Summary
אנחנו להמחיש שיטה ישר קדימה כדי להפיק מאתר ראשי מקרופאגים מתאי מח עצם, שיטה פשוטה להכנת BSA-חומצות conjugates. ואז נדגים כי חומצות שומן רוויות יכול לגרום מוות תאי מקרופאג, כגון מוות של תאים קשורה באופן חיובי הסלולר הצטברות ceramide רמות.
Abstract
מקרופאגים לבטא מאוד אפידרמיס חומצת שומן מחייב חלבון ואת אדיפוז חומצת שומן מחייב חלבון. הם באופן פעיל ספיגת רווי, חומצות שומן בלתי רוויות, אשר עשויים לשחק תפקיד קריטי בוויסות פונקציות החיסונית שלהם. מחקרים רבים הראו כי חומצות שומן שונות, רווי או במאי רוויים, בעלי השפעות שונות על צמיחת תאים ותפקוד. עם זאת, הגישות המשמש להכנת חומצת שומן משתנים, אשר עלול להוביל לתוצאות שאינן-פיזיולוגיים. אלבומין, נשאית הטבעי של חומצות שומן בדם היקפי יונקים, מומלצת ויוצרים את המספר המשלים מורכבים עם מלח הנתרן של חומצות שומן כדי לחקור פונקציה חומצת שומן בתאי יונקים, ובכך לחסוך הרעילות של חומצת שומן סבון. לפיכך, פשוט, מהיר יחסית חימום, sonicating שיטה שפותחה, המובאת כאן על היווצרות תרכיב חומצה BSA-שומן. אנו מתארים פרוטוקול באמצעות חומצות שומן רוויות, חומצות סטארית במיוחד כדי לגרום מוות תאי חמור ב העכבר מח נגזר מקרופאגים. נדגים בהמשך כי מות תאים הנוצרות על-ידי חומצות שומן רוויות קשורה באופן חיובי ceramide הסלולר שהצטברו רמות. בשיטה זו ניתן להרחיב ללימודי ההשפעה של חומצות השומן בתאי יונקים אחרים.
Introduction
חומצות שומן לשחק תפקיד חיוני לחילוף חומרים של אנרגיה, הסינתזה של קרום phospholipids סוגים שונים של תאים. חומצות שומן יש המסיסות מימית נמוכה. הכנה מתאימה של חומצות שומן יש חשיבות קריטית ללמוד על תפקודים ביולוגיים של חומצות שומן בתאי יונקים. כאשר חומצות שומן מוכנים עם אתנול, חומצות שומן רבים עשוי להראות השפעתם רעילים סבון (דטרגנטים) על קרום התא, אפילו בריכוזים נמוכים יחסית1. בתור נהג טבעי, רס ן עבור חומצות שומן בחינם בהסרום, אלבומין נחשב נשאית טוב של חומצת שומן משלוח במבחנה חומצת שומן פונקציה מבחני2,3,4. עם זאת, הפרטים של הכנת המספר המשלים חומצת שומן, אלבומין בדרך כלל אינם זמינים אף-על-פי פורסמו עבודות מחקר רבות באמצעות חומצות שומן.
מקרופאגים לבטא מאוד אפידרמיס חומצת שומן מחייב חלבון ואת אדיפוז חומצת שומן מחייב חלבון5,6,7,8. הם באופן פעיל ספיגת רווי, חומצות שומן בלתי רוויות אשר ייתכן לווסת פונקציות החיסונית שלהם. לחקור את ההשפעה של חומצות שומן על מקרופאגים ותאים אחרים, שיטות שונות של הכנת חומצות שומן היו יישומית1,7,9. באמצעות חומצת שומן מוכן כראוי/סרום אלבומין conjugates לחקור את ההשפעה של חומצות השומן על תפקוד מקרופאג יש חשיבות קריטית בקבלת נתונים משמעותיים מבחינה ביולוגית. מחקרים על ההשפעה של חומצות השומן על תפקוד מקרופאג יכול לספק ידע בסיסי פוטנציאלים טיפולית הנוגעים מטבוליזם חומצות שומן מעורב מקרופאג מחלות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
הפרוטוקול אושרה על ידי טיפול בעלי חיים מוסדיים ועל שימוש הוועדה (IACUC) של אוניברסיטת לואיוויל.
