Summary

Transuretrale Instillation Procedure in volwassen mannelijke muis

Published: November 02, 2017
doi:

Summary

Transuretrale instillatietest is een uitdagende procedure en is niet goed beschreven in de literatuur. Het doel van dit manuscript is om een techniek voor transuretrale inbrengen van een katheter voor intravesicale levering van vloeistoffen met werkzame stoffen in de urineblaas en/of de prostaat bij volwassen mannelijke muizen te beschrijven.

Abstract

Transuretrale instillation kan worden gebruikt voor het leveren van verschillende oplossingen met werkzame bestanddelen (bijvoorbeeld drugs, chemische stoffen, bacteriën en virussen) lokaal in de urineblaas diermodellen aandoeningen van de blaas veroorzaken of evalueren de effectiviteit van intravesicale behandelingen. Meest knaagdier modellen van de lagere urinewegen (LUT) pathologieën zijn geïnduceerd in vrouwelijke muizen verschuldigd aan gebruiksgemak intravesicale instillation van de stoffen via de vrouwelijke urinebuis. Echter, als gevolg van anatomische verschillen tussen de vrouwelijke en mannelijke LUT, transuretrale instillation in een mannelijke muis heeft een zeer uitdagend procedure geacht, en het is niet eerder beschreven. In dit manuscript bieden wij een gedetailleerde beschrijving van het opstellen van polyethyleen (PE) slang voor latere inbrengen in de urinebuis van een mannelijke muis. Daarnaast bespreken we de ideale soorten PE buizen worden gebruikt afhankelijk van de gewenste plaats van inoculatie. Daarnaast beschrijven we punt door punt hoe voor te bereiden van een dier voor een succesvolle transuretrale instillation te voorkomen van schade aan de urethra en zorgen voor de levering van de oplossing naar de gewenste locatie. De procedure wordt gestart door het intrekken van de voorhuid en de eikel bloot van de opening van de urethrale neusgang. Vervolgens zijn de glans begrepen door botte niet breken pincet te stabiliseren van de penis en de PE-buis. De PE slang eerst wordt ingevoegd in de urethrale neusgang parallel aan het dierlijk lichaam, dan de hoek wordt aangepast door het kantelen van de katheter om te manoeuvreren om te volgen de natuurlijke kromming van de urinebuis. Deze techniek kan worden gebruikt om geïnduceerde lymfkliertest modellen van aandoeningen van de blaas en/of de doeltreffendheid van intravesicale behandelingen bij mannelijke muizen.

Introduction

De transuretrale instillation aanpak in eerdere studies is gebruikt als een van de methoden om knaagdieren modellen van blaas pathologieën1,2,3,4 te maken en kan worden gebruikt voor het evalueren van de effectiviteit van lokaal geleverde behandelingen in muizen. Hoewel diermodellen kunnen niet volledig menselijk pathologieën recapituleren, biedt identificatie van de onderliggende mechanismen in dierstudies een beter begrip van de menselijke LUT aandoeningen zoals interstitiële cystitis/blaas pijnsyndroom, neurogene blaasontsteking, auto-immune blaasontsteking en prostaat ontsteking5.

De transuretrale instillation procedure uitgevoerd op een volwassen mannelijke muis is meer technisch uitdagend dan intravesicale instillation in een volwassen vrouwelijke muis6. De natuurlijk gebogen anatomie van de mannelijke urethra samen met zijn kleine diameter maken het technisch moeilijk te bereiken het transuretrale inbrengen van een katheter. Daarom, gedetailleerde instructies voor de transuretrale inductie van muis urinewegen infectie6 en LUT ontsteking7,8,9,10,11 , 12 , 13 , 14 , 15 via katheter blaas-ingevoegd werden eerder geschetst voor vrouwelijke muizen alleen. Dit manuscript heeft tot doel een stapsgewijze beschrijving van de techniek voor transuretrale instillation van stoffen in mannelijke muizen met inbegrip van de videofragmenten, afbeeldingen en illustraties. Transuretrale instillation procedures in een volwassen mannelijke muis kunnen worden uitgevoerd met variabele inoculates vergelijkbaar met die eerder beschreven in de vrouwelijke muis7 en samengevoegd met aanvullende technieken zoals electromyogram opnames van visceromotor Reacties (VMR)16.

Protocol

alle procedures met dieren, met inbegrip van de methode en de duur van de verdoving, evenals de postoperatieve zorg, werden met een dierenarts besproken en goedgekeurd door de institutionele dier zorg en gebruik Comité (IACUC) op de gelieerde instelling. In dit manuscript, alle procedures werden uitgevoerd met 8 to 15-week-oude C57BL/6 mannelijke muizen en het protocol volgt de dierenverzorgers richtsnoeren goedgekeurd door de IACUC aan de Universiteit van Colorado. 1. voorbereiding van buize…

Representative Results

Transuretrale instillation van blauwe kleurstof via PE 50 buis resulteerde in instillation van de kleurstof in de urineblaas (figuur 4A), en via PE 10 buizen in kleuring van de SV en AP (figuur 4B), respectievelijk. Om te beoordelen of de uitgevoerde transuretrale instillation een instant terugvloeiing van het entmateriaal aan de nieren of niet veroorzaakt, werden de nier en de ureter waargenomen gevolgd door toediening van 100 ?…

Discussion

Dit manuscript wordt een methode van transuretrale instillation in volwassen mannelijke muis in detail beschreven. Differentiële primaire seeding gebied kan worden bereikt met behulp van PE leidingen van verschillende diameters. PE-50 wordt aanbevolen voor het succesvol bereiken van de urineblaas lumen, terwijl een grotere diameter die PE-10 wordt gebruikt voor het bereiken van de AP en SV (figuur 3A-B). Naast de keuze van de grootte van PE buizen en doel orgel voor inocula…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

De auteurs hebben niet alle bevestigingen.

