Introduction
L'immunità innata fornisce immediatamente prima linea di difesa contro le infezioni e malattie in una vasta gamma di organismi. Essa non solo avvia la risposta immunitaria primaria per eliminare la minaccia, ma svolge anche un ruolo fondamentale nell'attivazione e educare l'immunità adattativa che svolge risposte immunitarie secondarie in modo specifico agente patogeno. L'infiammazione è orchestrato da una pletora di citochine e chemochine, che a loro volta hanno la capacità di attrarre altre cellule immunitarie al sito di infezione e di indurre i segni cardinali di infiammazione, come rossore, gonfiore, dolore, perdita di funzione, e la febbre . La durata e l'intensità dell'infiammazione dipendono da diversi fattori, ma risolvere l'infiammazione e ripristinando l'omeostasi è un passo fondamentale per evitare l'insorgenza di malattie infiammatorie croniche. I recenti progressi nel campo delle neuroscienze e immunologia hanno svelato i meccanismi neurali specifiche con immenso potenziale terapeutico per il controllo inflinfiammazione sia nel sistema nervoso centrale e nella periferia. Uno di essi consiste nello colinergica via anti-infiammatori (PAC), noto anche come il riflesso infiammatoria, che è azionato dal sistema nervoso autonomo 4, 5.
Attualmente è pensato che mediatori infiammatori attivano nervi sensoriali e inviare segnali relativi allo stato di infiammazione del sistema nervoso centrale. Una risposta riflessa viene quindi attivato attraverso il nervo vago efferente. Un ampio studio sui dettagli anatomici della PAC ha rivelato un modello parasimpatico-simpatico composto da due nervi, il nervo vago e nervo splenico, rispettivamente 6. Nella PAC, il nervo vago colinergica efferente attivato termina nel ganglio celiaco mesenterico, causando l'attivazione del nervo splenico adrenergico da un meccanismo ancora da esplorare. Il nervo splenico, così attivato, si caratterizza per internovate in prossimità di cellule immunitarie nella polpa bianca, zona marginale, e polpa rossa della milza, la principale e organo obbligatorio della PAC 7, 8. Norepinefrina (NE) dalle terminazioni nervose splenici lega ai corrispondenti β 2 adrenergici espressi sui linfociti T splenici. Questo induce il rilascio colina acetil transferasi (ChAT) acetilcolina mediata (ACh), che a sua volta attiva i recettori nicotinici dell'acetilcolina (a7) α7nACh sui macrofagi, limitando in tal modo la produzione di citochine e infiammazione 2. Di conseguenza, è chiaro che il sistema nervoso è in grado di regolare l'infiammazione nei tessuti periferici e di ripristinare omeostasi immunitaria locale.
Come il nome del percorso suggerisce, il sistema ACh è di importanza fondamentale per il funzionamento di questo percorso di regolazione neuro-immune. È interessante notare che i meccanismi coinvolti nell'attivazione diPAC sembrano essere differente nella periferia e nel sistema nervoso centrale. Mentre l'importanza dei recettori nicotinici (α7nAChR) nella milza è stata dimostrata in precedenza 9, recettori muscarinici (mAChR) sono obbligatorie per l'attivazione centrale del percorso 10, 11. Più recentemente, la somministrazione periferica di una azione centrale M1 agonista muscarinico notevolmente soppressa fattore di necrosi tumorale siero e milza α (TNFa) durante letale endotossemia murina, un'azione che richiedeva intatto nervo vago e nervo splenico segnalazione 12. Abbiamo inoltre recentemente dimostrato che topi privi prostaglandina E2 (PGE2) non erano in grado di rispondere alla stimolazione del nervo vago e non down-regolano il rilascio indotto da LPS di citochine nel siero e milza 3. Pertanto, la PAC potrebbe anche essere regolata da sistemi diversi dal principale pathw AChAy.
