणी। हालांकि, निशान ऊतक चिकित्सा प्रतिक्रिया अच्छी तरह से विशेषता नहीं है। flexor कण्डरा चिकित्सा का एक murine मॉडल यहां प्रदर्शन किया है। यह मॉडल घाव भरने की प्रक्रिया के समग्र समझ बढ़ाने और चिकित्सा में सुधार करने के लिए चिकित्सकीय दृष्टिकोण का आकलन कर सकते हैं।

Abstract

कण्डरा कंकाल की मांसपेशियों और हड्डियों को जोड़ता है, लगभग पूरे शरीर की आवाजाही की सुविधा। हाथ में, flexor tendons (FTS) उंगलियों और सामान्य हाथ समारोह के बल सक्षम करें। Fts को चोट लगने की घटनाएं आम हैं, और संतोषजनक चिकित्सा अक्सर अतिरिक्त निशान ऊतक और कण्डरा और आसपास के ऊतकों के बीच adhesions के कारण बिगड़ा हुआ है। हालांकि, छोटे एफटी मरम्मत की आणविक और सेलुलर घटकों के बारे में जाना जाता है। कि अंत करने के लिए, एफटी मरम्मत की एक murine मॉडल है कि इस प्रस्ताव का बिगड़ा रेंज सहित मनुष्यों में उपचार के कई पहलुओं का स्मरण दिलाता है और यांत्रिक गुणों में कमी आई है, विकसित किया गया है और पहले से वर्णन किया। यहाँ इस शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया का एक में गहराई से प्रदर्शन प्रदान की जाती है, transection और murine हिंद पंजा में flexor digitorum longus (FDL) कण्डरा के बाद मरम्मत से जुड़े। इस तकनीक जीन लाभ या हानि के समारोह के प्रभाव का आकलन, और effi परीक्षण करने के लिए, विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं के वंश विश्लेषण का संचालन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकताचिकित्सा की प्रक्रिया में औषधीय हस्तक्षेप के cacy। i) murine हिंद पंजा, जहां transection और मरम्मत होने के मध्य भाग में FDL पट्टा, एक श्लेष म्यान से घिरा हुआ नहीं है: हालांकि, इस मॉडल के लिए दो प्राथमिक सीमाएं हैं। इसलिए इस मॉडल निशान गठन की प्रक्रिया के लिए म्यान के संभावित योगदान के लिए खाते में नहीं है। द्वितीय) की मरम्मत साइट की अखंडता की रक्षा करने के लिए, एफटी myotendinous जंक्शन पर जारी की है, कण्डरा के यांत्रिक बलों कम है, की संभावना बढ़ गई निशान गठन में योगदान दे। प्रवाह cytometric विश्लेषण के लिए चिकित्सा की प्रक्रिया के दौरान एफटी का दानेदार ऊतक से पर्याप्त कोशिकाओं का अलगाव चुनौतीपूर्ण साबित कर दिया है; इन कोशिकाओं को ध्यान केंद्रित करने की कोशिका विज्ञान centrifugation एक वैकल्पिक विधि का इस्तेमाल किया है, और सेल की तैयारी की पीढ़ी जिस पर immunofluorescent लेबलिंग किया जा सकता है के लिए अनुमति देता है। इस विधि के साथ, एफटी उपचार के दौरान कोशिकाओं या ब्याज की प्रोटीन की मात्रा का ठहराव संभव हो जाता है।

Introduction

प्रकोष्ठ के flexor मांसपेशियों और डिजिटल शीथ के साथ संगीत कार्यक्रम में हाथ काम में flexor tendons अंकों के बल और हाथ की लोभी समारोह में सक्षम है। Flexor tendons हाथ की हथेली पहलू के साथ चलाने के; इस अपेक्षाकृत सतही स्थान अक्सर हाथ करने के लिए आघात के दौरान flexor tendons के घायल होने का परिणाम है। Tendons एक निशान ऊतक प्रतिक्रिया के बजाय सामान्य कण्डरा ऊतक 1 के उत्थान के माध्यम से चंगा। हालांकि इस निशान ऊतक कण्डरा को निरंतरता प्रदान करता है, समारोह नाटकीय रूप से स्वस्थ कण्डरा के सापेक्ष कम हो जाती है। कण्डरा-निशान ऊतक कंपोजिट बिगड़ा यांत्रिक गुणों 1 की विशेषता है, और अधिक होने की संभावना टूटना मरम्मत tendons प्रतिपादन। इसके अलावा, निशान ऊतक मूल निवासी कण्डरा कोलेजन फाइबर संरचना के संगठन का अभाव है, पट्टा आकार और थोक में वृद्धि हो जाती है। कण्डरा-म्यान इकाई की शारीरिक कमी है, यहां तक ​​कि पट्टा आकार में एक मामूली वृद्धि को देखते हुए यह कर सकते तेजी से लालकण्डरा के ग्लाइडिंग समारोह, और गति और हाथ समारोह की इसलिए अंकों रेंज UCE।