1. עכבר מח עצם נגזר מקרופאגים (BMDMs)
- Euthanize עכבר 6 עד 8-בת, בריא פראי סוג באמצעות CO 2. להצמיד אותו למטה לוח קצף, תשפריץ עם אתנול 70% עד שהכל רטוב. הסר את עצמות השוקה/עצם הירך עם מלקחיים ומספריים. להכניס אותה צלחת פטרי עם 5 מ ל 1 x באגירה פוספט תמיסת מלח (PBS). ביצוע כל ההליכים בתנאים סטריליים.
- לפתוח בשני הקצוות של עצם השוקה/הירך עם מספריים בשכונה תרביות רקמה סטרילי. לשטוף את העצם עם מחט 25 גרם עם PBS + 2% סרום שור עוברית (FBS) לתוך צינור 15 mL-
- Centrifuge התאים במח העצם ב 500 x g, 4 מעלות צלזיוס במשך 5 דק.
- Resuspend בגדר תא במאגר פירוק תאי הדם האדומים 1 מ"ל ל lyse תאי דם אדומים (RBC) עבור פחות מ 1 מינימלית Dilute מיד עם PBS 1 x 9 מ. צנטריפוגה שוב כמו שלב 1.3. Decant supernatants.
- Resuspend בגדר תא ב- PBS 1 x 10 מ"ל, לסנן התליה תא דרך רשת ניילון סטרילי μm 40 לתוך צינור אחר 15 מ"ל להסיר תא פסולת/גושים. צנטריפוגה שוב כמו 1.3. Decant supernatants.
- Resuspend בגדר תא ב 15 מ"ל רוזוול פארק אנדרטת מכון בינוני (RPMI) 1640 עם 5% FBS ו 10 גנטמיצין μg/mL, צלחת שהתאים בקערה תרביות רקמה 100-מ מ- 37 חממה o C עבור 60 דקות מערבולת בעדינות את המנה להוציא הצפים תאים, ולספור אותם.
- צלחת 6 x 10 6 תאים בצלחת 100-מ מ עם 12 mL מקרופאג המבדילים מדיה (RPMI 1640 עם 5% FBS ו גנטמיצין μg/מ"ל, מעורבב עם 30% L929 media ממוזגים 10) עם 10 ננוגרם למ"ל העכבר רקומביננטי מקרופאג המושבה-מגרה פקטור (M-CSF) במשך יומיים.
- לאחר culturing 2 ימים בחממה 37 ° C עם 5% CO 2, להאכיל כל מנה עם 6 מ ל מקרופאג טריים המבדילים מדיה עם 10 ננוגרם למ"ל M-נוזל מוחי-שדרתי.
- ביום 5, לקחת 8 מ של אמצעי התקשורת הישנים החוצה מבלי להפריע את התאים ולהוסיף 10 מ"ל מקרופאג טריים המבדילים מדיה עם 10 ננוגרם למ"ל M-נוזל מוחי-שדרתי.
- ביום 7, לקצור את מח העצם, נגזר המקרופאגים (BMDMs) באמצעות של מרים תא.
הערה: מקרופאגים המצורף יכול גם להיות חלופה מועדפת עם 5 מ ל 1 מ"מ EDTA ב- PBS 1 x 5-10 דקות לאחר הסרת התאים צפים ושטיפת צלחת פעמיים עם PBS 1 x מ. Centrifuge התאים כמו שלב 1.3. resuspend אותם ב מקרופאג טריים המבדילים מדיה, נספור hemocytometer.- אשר BMDMs ' פנוטיפ מאת cytometry זרימה כמו שמתואר 5. להכין העכבר נגזר מקרופאגים בריכוז מסוים עבור המחקרים הבאים.