Il nervo vago è stata indicata come tale per la sua naturalmente vagare nel corpo, innervano organi principali compreso il fegato, polmone, milza, reni, intestino e 13. Considerando questo grande innervazione e molto potente effetto immunosoppressivo del nervo vago, il potenziale terapeutico della PAC potrebbe coprire un'ampia gamma di condizioni infiammatorie. Il nervo vago può essere elettricamente (o meccanicamente) attivato, con controllo della tensione e frequenza, e contrariamente al trattamento convenzionale, senza farmaci aggiunti al corpo. Le prove sono attualmente in corso in pazienti reumatici, per esempio, per testare il significato clinico di VNS nel trattamento di infiammazioni croniche 14. Complessivamente, la comunicazione e la regolazione di infiammazione neuro-immunitario sono attualmente allo studio, che fornirà un trattamento alternativo alla terapia convenzionale. Pertanto, l'analisi del nervo vago stimulatioEffetto n nei diversi organi innervati, ma anche la caratterizzazione del potenziale azione terapeutica in modelli animali di infiammazione cronica, sarebbe sicuramente dare spunti e di speranza per nuovi potenziali bersagli terapeutici.
La metodologia originale sviluppato da Tracey e colleghi 4 non poteva essere trasposto al nostro campo di ricerca a causa di eccesso di stimolazione della risposta infiammatoria (da una dose letale di LPS) e una troppo breve intervallo di tempo tra l'attivazione della PAC e il read-out. Nel presente documento, presenteremo le modifiche apportate al protocollo originale, confrontare i due metodi diversi su livelli di citochine, ed evidenziare un nuovo fronte osservazione sull'organo bersaglio (la milza).
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Protocol
Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida per la cura e l'uso di animali approvati dal Comitato Etico locale Karolinska Institutet, Stoccolma. Il Comitato Etico locale segue le direttive dell'Unione europea in materia di cura degli animali.
NOTA: I principali cambiamenti rispetto al protocollo originale sono il tempo di recupero dopo l'intervento chirurgico (6 ore contro 1 ora) e il livello di LPS iniettati (2 mg / kg contro 15 mg / kg). In caso contrario, le diverse impostazioni relative alla chirurgia stessa non sono stati modificati.
1. preparazione del materiale per la stimolazione
- Accendere il computer e il sistema di acquisizione dati collegato alla stimolazione elettrodo (Figura 1A).
- Inserire il Riconoscimento programma.
- Preparare una soluzione stock di LPS ad una concentrazione di 5 mg / ml in PBS 1x, aliquota, e conservarlo a -20 ° C. Il giorno dell'esperimento, scongelare un'aliquota e preparare un adequate campione di LPS (0,5 mg / ml) per iniettare circa 100 microlitri nell'animale, in base al peso.
2. Preparare l'animale per anestesia
- Utilizzare C57BL 6 topi /. Mantenerle in condizioni climatiche controllate con un ciclo luce-12 hr / scuro, alimentarli chow roditori standard e dare loro acqua ad libitum.
- Eseguire un intervento chirurgico su topi che pesano circa 25 g al giorno dell'esperimento.
NOTA: Quando reazioni infiammatorie sono indotti, è particolarmente importante effettuare regolari controlli e osservazioni delle reazioni cliniche negli animali. L'eutanasia precoce da CO 2 inalazione è necessaria se la condizione animale non soddisfa i criteri etici. - Impostare la macchina anestetico.
- Assicurarsi che il tubo sia collegato correttamente e non sia danneggiato in alcun modo. Assicurarsi che la zona ventilata funziona correttamente. Collegare il filtro chiave per la bottiglia isoflurano e riempire il vaporizer con una quantità sufficiente di isoflurano.
- Aprire l'alimentazione del gas (aria e ossigeno) e fare in modo che le bottiglie contengono abbastanza gas per l'esperimento. Un connettore a tre vie è quindi in grado di inviare il flusso isoflurano alla camera di induzione o la maschera.
