Summary
व्यंग्य Doryteuthis pealeii chromatophores में nanostructured कणिकाओं से पिगमेंट की निकासी के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत किया है।
Introduction
इस तरह के व्यंग्य, cuttlefish, और ऑक्टोपस के रूप में Cephalopods यह क्षमता pigmented chromatophores के रूप में जाना अंगों के चुनिंदा क्षेत्रीय विस्तार के हिस्से में समर्थित है गतिशील camouflaging और संकेतन के लिए उनकी उपस्थिति को बदलने की क्षमता है। 1-6। 4,7-9 Chromatophores हैं मुलायम actuators कि एक cytoelastic sacculus के भीतर ही सीमित nanostructured वर्णक कणिकाओं कि मांसपेशी फाइबर द्वारा त्रिज्यात लंगर डाले है के एक नेटवर्क के होते हैं। 1,3 वे प्रेरित कर रहे हैं, chromatophores 500% द्वारा प्रस्तुत सतह क्षेत्र अंग भर कणिकाओं के वितरण में विस्तार। 3,7 , 10,11 इस कार्रवाई chromatophores के एक नंबर पर ठोस जाता है, जानवर के समग्र रंगाई बदल गया है। हालांकि यह ज्ञात है कि वर्णक कणिकाओं इस रंग परिवर्तन में योगदान, उनकी संरचना अनजान बनी हुई है। हम अलग और chromatophore पिगमेंट जो भविष्य compositional अध्ययन के लिए अनुकूलित किया जा सकता है शुद्ध करने के लिए एक प्रक्रिया का वर्णन।
3,12 Chromatophore युक्त ऊतक सेफैलोपॉड से सावधान तबाही के माध्यम से काटा जाता है। एक पाचन और homogenization प्रक्रिया तब आसपास के ऊतकों को अलग कर देना और chromatophore कोशिकाओं को अलग करने के लिए प्रयोग किया जाता है। nanostructured कणिकाओं तो अलग-थलग और दोहराया sonication और centrifugation का उपयोग कर शेष chromatophores से शुद्ध कर रहे हैं। शुद्धि करने पर, पिगमेंट एक प्रक्रिया में कणिकाओं कि तितली के पंखों से दिखाई रंग की निकासी से अम्लीय मेथनॉल समाधान का उपयोग कर अनुकूलित है से निकाले जाते हैं। 13 स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (SEM) और spectrophotometry पुष्टि करने के लिए कि chromatophore पिगमेंट सफलतापूर्वक उपयोग कर निकाला जाता है उपयोग किया जाता है यह तरीका।
इस विधि chromatophore कणिकाओं जो ग के लिए आणविक योगदान का पता लगाने के लिए प्रयोग किया जाता है के अलगाव का वर्णनoloration cephalopods में। पूरे जानवरों से 12 छोटे अणु एक्सट्रेक्शन अक्सर एक लंबे और थकाऊ प्रक्रिया हो सकती है। यहाँ उद्देश्य cephalopods में nanostructured कणिकाओं से पिगमेंट के अधिग्रहण के लिए एक प्रभावी और सतही प्रोटोकॉल के भविष्य के शोधकर्ताओं को सूचित करना है।
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Protocol
अकशेरुकी जानवर के साथ साथ आयोजित संयुक्त राज्य अमेरिका में विनियमित नहीं कर रहे अध्ययन; इसलिए संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति इस तरह के प्रोटोकॉल की समीक्षा के लिए कोई अधिकार नहीं है। इन संयुक्त राज्य अमेरिका में विनियमन के अधिकार क्षेत्र में नहीं गिरने के एवज में, लेखकों इसके द्वारा राज्य है कि इन अध्ययनों नैतिक उपयोग की दिशा में ईमानदार प्रयास, देखभाल, और इन पशुओं के उपचार, व्यक्तियों की संख्या को कम से कम किया गया था और इन प्रयासों के साथ आयोजित की गई बेसल घोषणा और प्रयोगशाला पशु विज्ञान के लिए अंतर्राष्ट्रीय परिषद (ICLAS) नैतिकता के दिशा-निर्देशों के अनुरूप हैं।