2. הכנה נזווג חומצת שומן BSA
- להכין 2 מ מ BSA ב- PBS סטרילי. לדוגמה, שוקל 6.65 g BSA, להוסיף 30 מ ל 1 x PBS להתמוסס, ואז להוסיף PBS יותר עד 50 מל ', קנה מידה של רכיבים כדי להפוך 2 מ מ BSA PBS 1 x.
- הכן 5 מ מ מלח נתרן בודדים של חומצות שומן ב- 2 מ מ BSA. מחממים עד 37 מעלות צלזיוס או יותר, אם יש צורך בכך, sonicate התערובת של 2 מ מ BSA ומלח נתרן של חומצות שומן עד מתקבל פתרון ברור.
הערה: בהשוואה חומצות שומן בלתי רוויות, חומצות שומן רוויות צריך טמפרטורה גבוהה יותר וזמן sonication יותר בשביל המסת.
מסנן - מסנן הפתרון שומן-חומצה-BSA דרך 0.22 μm, aliquot אותו microcentrifuge סטרילי 1.5 mL צינורות, ואחסן אותם ב 4 ° C לשימוש לטווח קצר או ב-20 ° C לאחסון לטווח ארוך. אין משקעים להתייחס לאחר אחסון ב 4 ° C במקרר.
3. רוויות חומצות שומן זירוז תא מותו של עכבר מח עצם נגזר מקרופאגים
- צלחת את BMDMs בצלחת תרביות רקמה 24-ובכן עם 0.4 x 10 /mL 6 ב מקרופאג המבדילים מדיה.
- פנקו את התאים עם חומצה פלמיטית 0.4 מ מ, חומצה סטארית עבור 16 עד 24 h בחממה 37 ° C עם 5% CO 2. השתמש BSA של הפקד שלילי.
- לקצור את התאים עם מרים תא לאחר הטיפול, ספין למטה התאים ב 500 g x, 4 מעלות צלזיוס במשך 5 דק.
- מכתים את התאים עם Annexin V-Alexa 488 ו- 7-aminoactinomycin D (7-מ) 100 μL annexin V מאגר איגוד למשך 15 דקות בטמפרטורת החדר.
- לדלל את הדגימה עם 200 µL מאגר מחייב annexin, מערבבים בעדינות, ואז שומרים את הדגימות על הקרח לאחר תקופת הדגירה.
- לנתח את התאים מוכתם בהקדם האפשרי על ידי cytometry זרימה 5. Annexin V-Alexa 488 מזוהה בערוץ FITC, 7-מ ומתגלה בערוץ PerCP/PerCP-Cy5.5.
4. צביעת Ceramide תאיים
- לאחר טיפול חומצת שומן, לקצור את התאים כמו שלב 3.3. אז תתקן את התאים ב- 4% paraformaldehyde במשך 30 דקות
- לרחוץ את הדגימה עם PBS 1 x 1 מ"ל, ספין למטה כמו 3.3, ולקבל את תגובת שיקוע decant.
- כתם התאים עם נוגדן anti-ceramide הראשי (דילול 1:200) במאגר 100 μL 1 x permeabilization במשך 30 דקות
- שטיפת ו ספין למטה את התאים שוב כמו שלב 4.2.
- כתם התאים עם אנטי-העכבר IgM משני נוגדנים (דילול שבערך) במאגר 100 μL 1 x permeabilization במשך 30 דקות
- שטיפת ו ספין למטה שוב כמו שלב 4.2 התאים. להוסיף 250 μL 1 x PBS ולנתח את התאים מוכתם על ידי cytometry זרימה 5.