- Ruotare il connettore a tre vie per la camera di induzione. Scegli un mouse dalla gabbia casa e inserire l'animale nella camera. Regolare il regolatore di flusso di 1,0 L / min di ossigeno e 1,0 L / min di aria. Regolare la concentrazione isoflurano al 4-5%.
- Quando si raggiunge il livello desiderato di anestesia, quando si raggiunge il livello desiderato di anestesia, radere l'area chirurgica e spostare l'animale dalla camera alla maschera. Girare il connettore a tre vie per il flusso maschera. Regolare il regolatore di flusso di 0,25 L / min ossigeno e 0,25 L / min di aria.
- Regolare la concentrazione isoflurano al 1,5-2,5%. Controllare il livello di anestesia per il controllo del riflesso e la frequenza respiratoria prima di iniziare SEGUIRE IL PROCEDIMENTO chirurgicae.
- Fissare le gambe del mouse al banco di lavoro con nastro adesivo. Assicurarsi che il naso dell'animale è ancora accuratamente posizionato nella maschera.
3. Chirurgia e stimolazione del nervo vago
- Disinfettare l'area chirurgica con il 70% di etanolo.
- Usando un bisturi, incidere con cura la pelle a livello del collo (un'incisione di circa 1 a 1,5 cm).
Nota: Nel protocollo, la procedura di chirurgia finisce qui per gli animali sham-operati. Infatti, è stato dimostrato che sfiora il nervo con un attrezzo metallico stimola già in una certa misura. Pertanto, per ottenere un più accurato controllo della chirurgia degli animali quando si utilizza una piccola quantità di LPS, fermare l'operazione in questa fase. - Con l'aiuto di un microscopio (obiettivo 12,5X), isolare il nervo vago sinistro dalla carotide utilizzando dissettore. In primo luogo individuare il muscolo sternocleidomastoideo rimuovendo pelle e grasso strati, e poi rientrare inordinare di mettere la pinza dietro sia il nervo e l'arteria.
Nota: Il passo successivo è molto difficile, come il nervo e arteria sono strettamente aderire l'uno all'altro. Pertanto, è molto facile da tagliare la nave e uccidere l'animale. Tuttavia, ponendo molta attenzione la pinza tra il nervo e l'arteria, che alla fine si separano, ed è possibile isolare il nervo. - Posizionare l'elettrodo (Figura 1B) sotto il nervo vago. L'elettrodo ad ago è piuttosto lungo, anche se il nervo muove leggermente durante la stimolazione, sarà sempre in contatto con l'elettrodo.
- Eseguire un intraperitoneale (ip) iniezione di LPS (2 mg / kg) con l'aiuto di una siringa (per la lettura su livelli di citochine, cioè per misurare l'effetto down-regulation).
- Attendere 5 minuti prima di iniziare la stimolazione.
- Stimolare il nervo vago per 5 minuti a 5 V e 1 Hz premendo il pulsante di avvio nel programma riconoscere.
- Rispostare l'elettrodo e suturare la ferita dell'animale con filo di sutura chirurgica.
- Spruzzare un No Sting Barriera Film (NSBF) sulla ferita al fine di migliorare la guarigione e per proteggere dalle infezioni.
4. Recupero del Animal
- Dopo l'intervento chirurgico, spostare l'animale torna alla sua gabbia casa per il risveglio e il recupero. Sotto la luce infrarossa al fine di mantenere la temperatura corporea, assicurarsi di monitorare l'animale fino piena coscienza è stato ripreso.
- Lasciate che l'animale recuperare nella sua gabbia per 6 ore prima del sacrificio per l'analisi.
Nota: L'effetto della stimolazione del nervo vago è molto veloce e ha anche dimostrato di essere di lunga durata (fino a 48 ore), in modo che il tempo di recupero può essere impostato dallo sperimentatore secondo le esigenze dello studio.
5. Il sacrificio per ulteriori analisi
- Posto l'animale in una gabbia collegato a un dispositivo di somministrazione di CO 2.
- Impostare il dispositivo su un 5Ciclo -min di CO 2 inalazione.