Flexor tendons के लिए 1960 चोटों, विशेष रूप से हाथ की जोन द्वितीय में उन लोगों के लिए पहले, नियमित रूप से है कि इन मरम्मत 2 के साथ पैदा हुई उपचार में गंभीर जटिलताओं के कारण मरम्मत नहीं कर रहे थे। हाथ के इस क्षेत्र में 'कोई आदमी की भूमि' 3 के रूप में भेजा गया था। हालांकि, शल्य चिकित्सा तकनीक, सीवन पैटर्न और भौतिक चिकित्सा पुनर्वास प्रोटोकॉल में सुधार नाटकीय रूप से flexor कण्डरा मरम्मत 2 के परिणामों में सुधार हुआ है। इन अग्रिमों के बावजूद, मरम्मत का 40% तक पर्याप्त आसंजन गठन में परिणाम हाथ समारोह 4 बाधित करने के लिए। इसलिए, एक जैविक दृष्टिकोण चिकित्सा में सुधार की आवश्यकता है। दुर्भाग्य से, बहुत कम सेलुलर और आणविक स्तर पर पट्टा घाव भरने की प्रक्रिया के बारे में जाना जाता है। इस प्रकार, लक्ष्य एक murine मॉडल है कि मौलिक समझ में सुधार करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है विकसित किया गया थाflexor कण्डरा चिकित्सा और निशान गठन प्रतिक्रिया के सेलुलर और आणविक घटकों, चिकित्सा में सुधार करने के उपन्यास चिकित्सकीय लक्ष्यों की पहचान करने के लिए एक साधन के रूप में के जी।

बड़ा पशु मॉडल flexor कण्डरा घाव भरने की प्रक्रिया की समझ को आगे बढ़ाने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाई है। कुत्ते और खरगोश के अध्ययन flexor tendons 5,6 के दोनों आंतरिक और बाह्य उपचार करने की क्षमता का प्रदर्शन किया है, स्थिरीकरण से 7 आसंजन गठन रिश्तेदार को कम करने में जल्दी नियंत्रित निष्क्रिय गति का महत्व है, साथ ही चिकित्सा की प्रक्रिया 8 के आधार पर अलग अलग सीवन पैटर्न का प्रभाव 9। इसके अलावा, कुत्ते मॉडल translational ऊतक इंजीनियरिंग दृष्टिकोण का परीक्षण चिकित्सा 10 में सुधार करने में उपयोगी किया गया है। हालांकि, वहाँ एक बड़े जानवर मॉडल के लिए एक murine मॉडल रिश्तेदार, रिश्तेदार लागत, murine विशिष्ट अभिकर्मकों की उपलब्धता सहित का उपयोग करने में कई महत्वपूर्ण लाभ कर रहे हैं, और वैश्विक knoc पैदा करने में आसानीकश्मीर बहिष्कार या ऊतक विशेष विलोपन / overexpression निर्माणों। इसके अलावा, flexor tendons 11 के संबंध में मानव और चूहों के बीच कार्यात्मक समानता एक murine मॉडल विकसित करने में संभावित उपयोगिता संकेत मिलता है।

flexor कण्डरा transection और मरम्मत mimics नैदानिक ​​चिकित्सा के कई पहलुओं, प्रचुर मात्रा में निशान ऊतक और बिगड़ा यांत्रिक गुणों के गठन सहित के एक murine मॉडल का विकास। मॉडल यहाँ वर्णित आदेश मरम्मत साइट की रक्षा के लिए myotendinous जंक्शन पर FDL की transection के कारण नैदानिक ​​अभ्यास के एक सच्चे संक्षिप्त नहीं है। इसके अलावा, इस मॉडल चिकित्सा प्रतिक्रिया के लिए श्लेष म्यान कोशिकाओं के योगदान के लिए खाते में नहीं है, जैसे कोई श्लेष कण्डरा जहां मरम्मत होता है की मध्य भाग को कवर म्यान है। इन सीमाओं के बावजूद, इस मॉडल murine मॉडल है कि अधिक Clos में प्रदर्शन किए जाने की गति को सीमित adhesions के सृजन रेंज है, जो अभी तक का लाभ दिया हैइली नैदानिक ​​परिदृश्य लगभग। यह मॉडल नाक आउट माउस मॉडल 12,13 आकलन करने के लिए, और उपचार 14-17 में सुधार करने के लिए विभिन्न औषधीय दृष्टिकोण का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया गया है। ऊतकीय इस मॉडल का विश्लेषण करती है, immunohistochemistry का उपयोग और सीटू संकरण में, चिकित्सा के दौरान महत्वपूर्ण जीन और प्रोटीन का स्थानीयकरण करने में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकते हैं। हालांकि, ऊतक विज्ञान केवल एक पार के अनुभागीय स्थानिक विश्लेषण प्रदान करता है और पूरे ऊतक भर मात्रा का ठहराव की अनुमति नहीं देता। प्रवाह cytometry एक और मात्रात्मक दृष्टिकोण का प्रतिनिधित्व करता है, लेकिन केवल कोशिकाओं का एक बहुत ही सीमित संख्या माउस मॉडल में चिकित्सा कण्डरा के ऊतकों से अलग किया जा सकता है, और इस संख्या में आगे निर्धारण, permeabilization, और वाशिंग चरणों के दौरान कमी आई है। खाते में लेते हुए, प्रवाह cytometry जानवरों की संख्या है कि आवश्यकता होगी के कारण एक अव्यावहारिक दृष्टिकोण बन जाता है। एक वैकल्पिक तरीका आदेश में इस छोटे से सेल की आबादी का बहुमत बनाए रखने के लिए आवश्यक हैआगे चिकित्सा परिवेश को चिह्नित करने के लिए। विधि यह पूरा करने के लिए प्रयोग किया जाता है, यहाँ दिखाया गया है, एक गिलास स्लाइड, immunocytochemistry द्वारा पीछा किया पर कोशिका विज्ञान centrifugation के माध्यम से अलग कक्षों की एकाग्रता शामिल है। वर्तमान अध्ययन edu (5-ethynyl-2'deoxyuridine, एक thymidine एनालॉग) में शामिल करने और बाद में लेबलिंग चिकित्सा स्थल पर कोशिकाओं के रिश्तेदार proliferative स्थिति का निर्धारण करने के लिए इस्तेमाल किया गया था। यह दृष्टिकोण सेल प्रसार, जीन नाकआउट या overexpression पर औषधीय उपचार की प्रभावकारिता परीक्षण करने के लिए, या पहचान और अलग सेल आबादी यों के लिए लागू किया जा सकता है।