הערה: ראה את הרשימה ריאגנט מפורט בטבלה של ציוד, ריאגנטים.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
השמנת יתר מגדילה את ריכוז חומצות השומן החופשיות בנסיוב. כמו המקצועי phagocytes, מקרופאגים פעיל לקחת את חומצות השומן כדי לשמור על הומאוסטזיס המארח. במהלך תהליכים אלה, ליפידים עומס יתר עלול לגרום מוות תאי מקרופאג. לשם כך, אנו תרבותי BMDMs במבחנה עם רמות מהשמנת יתר של חומצות שומן תזונתיים מוות תאי מקרופאג נמדד באמצעות זרימת cytometric מכתים. בהשוואה הפקד BSA, חומצות שומן רוויות, בפרט חומצות סטארית, המושרה בתא משמעותיים מות BMDMs. תאים מתים הוצגו כמו אוכלוסיות חיובית כפולה מוכתמת Annexin V ו- 7-מ (איור 1 א'-ב'). ראוי לציין, חומצות שומן בלתי רוויות זירוז לא משמעותי מקרופאג לתא המוות5. הנתונים מראים את השפעת רמות גבוהות של חומצות שומן רוויות ויוורעילים.
באופן דומה, באמצעות קו תא מקרופאג הכדאיות של מי היה רגישים לטיפול פלמיטית חומצות או חומצות סטארית5, מצאנו כי הרגישות של מקרופאגים מוות תאי חומצה פלמיטית-induced הושפע גם מספר תאים התרבות (איור 2 א). במילים פשוטות, בתנאים התרבותיים אותו, את המקרופאגים יותר בתוך הבארות, מות תאים פחות המושרה על ידי חומצות שומן. יתר על כן, מוות של תאים חומצה פלמיטית-induced היה קשור באופן חיובי רמות מצטבר של סרמידים סלולרי (איור 2b). כאשר מקרופאגים היו תרבותי במצב בצפיפות גבוהה, חומרים מזינים בינוני היו מרוקן מהר יותר זמן לחילוף חומרים של אנרגיה, תאים אלה היו פחות רגישים מוות תאי חומצה פלמיטית-induced בהשוואה מקרופאגים תרבותי במצב בצפיפות נמוכה. לעומת זאת, כאשר תאים נחשפו למצב התזונתי מועשרת (למשל, השמנת יתר), יכול להיות מטבוליזם חומצות שומן עודף לייצר סרמידים רעילים, ובכך מובילים למוות תא חומצת שומן-induced. לפיכך, תנאי התרבות התא יכול להביא וריאציה על פי התוצאות של מוות של תאים הנוצרות על-ידי חומצות שומן רוויות.
איור 1: ריכוז גבוה של חומצות שומן, במיוחד סטארית חומצות, לגרום מוות תאי מקרופאג. BMDMs (יום 7) מצופים כמו 0.4 x 10 /mL6ב מקרופאג טריים המבדילים מדיה. לאחר התא מצורף עבור 0.5-1 h, BMDMs שטופלו את ריכוז חומצת שומן כל ייעודי עבור 24 ה מדיה לבד BSA שימשו כפקדי שלילי. לאחר הטיפול, התאים היו הרים שנקטפו ואז טוו למטה-500 גרם במשך 5 דקות ב 4 º C. התאים היו מוכתמים 7-מ, Annexin V אלקסה 488 במאגר מחייב annexin μL 100 למשך 15 דקות. לאחר מכן להוסיף עוד 200 μL מחייב annexin מאגר כל מדגם לפני ניתוח cytometry זרימה. (א) הפגנה של נתונים cytometry זרימה של תאים המושרה על ידי חומצות שומן. סיכום (B) על מותו תא המושרה על ידי חומצות שומן. קו שגיאה מייצג מדגם SD. מות תאים המושרה על ידי חומצה פלמיטית (PA), חומצה סטארית במיוחד (SA) הוא משמעותי סטטיסטית לעומת של BSA הפקד. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