- Quando l'eutanasia è fatto, raccogliere gli organi di interesse e direttamente congelarli in ghiaccio secco per ulteriori analisi (ad esempio, la misurazione dei livelli di citochine negli estratti di milza usando un topo TH1 / TH2 9-Plex assay) 3.
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Representative Results
Livello di TNFa e interleuchina-1β (IL-1β) dopo aver aumentato il Time Lapse dopo l'intervento e ridurre la dose di LPS
Come mostrato in precedenza, utilizzando il protocollo originale, VNS diminuzione dei livelli di TNFa (169,3 ± 24,9 pg / mg in SHAM contro 39,7 ± 10,8 pg / mg in VNS, p <0.001) e IL-1β (360.0 ± 40.21 pg / mg SHAM contro 191,7 ± 27,2 pg / mg in VNS, p <0,01) nella milza dopo l'iniezione intraperitoneale di LPS (15 mg / kg) (Figura 2A). Dopo aver cambiato il tempo per l'analisi da 1 a 6 ore e diminuendo la dose LPS di 15 a 2 mg / kg, abbiamo osservato solo un effetto di VNS su TNFa (13.67 ± 1.81 pg / mg in SHAM vs 8.82 ± 1.20 pg / mg VNS, p <0,05), mentre IL-1β non era influenzata (368,62 ± 35.65 pg / mg in SHAM contro 304.99 ± 43.54 pg / mg) (Figura 2B). Senza alcun inj LPSezione (cioè, soluzione salina), nessuna differenza può essere rilevata dopo VNS (Figura 2C).
I livelli di cheratinociti chemiotattico / crescita umano-regolata Tumorale (KC / GRO) nella milza dopo VNS utilizzando le diverse condizioni
Con il protocollo originale, abbiamo dimostrato che KC / GRO stato fortemente down-regolato da VNS (597,4 ± 17,8 pg / mg in SHAM contro 416,4 ± 29,7 pg / mg in VNS, p <0,001) (figura 3A). Utilizzando un punto di tempo di 6 ore e 2 mg / kg di LPS, è stata osservata alcuna variazione tra SHAM e animali VNS (figura 3B), mentre SNV è ancora potente sulla TNFa, per esempio. Tuttavia, se non LPS è stato iniettato per punto di tempo di 6 ore, abbiamo osservato un forte up-regolazione di KC / GRO seguente VNS (59.37 ± 4.29 pg / mg in SHAM contro 141.22 ± 10.56 pg / mg in VNS, p <0.001 ) (Figura 3C). Come previsto, la maggior parte delaltre citochine (TNFa, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, IL-12, e IFNy) erano a livelli molto bassi (se rilevabile), e nessuna differenza potrebbe essere visto tra SHAM e gli animali VNS-stimolata.
Figura 1: Le immagini del materiale necessario per eseguire la stimolazione del nervo vago. A) i) Computer, ii) sistema di acquisizione dati, e iii) dispositivo elettrodo stimolante. B) Primo piano dell'elettrodo che è posto sotto il nervo vago. Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 2: I livelli di TNFa e IL-1β in Milza Extracts di SHAM e animali VNS-trattati. Gli animali vengono sottoposti a SHAM o chirurgia VNS, secondo le seguenti condizioni: a) recupero di 1 ora dopo l'iniezione ip di 15 mg / LPS kg, B) recupero 6 ore dopo l'iniezione ip di 2 mg / LPS kg, e C) recupero 6-hr senza iniezione LPS. I livelli sono misurati su una piastra pro-infiammatorie citochine rivestite ed espressi in pg / mg di tessuto. I dati sono espressi come media ± SEM. Un asterisco mostra differenze statisticamente significative tra SNV e topi sham (n = 8 in ciascun gruppo). Di Student t-test * p <0.05; ** p <0.01; *** p <0.001. Clicca qui per vedere una versione più grande di questa figura.
