Aumento tempo di recupero e Diminuzione LPS Per studiare il nervo vago meccanismi di stimolazione in risposta infiammatoria limitati

Summary

La stimolazione del nervo vago ha dimostrato di avere una forte efficacia per ridurre l'infiammazione periferica. Qui, presentiamo un protocollo di stimolazione del nervo vago modificato che consente ulteriori esami dei meccanismi antinfiammatori colinergici in risposte infiammatorie limitate.

Abstract

L'infiammazione è una risposta locale all'infezione e al danno tissutale mediata da macrofagi attivati, monociti e altre cellule immunitarie che rilasciano citochine e altri mediatori dell'infiammazione. Per molto tempo, i meccanismi umorali e cellulari sono stati studiati per il loro ruolo nella regolazione della risposta immunitaria, ma i recenti progressi nel campo dell'immunologia e delle neuroscienze hanno anche svelato specifici meccanismi neurali con interessanti potenzialità terapeutiche. È stato descritto che la cosiddetta via antinfiammatoria colinergica (CAP) controlla le risposte immunitarie innate e l'infiammazione in modo molto potente. All'inizio degli anni 2000, Tracey e collaboratori hanno sviluppato una tecnica che stimola il nervo vago e imita l'effetto del percorso. La metodologia si basa sulla stimolazione elettrica del nervo vago a basso voltaggio e frequenza, al fine di evitare eventuali effetti collaterali di sovrastimolazione, come la deregolazione della variabilità della frequenza cardiaca. Sono ora disponibili dispositivi elettrici per la stimolazione, che facilitano l'impostazione della metodologia in laboratorio. L'obiettivo di questa ricerca è stato quello di indagare il potenziale coinvolgimento delle prostaglandine nella CAP. Sfortunatamente, sulla base di precedenti tentativi, non siamo riusciti a utilizzare il protocollo originale, poiché la risposta infiammatoria indotta era troppo elevata o non era adatta alle proprietà del metabolismo enzimatico. Le diverse impostazioni del protocollo chirurgico originale sono rimaste per lo più invariate, ma le condizioni relative all'induzione infiammatoria e il punto temporale prima del sacrificio sono state migliorate per adattarsi ai nostri scopi (ad esempio, indagare il coinvolgimento della CAP in risposte infiammatorie più limitate).

La versione modificata del protocollo originale, presentata qui, include un intervallo di tempo più lungo tra la stimolazione del nervo vago e l'analisi, che è associato a una minore induzione di risposte infiammatorie. Inoltre, mentre diminuivamo il livello di lipopolisaccaridi (LPS) da iniettare, ci siamo anche imbattuti in nuove osservazioni riguardanti le proprietà meccanicistiche nella milza.

Introduction

L'immunità innata fornisce immediatamente prima linea di difesa contro le infezioni e malattie in una vasta gamma di organismi. Essa non solo avvia la risposta immunitaria primaria per eliminare la minaccia, ma svolge anche un ruolo fondamentale nell'attivazione e educare l'immunità adattativa che svolge risposte immunitarie secondarie in modo specifico agente patogeno. L'infiammazione è orchestrato da una pletora di citochine e chemochine, che a loro volta hanno la capacità di attrarre altre cellule immunitarie al sito di infezione e di indurre i segni cardinali di infiammazione, come rossore, gonfiore, dolore, perdita di funzione, e la febbre . La d....

Protocol

Tutti gli esperimenti sugli animali sono stati eseguiti secondo le linee guida per la cura e l'uso di animali approvati dal Comitato Etico locale Karolinska Institutet, Stoccolma. Il Comitato Etico locale segue le direttive dell'Unione europea in materia di cura degli animali.

NOTA: I principali cambiamenti rispetto al protocollo originale sono il tempo di recupero dopo l'intervento chirurgico (6 ore contro 1 ora) e il livello di LPS iniettati (2 mg / kg contro 15 mg / kg). In caso contrario, le diverse impostazioni relative alla chirurgia stessa non sono stati modificati.

1. prepar....

Results

Livello di TNFa e interleuchina-1β (IL-1β) dopo aver aumentato il Time Lapse dopo l'intervento e ridurre la dose di LPS

Come mostrato in precedenza, utilizzando il protocollo originale, VNS diminuzione dei livelli di TNFa (169,3 ± 24,9 pg / mg in SHAM contro 39,7 ± 10,8 pg / mg in VNS, p <0.001) e IL-1β (360.0 ± 40.21 pg / mg SHAM contro 191,7 ± 27,2 pg / mg in VNS, p <0,01) nella milza dopo l'iniezione intraperitoneale di .......

Discussion

Fin dalla sua scoperta nei primi anni 2000, i meccanismi della PAC sono stati accuratamente studiati. Ora abbiamo una buona immagine del percorso, e in particolare, l'organo bersaglio, la milza, dove NE, le cellule T memoria, Ach, e macrofagi lavorare come una squadra molto efficiente per down-regolare mediatori infiammatori ^2. Abbiamo inoltre recentemente pubblicato dati sulla importanza di un sistema prostaglandine funzionale nei topi, in particolare, PGE _2, che è ovviamente un c.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Computer	Toshiba-Qualsiasi		computer è effettivamente compatibile
MP-150 sistema di acquisizione dati	Biopac Systems	MP150WSW
Acknowledge software	Biopac Systems
Mice C57Bl / 6	Charles River
Macchina per anestesia	Simtec Engineering
Bombola di ossigeno medica	AGA	107563
Bombola d'aria medica	AGA	108639
Vetflurano (1.000 mg/g)	Virbac	137317
LPS	Sigma-Aldrich	L2630
Soluzione salina	Merck Millipore	1024060080
PBS 10x	Sigma-Aldrich	P5493	Diluito 10 volte per la concentrazione utilizzata
Siringa (1 ml)	BD Plastipak	303172
Aghi 23 G	KD-FINE		0,6 x 30 mm (blu)
Pinza per microdissezione (curva)	Sigma-Aldrich	F4142
Forbici da dissezione	Sigma-Aldrich	Z265969
Sutura chirurgica 4-0	Ethicon	G667G
Unità di eutanasia	Euthanex Smartbox	EA-32000
Cavilon No Sting Barrier Film	3M Health Care	3346N
TH1/TH2 9-Plex assay, kit ultrasensibile	MesoScale Discovery	K15013C-1
Dispositivo con elettrodi stimolanti	Biopac Systems	STIMSOC
Aesculap Isis rasoio	Agnthos	GT420
R70			Dieta per roditori da Lantmannen, Stoccolma, Svezia