Materials

BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 10 BD Medical 63019-004
BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 50 BD Medical 63019-048
BD Insyte-N Autoguard/ Angiocath BD Medical 311411
Ethanol (EtOH) Fisher Scientific BP2818500
BD Needle Only 22 Gauge (G) 1 inch Becton Dickson 205155
BD Needle Only 27 Gauge (G) 1/2 inch Becton Dickson 305129
Luer stub, 22 G X 0.5 in / Blunt Needle Instech LS22
Luer stub, 27 G X 0.5 in / Blunt Needle Instech LS27
6" Long x 2" Wide x 1" Thick, Aluminum Oxide Sharpening Stone / Oil Stone Norton 40204034
Surgical Lubricant Sterile Bacteriostatic Folilpac Surgilube 281020543
Isoflurane Fluriso 13985-528-60
SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System Kent Scientific SS-01
Dissecting Forceps, Curved vwr 82027-392
BD 1 ml Syringe BD Medical 309626
India Ink Solution., 0.2% in PBS buffer Alfa Aesar J61007
8~12 weeks old male C57B/6 Mice Jackson Lab #000664

Riferimenti

  1. Lee, S., Yang, G., Bushman, W. Prostatic inflammation induces urinary frequency in adult mice. PLoS One. 10 (2), e0116827 (2015).
  2. Wong, L., Hutson, P. R., Bushman, W. Prostatic inflammation induces fibrosis in a mouse model of chronic bacterial infection. PLoS One. 9 (6), e100770 (2014).
  3. Elkahwaji, J. E., Zhong, W., Hopkins, W. J., Bushman, W. Chronic bacterial infection and inflammation incite reactive hyperplasia in a mouse model of chronic prostatitis. Prostate. 67 (1), 14-21 (2007).
  4. Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. Acute bacterial inflammation of the mouse prostate. Prostate. 72 (3), 307-317 (2012).
  5. Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Bushman, W. Models of inflammation of the lower urinary tract. Neurourol Urodyn. 30 (5), 673-682 (2011).
  6. Thai, K. H., Thathireddy, A., Hsieh, M. H. Transurethral induction of mouse urinary tract infection. J Vis Exp. (42), (2010).
  7. Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Boldon, K., Bushman, W. Bacterial cystitis is accompanied by increased peripheral thermal sensitivity in mice. J Urol. 179 (2), 759-763 (2008).
  8. Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. T. Time course and host responses to Escherichia coli urinary tract infection in genetically distinct mouse strains. Infect Immun. 66 (6), 2798-2802 (1998).
  9. Dinis, P., Charrua, A., Avelino, A., Cruz, F. Intravesical resiniferatoxin decreases spinal c-fos expression and increases bladder volume to reflex micturition in rats with chronic inflamed urinary bladders. BJU Int. 94 (1), 153-157 (2004).
  10. Cayan, S., et al. Botulinum toxin type A may improve bladder function in a rat chemical cystitis model. Urol Res. 30 (6), 399-404 (2003).
  11. Jerde, T. J., Bjorling, D. E., Steinberg, H., Warner, T., Saban, R. Determination of mouse bladder inflammatory response to E. coli lipopolysaccharide. Urol Res. 28 (4), 269-273 (2000).
  12. Saban, M. R., et al. LPS-sensory peptide communication in experimental cystitis. Am J Physiol Renal Physiol. 282 (2), F202-F210 (2002).
  13. Schilling, J. D., Mulvey, M. A., Vincent, C. D., Lorenz, R. G., Hultgren, S. J. Bacterial invasion augments epithelial cytokine responses to Escherichia coli through a lipopolysaccharide-dependent mechanism. J Immunol. 166 (2), 1148-1155 (2001).
  14. Saban, M. R., et al. Discriminators of mouse bladder response to intravesical Bacillus Calmette-Guerin (BCG). BMC Immunol. 8, 6 (2007).
  15. Bjorling, D. E., et al. Acute acrolein-induced cystitis in mice. BJU Int. 99 (6), 1523-1529 (2007).
  16. Sadler, K. E., Stratton, J. M., Kolber, B. J. Urinary bladder distention evoked visceromotor responses as a model for bladder pain in mice. J Vis Exp. (86), (2014).

Play Video

Citazione di questo articolo
Lee, S., Carrasco Jr., A., Meacham, R. B., Malykhina, A. P. Transurethral Instillation Procedure in Adult Male Mouse. J. Vis. Exp. (129), e56663, doi:10.3791/56663 (2017).

View Video