Figura 3: Livelli di KC / GRO a SpLeen Estratti di SHAM e VNS-topi trattati ingenuo. Gli animali vengono sottoposti a SHAM o chirurgia VNS, secondo le seguenti condizioni: a) recupero di 1 ora dopo l'iniezione ip di 15 mg / LPS kg, B) recupero 6 ore dopo l'iniezione ip di 2 mg / LPS kg, e C) recupero 6-hr senza iniezione LPS. I livelli sono misurati su una piastra pro-infiammatorie citochine rivestite ed espressi in pg / mg di tessuto. I dati sono espressi come media ± SEM. Un asterisco mostra differenze statisticamente significative tra SNV e topi sham (n = 8 in ciascun gruppo). Di Student t-test *** p <0,001.
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Discussion
Fin dalla sua scoperta nei primi anni 2000, i meccanismi della PAC sono stati accuratamente studiati. Ora abbiamo una buona immagine del percorso, e in particolare, l'organo bersaglio, la milza, dove NE, le cellule T memoria, Ach, e macrofagi lavorare come una squadra molto efficiente per down-regolare mediatori infiammatori 2. Abbiamo inoltre recentemente pubblicato dati sulla importanza di un sistema prostaglandine funzionale nei topi, in particolare, PGE 2, che è ovviamente un componente obbligatorio per il rilascio di ACh nella milza dopo l'attivazione del CAP 3.
La tecnica sperimentale, nota come stimolazione del nervo vago, facilmente realizzabile in laboratorio, ma occorre osservare alcuni importanti protocolli riguardanti gli animali e la procedura di chirurgia. Usiamo un segnale di stimolazione sinusoidale, che dovrebbe essere una stimolazione "carica bilanciata", al fine di evitare il formarsi di cariche elettriche nelnervo che potrebbe distruggere (in contrapposizione alla stimolazione monofasica). Stimolando il nervo, non è possibile separare l'afferente dal segnale efferente, che può essere fatto solo per altri scopi con esperimenti vagotomia. La durata e la frequenza utilizzata per l'esperimento sono noti per avere un effetto sul rilascio di citochine infiammatorie dopo sfida, per esempio, ma non interesserebbero la frequenza cardiaca o dare effetti collaterali evidenti nei controlli sani.
Prima di tutto, lo sperimentatore deve sempre tenere a mente che la manipolazione, la chirurgia, e il recupero degli animali deve essere effettuata secondo le regole etiche per la cura degli animali. L'altro punto è che praticare l'intervento chirurgico è di grande importanza. Isolare il nervo vago è un passo difficile, che può essere letale per l'animale se si verifica un danno vascolare. Con l'esperienza, l'intervento chirurgico può essere effettuato entro 15 - 20 minuti, il che significa che l'animale non ha bisogno di essere anestetizzato per un lungo periodo di tempo, cheaiuta la ripresa.
Una discussione può essere sollevata anche per quanto riguarda la scelta di un buon animale sham-operati. Nel nostro protocollo, abbiamo utilizzato gli animali che hanno subito un intervento chirurgico solo a livello del collo, senza porre l'elettrodo sotto il nervo vago. La ragione per la scelta di questa opzione è che solo ponendo l'elettrodo sotto il nervo stimolerebbe meccanicamente il nervo in una certa misura (come osservato in precedenza) 19, con il conseguente rischio di mascherare potenziali meccanismi che si verificano a livelli molto bassi di infiammazione. Se si utilizza molto alte dosi di LPS, il miglior controllo sham sarebbe probabilmente a posizionare l'elettrodo sotto il nervo, come l'effetto della chirurgia SHAM non interferire o mascherare l'evidente effetto di stimolazione elettrica sulla scoppio di citochine.