1. Doryteuthis pealeii (डी pealeii) विच्छेदन
- क्रय decapitated व्यंग्य डी वुड्स होल, एमए में समुद्री जैव प्रयोगशाला में समुद्री संसाधन विभाग की ओर से या किसी ताजा मछली बाजार से pealeii। नमूनों कि छड़ें भी किया गया है या पहले से आदेश में इस प्रक्रिया को लागू करने के लिए बदल दिया प्रयोग न करें। विशेष रूप से, क्रोमाtophore परत अभी भी नमूना पर बरकरार रहना चाहिए।
- जानवरों के तुरंत इस्तेमाल नहीं कर रहे हैं, उन्हें -20 डिग्री सेल्सियस उपयोग करें जब तक दुकान। नमूनों defrost करने के लिए, 1 विच्छेदन के लिए पहले घंटे के लिए कमरे के तापमान पानी में उन्हें जगह है।
- स्टेनलेस स्टील सीधे ठीक बिंदु विच्छेदन कैंची, पशु के पीछे की ओर के साथ काटा का उपयोग करना। उदर विरासत के आधार पर शुरू, और फिन क्षेत्र पर खत्म होता है।
- उन्हें संदंश विदारक और विच्छेदन कैंची का उपयोग कर अपने संयोजी ऊतक विच्छेद के साथ उठाने से आंतरिक अंगों (पेट, गिल, स्याही ग्रंथि, प्रजनन अंगों, प्रणालीगत दिल, और बाहु दिल) के सभी निकालें। एक नमूना बैग में अंगों को त्यागें।
- विदारक टी पिन मेंटल पिन करने के लिए एक मानक 11-1 / 2 में (पंख ऊपर की ओर) का प्रयोग करें "एक्स 7-1 / 2" एक्स 1-1 / 2 "एल्यूमीनियम विच्छेदन एक लचीला विच्छेदन पैड युक्त पैन। ऊतक में डूब समुद्री जल के 250 मिलीलीटर कि एक डिस्पोजेबल polystyrene वैक्यूम छानने का काम प्रणाली के माध्यम से छान कर दिया गया है0.2 माइक्रोन ताकना आकार से युक्त।
- ध्यान से विदारक संदंश के साथ एपिडर्मल त्वचा की परत (अपारदर्शी रंग) को हटाने, chromatophore युक्त त्वचा की परत बरकरार रखे हुए हैं। एक बार जब एपिडर्मल परत हटा दिया जाता है, एक नमूना बैग में त्यागें।
- छोटे (1 सेमी एक्स 1 सेमी) संदंश और विच्छेदन कैंची के साथ chromatophore परत के वर्गों काटना। 1.5 मिलीलीटर सूक्ष्म अपकेंद्रित्र ट्यूब में नमूने एकत्र (विच्छेदित ऊतक के साथ प्रत्येक खाली ट्यूब के आधे भरने में)।
- नलियों युक्त ऊतकों को समुद्री जल फ़िल्टर के 500 μl जोड़ें। नमूने 4 डिग्री सेल्सियस पर रात भर संग्रहित किया जा सकता है।
2. अलग Chromatophore वर्णक granules
- ऊतक पाचन
- Papain / collagenase की तैयारी
- वजन और एक 4 "x 4" कम नाइट्रोजन का उपयोग papain की 5 मिलीग्राम collagenase के 30 मिलीग्राम कागज वजन। एक पेंच टोपी के साथ एक 50 मिलीलीटर polypropylene अपकेंद्रित्र ट्यूब में इन स्थानांतरण।
- deioniz के 10 मिलीलीटर उपायएड पानी एक स्नातक की उपाधि प्राप्त पिपेट का उपयोग। सीधे papain / कोलैजिनेज़ युक्त शीशी में जोड़े। समाधान जब तक उच्चतम सेटिंग पर भंवर स्पष्ट है।
- कोशिकी ऊतकों को हटाने
- 14,000 से कम 5 मिनट के लिए 1.7 कदम से एकत्र chromatophore ऊतक अपकेंद्रित्र x जी। एक प्लास्टिक अपशिष्ट बाल्टी में समुद्र के पानी के ऊपर परत त्यागें।
- ऊतक एक P1000 चर मात्रा एक चैनल micropipette का उपयोग करने के लिए papain / collagenase समाधान के 500 μl जोड़ें। उच्चतम सेटिंग पर 1-2 मिनट के लिए प्रत्येक नमूना भंवर।
- 40 किलो हर्ट्ज की एक आवृत्ति पर 5 मिनट के लिए नमूने Sonicate आसपास के ऊतकों से कोशिकाओं को अलग कर देना।