Protocol

रोचेस्टर विश्वविद्यालय में पशु अनुसंधान पर विश्वविद्यालय समिति ने सभी पशु प्रयोगों को मंजूरी दे दी। दस-12 सप्ताह पुरानी महिला C57BL / 6J चूहों का इस्तेमाल किया गया था। Flexor कण्डरा सर्जरी के लिए पशुओ…

Representative Results

Flexor digitorum longus (FDL) मांसपेशी, बछड़ा में स्थित है, (चित्रा 1 ए में नीले रंग में उल्लिखित, और चित्रा 2A में histologically दिखाया गया है) flexor कण्डरा के माध्यम से माउस हिंद पंजा के अंक फ्लेक्स के लिए है, ज?…

Discussion

पूरा transection और flexor digitorum longus कण्डरा की मरम्मत के एक murine मॉडल के लिए शल्य चिकित्सा की प्रक्रिया इस अध्ययन में प्रस्तुत किया है। इसके अलावा कोशिका विज्ञान सेंट्रीफ्यूज के साथ छोटे सेल आबादी ध्यान केंद्रित का ए?…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

इस काम आंशिक हाथ पायलट पुरस्कार और एनआईएच / NIAMS 1K01AR068386-01 (AEL) और NIAMS / एनआईएच P30AR061307 की सर्जरी के लिए अमेरिकन सोसायटी द्वारा समर्थित किया गया।

Materials

Surgical preparation
C57BL/6J mice  Jackson Laboratories 000664
Ketamine Hospira NDC# 0409-2051-05
Xylazine Lloyd Inc. NDC# 61311-482-10
Buprenorphine Par Pharmaceutical Inc. NDC# 42023-179-10
0.9% sodium chloride irrigation Hospira NDC# 0409-6138-03 For preparation of ketamine/xylazine and buprenorphine solutions
1ml syringe BD 309659
30G needle BD 305106
Povidone-Iodine solution Aplicare 82-226
70% ethanol
Puralube vet opthalmic ointment Dechra Veterinary Products NDC# 17033-211-38
Name Company Catalog Number Comments
Surgical tools
Portable balance 200g Ohaus SP202
Spring scissors Fine Science Tools 15124-12
Dumont #5 forceps Fine Science Tools 11251-30
Needle holders Fine Science Tools 91201-13
Micro spring scissors Fine Science Tools 15003-08
Micro needle holders Fine Science Tools 12061-02
5-0 nylon sutures Ethicon 668G
8-0 microsurgery nylon sutures Ethicon 2808G
Lab-Line histology slide warmer Barnstead International 26025
Name Company Catalog Number Comments
Cytospin method
Collagenase Type I, lyophilized Life Technologies  1700-017
Bovine Serum Albumin Cell Signaling Technologies 9998S
1X PBS Thermo Fisher 10010-023
Cytology funnels Fisher HealthCare 10-354
HistoBond+ microscope slides VWR 16005-110
Cytospin 2 centrifuge Shandon SH-CYTO2
Name Company Catalog Number Comments
Immunocytochemistry
Slide staining tray with black lid IHC World M920-2
Click-iT Plus EdU Imaging Kit Life Technologies  C10639 Includes EdU and  Hoeschst 33342
Immedge hydrophobic barrier pen Vector Laboratories H-4000
ProLong Diamond mounting medium Thermo Fisher P36970
Glass coverslips 24x50mm #1.5
Clear nail polish

Riferimenti

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check_url/it/54433?article_type=t

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Citazione di questo articolo
Ackerman, J. E., Loiselle, A. E. Murine Flexor Tendon Injury and Repair Surgery. J. Vis. Exp. (115), e54433, doi:10.3791/54433 (2016).

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