Abbiamo sviluppato l'attuale protocollo per adattarsi alle diverse problematiche riscontrate all'interno del nostro campo di ricerca. Come discusso nel nostro documento precedente,abbiamo guardato il possibile coinvolgimento del sistema delle prostaglandine nella PAC. A causa del metabolismo enzimatico, abbiamo pensato che il tempo di recupero 1-hr del protocollo originale non sarebbe adatto il nostro esperimento. Pertanto, abbiamo esteso il periodo di tempo dopo l'intervento per 6 ore. Così facendo, abbiamo anche dovuto titolare giù per la dose di LPS, al fine di soddisfare i criteri etici. Abbiamo scelto un tempo di recupero di 6 ore, un ritardo che abbiamo pensato abbastanza a lungo per questo scopo. Abbiamo anche titolato LPS da 15 mg / kg (protocollo originale) fino a 0 mg / kg. A 2 mg / kg, abbiamo visto l'ultimo effetto del SNV su citochine (Figura 2), un effetto che scompariva a dosi inferiori.
Mentre l'effetto principale della SNV nella milza è noto e caratterizzato dalla attivazione di cellule T della memoria e, successivamente, macrofagi-le cellule che consentono la riduzione delle citochine, abbiamo anche dimostrato qui che VNS sembra indurre direttamente il rilascio di mediatori ( non è ancora chiaro da cui le cellule, necessitating ulteriori studi) al fine di reclutare altri tipi di cellule dalla risposta primaria all'infiammazione. Infatti, mentre SNV diminuita fortemente KC / GRO dopo una forte induzione infiammatoria (15 mg / kg di LPS, cioè, il protocollo originale), attiva un rilascio molto veloce di KC / GRO in assenza di infiammazione. Chemochina KC / GRO, una proteina correlata IL-8 con forti proprietà chemiotattica, è noto per avere un ruolo importante nello sviluppo dei leucociti (ad esempio, guidando maturazione e attivazione), traffico (ad esempio, l'attrazione e il reclutamento di neutrofili), e funzione 15 . Per esempio, i neutrofili sono importanti membri del sistema fagocitica del sistema immunitario innato. Essi agiscono come prima linea di difesa dell'ospite contro patogeni, ma sono anche importanti mediatori di infiammazione indotta lesioni 16. È interessante notare che, nel tentativo di migliorare il protocollo, abbiamo poi imbattuti in questa osservazione che evidenzia il dirett coinvolgimento di altri tipi di cellule nella milza in vago funzionamento del nervo.
Tutto il lavoro pionieristico nel campo si è concentrata sulla milza, l'organo bersaglio della PAC, e sull'effetto immunoregolatore del percorso in risposta a sepsi o periferico infiammazione sistemica. È importante sottolineare che questo lavoro è stato fatto utilizzando la stimolazione acuta del nervo vago, come quello presentato in questo documento. Questo può essere utilizzato per l'analisi molecolare di organi specifici o degli effetti a breve termine visto in studi funzionali coinvolgono modelli animali di infiammazione cronica (da 24 a 48 ore massimo dopo l'intervento).
Tuttavia, il corso vagando del nervo vago implica anche che la PAC potrebbe essere di uso significativo per trattare le malattie infiammatorie croniche che coinvolgono diversi organi innervati 13. Uno degli organi più studiate in questo contesto è l'intestino, con particolare attenzione alla malattia infiammatoria intestinale (IBD), che comprende Crohn & # 39; s malattia e la colite ulcerosa, ma anche il post-operatorio indotta ileo 17. Inoltre, l'importanza del regolamento PAC in molte altre malattie infiammatorie che coinvolgono il fegato, rene, polmone e anche sotto indagine 18. Tuttavia, l'attuale protocollo non può essere utilizzato in questo contesto, l'effetto a lungo termine dell'attivazione nervo vago richiederebbe stimolazioni ripetitive che possono naturalmente essere fatto solo con un elettrodo impiantato in vivo. A tal fine, l'animale deve subire un intervento chirurgico in cui elettrodi polsino stimolanti sono posizionati intorno al nervo vago 20. E 'anche importante notare che quest'ultima tecnica è molto più frequentemente descritto negli esseri umani o negli animali di maggiori dimensioni. Un altro modo di stimolazione del nervo vago è meccanica, come la stimolazione non invasiva e percutanea del nervo vago hanno mostrato un effetto immunosoppressivo in un modello murino dell'endotossemiaref "> 21. Tuttavia, le principali preoccupazioni di questa tecnica sarebbe la riproducibilità dei risultati e per garantire che il nervo vago è stimolato allo stesso modo in una valutazione a lungo termine dei modelli animali. I dispositivi sono stati sviluppati per l'uomo , come ad esempio trans-auricolari stimolazione VNS o la stimolazione VNS trans-cervicale, che offrono impulsi elettrici, che sono ben tollerati dai soggetti 21. sono stati utilizzati principalmente per il trattamento di epilessia ed emicrania e hanno mostrato risultati promettenti che potrebbero portare a future ambulatoriale e la terapia esogena.