- पर 14,000 एक्स जी पर 5 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र। एक प्लास्टिक अपशिष्ट बाल्टी में सतह पर तैरनेवाला त्यागें।
- 14,000 से कम 5 मिनट के लिए एकत्र chromatophore ऊतक अपकेंद्रित्र x जी। एक प्लास्टिक अपशिष्ट बाल्टी में समुद्र के पानी के ऊपर परत त्यागें। एक बार फिर से दोहराएँ।
- मैन्युअल किसी भी शेष बड़े ऊतक सेकंड हटानेमाहौल है कि अगले कदम के लिए आगे बढ़ने से पहले संदंश के साथ इस प्रक्रिया में पचा नहीं किया।
- Papain / collagenase की तैयारी
- वर्णक granules अलग
- Homogenization बफर की तैयारी
- वजन की 2.38 ग्राम (4- (2-hydroxyethyl) -1-piperazineethanesulfonic एसिड) (HEPES, 100 मिमी), मैग्नीशियम क्लोराइड (10 मिमी), पोटेशियम aspartate की 0.856 ग्राम (50 मिमी) की 0.095 ग्राम, और की 0.015 जी dithiothreitol (1 मिमी)। एक पेंच टोपी के साथ एक 150 मिलीलीटर polystyrene कंटेनर में स्थानांतरण। एक वाणिज्यिक मिनी गोली protease अवरोध जोड़ें।
- एक स्नातक की उपाधि प्राप्त सिलेंडर का उपयोग कर विआयनीकृत पानी की 100 मिलीलीटर उपाय। सीधे homogenization लवण युक्त कंटेनर में जोड़े। समाधान जब तक भंवर स्पष्ट है।
- वर्णक granules के homogenization
- 5 मिनट के लिए 14,000 XG पर 2.1 कदम से प्रत्येक नमूना अपकेंद्रित्र। एक प्लास्टिक अपशिष्ट बाल्टी में सतह पर तैरनेवाला त्यागें। यह नमूना कोशिकी ऊतक के शून्य होना चाहिए।
- 500 &# 181; प्रत्येक ट्यूब और 1-2 मिनट प्रत्येक के लिए भंवर homogenization बफर के एल अच्छी तरह से नमूने मिश्रण करने के लिए। 30 मिनट (~ 40 kHz) के लिए नमूने Sonicate और 14,000 एक्स जी centrifugation के 5 मिनट के साथ पालन करें।
- एक प्लास्टिक अपशिष्ट बाल्टी में सतह पर तैरनेवाला त्यागें, और chromatophore sacculus और प्रोटीन tethers का पूरा पाचन सुनिश्चित करने के लिए पिछले चरण को दोहराएँ 2-3 बार। शेष समाधान के लिए एक हल्के पीले रंग की सतह पर तैरनेवाला और एक लाल रंग की गोली पृथक वर्णक कणिकाओं युक्त शामिल करना चाहिए।
- Homogenization बफर की तैयारी
3. वर्णक निष्कर्षण
- अम्लीय मेथनॉल की तैयारी (एचसीएल-MeOH)
- ध्यान से मेथनॉल के 5 मिलीलीटर (MeOH) के लिए ध्यान केंद्रित (36.5-38% (डब्ल्यू / डब्ल्यू)) हाइड्रोक्लोरिक एसिड (एचसीएल) के 25 μl जोड़ें। दुकान एक पेंच टोपी गिलास नमूना शीशी में एचसीएल-MeOH समाधान। भंवर धीरे समान रूप से समाधान मिश्रण करने के लिए।
नोट: अधिक अम्लीय समाधान, अधिक वर्णक फाई के दौरान निकाला जाएगाआरएसटी निष्कर्षण।
- ध्यान से मेथनॉल के 5 मिलीलीटर (MeOH) के लिए ध्यान केंद्रित (36.5-38% (डब्ल्यू / डब्ल्यू)) हाइड्रोक्लोरिक एसिड (एचसीएल) के 25 μl जोड़ें। दुकान एक पेंच टोपी गिलास नमूना शीशी में एचसीएल-MeOH समाधान। भंवर धीरे समान रूप से समाधान मिश्रण करने के लिए।
- वर्णक की निकासी
- 14,000 XG पर 5 मिनट के लिए (2.2.2) से वर्णक दाना निलंबन अपकेंद्रित्र और एक प्लास्टिक अपशिष्ट बाल्टी में सतह पर तैरनेवाला त्यागें।
- एचसीएल-MeOH समाधान के 500 μl जोड़ें और ~ के लिए 3-4 मिनट प्रत्येक नमूना भंवर। 10 मिनट (~ 40 kHz) के लिए नमूने Sonicate, तो कम से 14,000 एक्स जी 5 मिनट के लिए अपकेंद्रित्र।