איור 2: הזמינות של הרגישות של מקרופאגים השפעות התקשורת חומרים מזינים חומצה פלמיטית המושרה תא מוות. (א) מצב התזונה תא משפיע שלה עמידות בפני מתח הנוצרות על-ידי חומצות שומן רוויות. (B) תא הרגישות מוות תאי המושרה חומצות שומן רוויות מאוד בקורלציה עם רמות הסלולר שהצטברו ceramide. מעבר הצבע התזונתי של מדיה הושגה על ידי culturing הקו תאי מקרופאג פראי סוג בגובה 1 מ', 2 מטר, 4 מ ' 8 מ' (M = 1 x 106) מ מ 6 צלחות פטרי עם 6 mL 1640 RPMI עם 5% FBS ו גנטמיצין μg/mL 10 עבור משאבי אנוש 18. הצבע מדיה הוא צהוב יותר בשל המחסור התזונתי יותר כאשר מספר גדול של תאים מתורבתים של המנות. יותר מ- 90% של התאים הם עדיין מאוד מעשית. התאים קיימא המצורף על ידי pipetting אחרי שישב ב- PBS במשך 5 דקות, מחדש תרבותי מיד-0.2x10 /mL6בתקשורת טריים ב- 24-ובכן צלחות. תאים שטופלו מיד 0.4 מ מ חומצה פלמיטית עבור 18 h שימוש BSA הפקד עבור כל מקור (מזין הדרגתי) של תאים. ואז כל התאים שטופלו היו שנקטפו צבעונית עם 7-מ עבור מוות של תאים או מוכתם ceramide תאיים. מוות תאי ספונטני (7-מ +) אחוזים היו פחות מ- 8.6%. מוות של תאים ספציפיים הטיפול הוערך כהפרש % ב- 7-מ + בין טיפול משלו BSA לשלוט (א). רמת טיפול ספציפי ceramide הוערך כהפרש בעוצמה (MFI) רשע זריחה בין הטיפול ו- בקרה משלו BSA (b). הניסוי הזה חזר על עצמו, נציג נתונים מוצגים. קו שגיאה מייצג מדגם SD. אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
הכנה נכונה של חומצת שומן פתרון יש חשיבות קריטית כדי ללמוד את התפקוד הביולוגי של חומצות שומן. הניטרול של חומצת שומן מעלה מסיסות שלה ב תמיסה מימית. עם זאת, מלחי נתרן של חומצות שומן, בעיקר חומצות שומן רוויות, הן עדיין של מסיסות נמוכה במים או PBS הבחנו. שיטה אחת היא להשתמש אתנול 95-100% כדי לסייע לפזר את חומצת שומן1. באמצעות שיטה זו, רעילות גבוה יותר לתאים ייבחנו אפילו בריכוזים נמוכים עבור חומצות שומן בלתי רוויות פחות רעיל. דרך נוספת להכין פתרון חומצת שומן היא לנצל מתיל-β-cyclodextrin כמערכת משלוח כך חומצות שומן יש תנאים אופטימליים, שנותרו בתמיסה שלהם טופס monomeric9,11. חומצות שומן שהוכנו עם השיטה הופיע לי תפקוד תקין, אך ניצוח השיטה היא מסובכת. ההשפעה של מתיל-β-cyclodextrin על צמיחת תאים הוא כי ריכוז גבוה יכול להוביל לתא המוות12. עבור חומצות רוויות של סטארית, palmitic, חום גבוה (60 oC) משמש כדי לעזור עם solubilization9.