Per riassumere, in particolare a causa del vasto innervazione del nervo vago nel corpo, la regolazione PAC è studiato in una vasta gamma di malattie infiammatorie nella speranza di trovare interessanti proprietà meccanicistici molecolari che potrebbero portare a futuri potenziali bersagli terapeutici. Qui, abbiamo presentato un metodo acuta per stimolare il nervo vago. Esso consente lo studio della PAC in limitata inrisposte infiammatorie grazie ad uno stimolo infiammatorio moderato combinato con un intervallo di tempo più lungo tra SNV e l'analisi (permettendo metabolismo enzimatico avvenire, per esempio).
Comprensione dei meccanismi molecolari alla base dell'effetto stimolazione del nervo vago, così come il suo utilizzo efficiente nel trattamento di malattie infiammatorie, è di grande importanza, soprattutto dal punto di vista clinico. Infatti, i vantaggi della metodologia sono ampi. A causa della natura di segnalazione nervosa estremamente veloce, è veloce ed efficace; un effetto osservabile sui livelli di citochine, per esempio, si verifica in meno di 1 ora. 4 Inoltre, stimolazione meccanica, non invasiva e percutanea del nervo può essere utilizzato, dando speranza per future terapie ambulatoriali e facilmente somministrati. Infine, contrariamente a trattamento regolare, stimolazione del nervo vago utilizza un percorso endogeno. Pertanto, a differenza di tutte le terapie farmacologiche, non nuovi agenti sono introdotti nelal corpo, evitando così eventuali effetti collaterali.
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Disclosures
Gli autori non hanno nulla da rivelare.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Computer | Toshiba | - | Any computer is actually compatible |
| MP-150 data acquisition system | Biopac Systems | MP150WSW | |
| Acknowledge software | Biopac Systems | ||
| Mice C57Bl/6 | Charles River | ||
| Anesthetic machine | Simtec Engineering | ||
| Medical oxygen bottle | AGA | 107563 | |
| Medical air bottle | AGA | 108639 | |
| Vetflurane (1,000 mg/g) | Virbac | 137317 | |
| LPS | Sigma-Aldrich | L2630 | |
| Saline | Merck Millipore | 1024060080 | |
| PBS 10x | Sigma-Aldrich | P5493 | Diluted 10 times for used concentration |
| Syringe (1 ml) | BD Plastipak | 303172 | |
| Needles 23 G | KD-FINE | 900284 | 0.6 x 30 mm (blue) |
| Microdissecting forceps (curved) | Sigma-Aldrich | F4142 | |
| Dissecting scissors | Sigma-Aldrich | Z265969 | |
| Surgical suture 4-0 | Ethicon | G667G | |
| Euthanasia unit | Euthanex Smartbox | EA-32000 | |
| Cavilon No Sting Barrier Film | 3M Health Care | 3346N | |
| TH1/TH2 9-Plex assay, ultrasensitive kit | MesoScale Discovery | K15013C-1 | |
| Stimulating electrode device | Biopac Systems | STIMSOC | |
| Aesculap Isis shaver | Agnthos | GT420 | |
| R70 | Rodent diet from Lantmannen, Stockholm, Sweden |
References
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