- एक हस्तांतरण पिपेट का उपयोग करना, एक 1 घूंट पेंच शीर्ष कांच की शीशी में सतह पर तैरनेवाला इकट्ठा। सतह पर तैरनेवाला रंग में गहरे लाल रंग का होना चाहिए।
- निष्कर्षण कदम 3.2.2 दोहराएँ जब तक आगे कोई रंग निकाला जाता है (~ 4-5 washes)।
नोट: प्रत्येक निकासी निकलेगा ~ वर्णक के 1.5 मिलीलीटर। शेष बेरंग गोली वर्णक निकाले कणिकाओं है। नोट: दोनों बेरंग कणिकाओं और निकाले पिगमेंट आगे उपयोग करें जब तक 4 डिग्री सेल्सियस पर पानी में संग्रहित किया जा सकता है।
4. निष्कर्षण प्रक्रिया के दौरान विशेषता
- स्कैनिंग एलectron माइक्रोस्कोपी
- छवि कणिकाओं निकालने की प्रक्रिया की शुद्धता को सत्यापित करने के लिए स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (SEM) का उपयोग (कदम 2.2.1 और वर्णक निकाले कदम 3.2.3 से unreacted)।
- 14,000 XG पर 5 मिनट के लिए इमेजिंग, पहला सेंट्रीफ्यूज दोनों unreacted कणिकाओं और वर्णक निकाले कणिकाओं के लिए दाना नमूने तैयार है, और एक प्लास्टिक कचरे बाल्टी में सतह पर तैरनेवाला त्यागें। इथेनॉल के 1 मिलीलीटर, और जमा एक हस्तांतरण पिपेट का उपयोग एल्यूमीनियम SEM स्टब्स पर दाना निलंबन की 2-3 बूंदों में इन फिर से निलंबित।
- रात भर नमूने सुखाने के बाद, एक 15 एनएम कोटिंग प्राप्त करने के लिए 3 मिनट के लिए सोने प्लैटिनम कोटिंग के साथ कोट धूम।
- छवि एक Schottky emitter और एक माध्यमिक इलेक्ट्रॉन डिटेक्टर के साथ एक SEM का उपयोग कर। एक 5-7 केवी किरण वोल्टेज और छवि के लिए 8 और 9 मिमी इन सामग्रियों के बीच काम कर रहे एक दूरी का प्रयोग करें।
- पराबैंगनी दिखाई (यूवी की तुलना) Spectrophotometric माप
- मॉनिटर absorbance के समर्थकसभी 3 स्थितियों के लिए फ़ाइलें (2.2.2 से unreacted दाना, 3.2.3 से निकाला वर्णक, और 3.2.4 से वर्णक निकाले कणिकाओं) 200-800 एनएम से एक दोहरी बीम स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग।
- unreacted कणिकाओं और वर्णक निकाले कणिकाओं के लिए एक 1 मिलीलीटर क्युवेट में विआयनीकृत पानी का उपयोग कर एक खाली माप ले लीजिए। दोनों नमूने के लिए यूवी विज़ अवशोषण स्पेक्ट्रा लीजिए।
- निकाले वर्णक के लिए एक 1 मिलीलीटर क्युवेट में अम्लीय मेथनॉल समाधान का उपयोग कर एक खाली माप ले लीजिए। नमूने के लिए यूवी विज़ अवशोषण स्पेक्ट्रम लीजिए।
- तरंग दैर्ध्य, जिस पर absorbance शिखर इसकी अधिकतम ऊंचाई तक पहुँच रिश्तेदार की पहचान के द्वारा प्रत्येक नमूने की अधिकतम तरंगदैर्ध्य निर्धारित करते हैं।
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Representative Results
Chromatophores डी से विच्छेदित कर रहे हैं pealeii पृष्ठीय मेंटल (चित्रा 1 ए, 1 बी)। एक बार जब वे निकाल रहे हैं, chromatophores lysed और centrifugation और कपड़े धोने के चक्र का उपयोग कर pigmented कणिकाओं (आंकड़े 2A, 2 बी) के बाहर अलग करने के लिए शुद्ध कर रहे हैं। अम्लीय मेथनॉल समाधान (एचसीएल-MeOH), कणिकाओं (चित्रा -2) से वर्णक को निकालने के लिए एक घुलनशील और अघुलनशील वर्णक निकालने, बेरंग वर्णक निकाले कणिकाओं से बेदखल किया जाता है।