מאז אלבומין הוא חלבון חומצת שומן-איגוד מרכזי בתוך נוזל חוץ-תאי, אשר מסייע בהעברת חומצות שומן במערכות הלימפה ואת כלי הדם, זה הוא המועדף כנשא טבעי לצורך המחקר פונקציונלי של חומצות שומן. כדי למנוע את מסיסות נמוכה של חומצות שומן מלח ב תמיסה מימית, sonication מאוד יקל את ההטיה של חומצות שומן עם BSA, ובכך מסייע בחומצת שומן solubilization. זה לוקח הרבה יותר זמן (שעות) כדי solubilize של חומצות שומן רוויות יותר חומצות שומן בלתי רוויות (30 דקות) עם אותה כמות של ריכוז ונפח. למרות sonication והחימום הם קריטיים עבור ההטיה חומצה BSA-שומן, חום גבוה (פחות מ-50 oC) הוא הציע עבור BSA ברורה להשיג-PA, פתרונות תרכיב BSA-SA, טמפרטורה נמוכה מומלץ מאוד עבור solubilizing חומצות שומן בלתי רוויות בשל הרגישות שלהם כדי חמצון בטמפרטורה גבוהה. 5:2 יחס טוחנת של חומצת שומן ל BSA נחשב טוב לעומת ה-3:1 או 6:1 יחס טוחנת שהיה פורסם7. זה יכול להבטיח פחות חומצות שומן בחינם לגמרי בפתרון כדי למנוע הרעילות של חומצת שומן סבון. חומצות שומן BSA שהוכנו בדרך זו נראה פתרונות יציבים (אין משקעים, לפחות) ב 4 מעלות צלזיוס במשך 3 חודשים לפחות כפי שמוצג הפונקציונליות שלהם על מוות תאי מקרופאג. חותם הכובע של הצינור אם מוכן חומצות שומן הן לא אמור לשמש במשך תקופה ארוכה של זמן.
כאשר מתקבל פתרון ברורים חומצה שומן BSA PBS, תוצאות עקביות מטיפול חומצת שומן סביר יותר מוצדקת. עם זאת, מקרופאגים מורעבים וחסרי מוזן היטב מגיבים בצורה שונה למדי לטיפול חומצת שומן, חומצות שומן רוויות במיוחד. מקרופאגים עם עודף חומרים מזינים רגישים יותר מוות תאי הנוצרות על-ידי חומצת שומן רווי מאשר מרעב או מורעבים אלה כי תאים hungered סמויה יכול לטהר את חומצות שומן רוויות עקב בקשתם הישרדות וצמיחה. מות תאים כאלה קשורה מאוד עם רמות ceramide הסלולר שהצטברו. ראוי לציין, ceramide רעילות מתרחשת רק כאשר רמות ceramide תאיים להגיע לסף מסוים. כדי להבטיח תוצאות עקביות מקרופאגים חומצת שומן מטופלים או כל סוג אחר של תאים, התאים צריכים להיות מחונן עם מדיה טריים עם חומרים מזינים בשפע כל התנאים תרבות תא תת אופטימלית עלולה לגרום בנתוני תת אופטימלית.
בסך הכל, פרוטוקולים אלה מספקים שמאוד הכרחי פרטים ללמוד את ההשפעה של חומצות השומן על מקרופאגים על ידי מעבדות אחרות. לעומת שיטות אחרות, גישה ישירה זו יוצרת conjugates חומצה BSA-שומן ללא שימוש של הממס נוספות כמו אתנול. הצעד המאתגר ביותר היא להכין מדויק, יציבה תמיסה חומצית BSA-שומן כי sonication יוצר חום וזה קשה בקרת טמפרטורה. למרבה המזל, חומצות שומן בלתי רוויות הן קל להכין בזמן קצר, נותרים יציבים, בעוד חומצות שומן רוויות מופיע לעמוד. בטמפרטורה גבוהה יחסית כי הם רוויים, עמיד בפני חמצון במצב כזה. עד כה, לא הבחנו שכל בעיה או הגבלה עם conjugates חומצה שומן BSA שהוכנו בדרך זו. שינוי של פרוטוקול שלנו יהיה הכרחי אם נדרשים ניסויים רגיש יותר.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
המחברים מצהירים שאין ניגודי אינטרסים כספיים.