निष्कर्षण प्रक्रिया कणिकाओं का औसत व्यास कम कर देता है। इस स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (SEM) का उपयोग कर मनाया जाता है। (चित्रा 3 ए एन = 100, त्रुटि मानक विचलन है) इससे पहले कणिकाओं एचसीएल-MeOH करने के लिए सामने आ रहे हैं, वे (527.3 ± 91.8) एनएम के एक औसत व्यास की है। वर्णक कणिकाओं से निकाला जाता है, आकार में कमीएस के लिए (202.6 ± 32.2) एनएम (एन = 100, त्रुटि मानक विचलन है, चित्रा 3 बी)। यह आकार में कमी दाना जब एचसीएल-MeOH के साथ इलाज से वर्णक की निकासी की वजह से हो धारणा है।
इस परिकल्पना का परीक्षण करने के लिए, दिखाई रंग से पहले और बाद के निष्कर्षण में मतभेद प्रकाश माइक्रोस्कोपी और spectrophotometry का उपयोग कर निगरानी कर रहे हैं। एचसीएल-MeOH के अलावा पर, unreacted कणिकाओं के साथ जुड़े रंग दिख (चित्रा 4 ए) कम कर देता है। यह आगे यूवी की तुलना spectrophotometry (चित्रा 4 बी), जहां एक व्यापक absorbance प्रोफ़ाइल (~ 280-800 एनएम) एक बहुत कम तीव्रता में पूर्व निकाली कणिकाओं और बाद निकाले कणिकाओं के लिए मनाया जाता है, यद्यपि का उपयोग कर विशेषता है; जबकि, घुलनशील वर्णक निकालने के एक लैम्ब्डा अधिकतम ~ 500 एनएम पर केंद्रित, ~ 380 एनएम पर एक कंधे के साथ दर्शाती है। सामूहिक रूप से, इन आंकड़ों एक विधि सफलतापूर्वक कणिकाओं से दिखाई रंग निकालने के लिए सुझाव देते हैं।
चित्रा 1: व्यंग्य डी से Chromatophores pealeii। (ए) व्यंग्य डी pealeii पृष्ठीय मेंटल। (बी), लाल, पीले, भूरे और chromatophores के उज्ज्वल क्षेत्र छवि। स्केल बार = 1 मिमी। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 2:। निकालने की प्रक्रिया का चित्रण (ए) Chromatophores विच्छेदित कर रहे हैं। (बी) वर्णक कणिकाओं homogenized chromatophore ऊतकों से हटा दिया है और centrifugation और कपड़े धोने के चक्र की एक श्रृंखला का उपयोग कर शुद्ध कर रहे हैं। (सी) वर्णक पूर्व हो सकता है tracted एक घुलनशील वर्णक सतह पर तैरनेवाला जो बेरंग वर्णक निकाले कणिकाओं से अलग किया जाता है उपज एचसीएल-MeOH का उपयोग कर कणिकाओं से। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 3: nanostructured कणिकाओं की एचसीएल-MeOH निकासी बदल व्यास (ए) के पूर्व अम्लीय मेथनॉल निकाले वर्णक कणिकाओं की स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन micrographs और (बी) के बाद अम्लीय मेथनॉल निकाले वर्णक कणिकाओं।। स्केल बार = 1 माइक्रोन। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
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चित्रा 4: एचसीएल-MeOH निकासी nanostructured कणिकाओं के दृश्य रंग बदल (ए) उज्ज्वल क्षेत्र वर्णक कणिकाओं की निकासी की प्रक्रिया के दौरान छवियों।। (बी) के पूर्व (काला) के absorbance स्पेक्ट्रा - और पोस्ट (नीला) -। वर्णक सतह पर तैरनेवाला (लाल) के साथ-साथ निकासी यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
हम व्यंग्य chromatophore कणिकाओं से पिगमेंट को निकालने के लिए एक विधि का प्रदर्शन किया है। विशेष रूप से कणिकाओं को लक्षित करके, हमारा लक्ष्य अनुकूली रंगाई मध्यस्थता में उनकी भूमिका को निर्धारित है। इस विधि थोक ऊतक के नमूने 14 या फ्रीज सूखे त्वचा का उपयोग कर 15 सेफैलोपॉड पिगमेंट को चिह्नित करने के लिए तैयार पिछली रिपोर्टों से अलग है।
हालांकि इस प्रोटोकॉल chromatophore पिगमेंट निकालने में प्रभावी है, यह छोटे प्रतिक्रिया तराजू तक सीमित है। एक व्यंग्य पैदावार विदारक ~ शुद्ध कणिकाओं की 11 मिग्रा। लगभग इस मास के 58% घुलनशील वर्णक, जो एचसीएल-MeOH समाधान का उपयोग कर निकाला जाता है शामिल हैं। 12 शुरू chromatophore ऊतक की पवित्रता को सीधे एक विच्छेदन से उत्पाद उपज प्रभावित करती है। नमूने अतिरिक्त एपिडर्मल या iridophore ऊतक विच्छेदन के दौरान एकत्र से दूषित दिखाई देते हैं, यह सबसे अच्छा है नमूना की सामग्री को अलग करने, उन्हें अतिरिक्त buf में resuspendFer, और homogenization फिर से कदम शुरू करते हैं। chromatophore ऊतक से वर्णक कणिकाओं की एक शुद्ध आबादी को अलग रूप में कई के रूप में आठ, 4 घंटा sonication चक्र है कि 4 दिन में विस्तार कर सकता लग सकता है। यह अलगाव में रोगी रहने के लिए वर्णक कणिकाओं की एक शुद्ध आबादी सुनिश्चित करने के लिए महत्वपूर्ण है।
शुरू दाना समाधान की पवित्रता भी एचसीएल-MeOH से वर्णक निकासी के कदम को प्रभावित करती है। कणिकाओं पचाया नहीं ऊतक, बस भंवर द्वारा occluded और नमूने को 1 घंटा sonicate और निकासी फिर से शुरू करने से पहले नमूना homogenize रहे हैं। अक्सर 4-5 नमूना प्रति एचसीएल-MeOH के 500 μl का उपयोग कर washes कणिकाओं से वर्णक निकालने के लिए आवश्यक हैं। यदि सही ढंग से किया है, इस प्रक्रिया के प्रति नमूना घुलनशील वर्णक के 2-3 मिलीलीटर के बीच निकलेगा। अतिरिक्त शुद्धि पतली परत क्रोमैटोग्राफी के माध्यम से नियोजित किया जाता है, अलग पिगमेंट चार अद्वितीय xanthommatin और decarbo के अलग सांद्रता वाले भागों में अलगxylated xanthommatin। 12
इस विधि दवा की दुकानों, जीव, या इंजीनियरों द्वारा उपयोग किया जा सकता है बेहतर रंग मॉडुलन में पिगमेंट की भूमिका को समझते हैं। कणिकाओं के भीतर वर्णक की उपस्थिति जो आणविक nanostructured chromatophore वर्णक कणिकाओं के भीतर निहित घटकों के साथ निकलती है cephalopods में रंगाई के लिए एक श्रेणीबद्ध तंत्र चलता है। इन निष्कर्षों से इंजीनियर पूर्व पैक pigmented नैनोकणों का उपयोग कर cephalopods में दिखाया गया है अनुकूली रंग के गतिशील रेंज नकल करने के लिए बनाया गया सिस्टम सूचित करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Collagenase | Alfa Aesar | 9001-12-1 | No hazard |
| Dithiothreitol | Sigma-Aldrich | 3482-12-3 | Irritant, acute toxicity |
| HEPES | Sigma-Aldrich | 7365-45-9 | Mild irritant |
| Hydrochloric acid | EMD Chemicals | 7647-01-0 | Corrosive |
| k-Aspartate | Sigma-Aldrich | 1115-63-5 | Reacts violently with oxidants |
| Magnesium Chloride | Sigma-Aldrich | 7786-30-3 | Mild eye irritant |
| Methanol | Pharmco-AAPER | 67-56-1 | Highly flammable |
| Mini tablet prtoease inhibitor | Sigma-Aldrich | 469315-90-01 | Corrosive to metal and skin |
| Papain | Sigma-Aldrich | 9001-73-4 | Irritant |
References
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