Acknowledgments
עבודה זו נתמכה חלקית על ידי ראשונית אוניברסיטת לואיוויל ומענקים המכון הלאומי לסרטן (בת'סדה, מרילנד) R01CA177679, R01CA180986.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| CPX Ultrasonic Bath | Bransonic | Model 2800 | |
| Sodium palmitate (PA) | Nu-Chek Prep, Inc. | S-1109 | M.W. 278 |
| Sodium stearate (SA) | Nu-Chek Prep, Inc. | S-1111 | M.W. 306 |
| Bovine serum albumin (BSA), fatty acid-free | Fisher Scientific | 9048-46-8 | |
| Mouse macrophage colony stimulating factor (mM-CSF) | Cell Signaling Technology, Inc. | 5228 | |
| RPMI 1640 | VWR International | 71002-878 | |
| Annexin V, Alexa Fluor 488 conjugate | Fisher Scientific | A13201 | |
| 7-AAD | BD Biosciences | 559925 | |
| Monoclonal anti-ceramide antibody (mouse IgM) | Sigma | C8104-50TST | Clone: MID 15B4 |
| Goat Anti-Mouse IgM Antibody, µ chain, FITC conjugate | Sigma | AP128F | |
| Fixation buffer | Biolegend | 420801 | |
| Permeabilization buffer | Ebioscience | 4307693 | |
| Red Blood Cell Lysis Buffer | Sigma | 11814389001 | |
| Annexin V Binding Buffer | BD Biosciences | 556454 | |
| L929 cells | ATCC | CCL-1 | |
| Corning Cell Lifter | Fisher Scientific | 07-200-364 | |
| Note: M.W. is for molecular weight. |
References
- Martins de Lima, T., Cury-Boaventura, M. F., Giannocco, G., Nunes, M. T., Curi, R. Comparative toxicity of fatty acids on a macrophage cell line (J774). Clin Sci (Lond). 111 (5), 307-317 (2006).
- Simard, J. R., Zunszain, P. A., Hamilton, J. A., Curry, S. Location of high and low affinity fatty acid binding sites on human serum albumin revealed by NMR drug-competition analysis. J Mol Biol. 361 (2), 336-351 (2006).
- Penn, A. H., Dubick, M. A., Torres Filho, I. P. Fatty Acid Saturation of Albumin Used in Resuscitation Fluids Modulates Cell Damage in Shock: In Vitro Results Using a Novel Technique to Measure Fatty Acid Binding Capacity. Shock. , (2017).
- Vusse, G. J.
- Zhang, Y., et al. Adipose Fatty Acid Binding Protein Promotes Saturated Fatty Acid-Induced Macrophage Cell Death through Enhancing Ceramide Production. J Immunol. 198 (2), 798-807 (2017).
- Zhang, Y., et al. Epidermal Fatty Acid binding protein promotes skin inflammation induced by high-fat diet. Immunity. 42 (5), 953-964 (2015).
- Wen, H., et al. Fatty acid-induced NLRP3-ASC inflammasome activation interferes with insulin signaling. Nat Immunol. 12 (5), 408-415 (2011).
- Zhang, Y., et al. Fatty acid-binding protein E-FABP restricts tumor growth by promoting IFN-beta responses in tumor-associated macrophages. Cancer Res. 74 (11), 2986-2998 (2014).
- Ulloth, J. E., Casiano, C. A., De Leon, M. Palmitic and stearic fatty acids induce caspase-dependent and -independent cell death in nerve growth factor differentiated PC12 cells. J Neurochem. 84 (4), 655-668 (2003).
- Weischenfeldt, J., Porse, B. Bone Marrow-Derived Macrophages (BMM): Isolation and Applications. CSH Protoc. , (2008).
- Dansen, T. B., et al. High-affinity binding of very-long-chain fatty acyl-CoA esters to the peroxisomal non-specific lipid-transfer protein (sterol carrier protein-2). Biochem J. 339 (Pt 1), 193-199 (1999).
- Ulloth, J. E., et al. Characterization of methyl-beta-cyclodextrin toxicity in NGF-differentiated PC12 cell death. Neurotoxicology. 28 (3), 613-621 (2007).
