Transurethrale Instillation Verfahren bei erwachsenen männlichen Maus
Summary
Transurethrale Instillation ist eine anspruchsvolle Verfahren und nicht gut in der Literatur beschrieben. Dieses Manuskript soll eine Technik für transurethrale einführen eines Katheters für intravesikale Lieferung von Flüssigkeiten mit Wirkstoffen in der urinausscheidenden Blase und/oder Prostata bei erwachsenen männlichen Mäusen zu beschreiben.
Abstract
Transurethrale Instillation kann verwendet werden, um verschiedene Lösungen mit Wirkstoffen (z. B. Drogen, Chemikalien, Bakterien und Viren) lokal in der Harnblase zu induzieren Tiermodellen der Blase Pathologien oder bewerten liefern die Wirksamkeit der intravesikale Therapien. Die meisten Nager-Modelle der unteren Harnwege (LUT) Pathologien induziert werden bei weiblichen Mäusen aufgrund der intravesikale Instillation von Stoffen über die weibliche Harnröhre zu erleichtern. Jedoch aufgrund der anatomischen Unterschiede zwischen der weiblichen und männlichen LUT, transurethrale Instillation in einer männlichen Maus wurde als ein anspruchsvolles Verfahren, und nicht vorher beschrieben. In diesem Manuskript bieten wir eine detaillierte Beschreibung des wie Polyethylen (PE) Schläuche für spätere Einfügung in die Harnröhre einer männlichen Maus vorzubereiten. Darüber hinaus diskutieren wir die ideale Arten von PE-Rohren in Abhängigkeit vom gewünschten Ort der Impfung verwendet werden. Darüber hinaus beschreiben wir Punkt für Punkt wie ein Tier für eine erfolgreiche transurethrale Instillation, Verletzungen der Harnröhre zu vermeiden und sorgen für die Bereitstellung der Lösung an die gewünschte Stelle vorzubereiten. Das Verfahren ist eingeleitet durch Zurückziehen der Vorhaut und die Eichel, die Eröffnung des urethralen Meatus verfügbar zu machen. Als nächstes werden die Eichel durch stumpfe-Brech Zange um den Penis und das PE-Rohr zu stabilisieren erfasst. Das PE-Rohr wird zuerst in der urethralen Meatus parallel zum tierischen Körper eingefügt, dann seine Winkel wird durch Kippen des Katheters zu manövrieren, um die natürliche Krümmung der Harnröhre folgen eingestellt. Diese Technik kann verwendet werden, um induzierte murinen Modelle der Blase Pathologien und/oder Bewertung der Wirksamkeit der intravesikale Therapien bei männlichen Mäusen.
Introduction
Die transurethrale Instillation Ansatz wird in früheren Studien als eine der Methoden, um Nager Blase Pathologien1,2,3,4 -Modelle zu erstellen und kann zur Auswertung verwendet werden die Wirksamkeit von lokal gelieferten Behandlungen bei Mäusen. Obwohl Tiermodellen können nicht vollständig menschliche Pathologien rekapitulieren, bietet Identifizierung der zugrunde liegenden Mechanismen in tierexperimentellen Studien ein besseres Verständnis für die menschlichen LUT Störungen wie interstitielle Zystitis/Blase Schmerzsyndrom, neurogene Blasenentzündung, autoimmune Blasenentzündung und Prostata Entzündung5.
Die transurethrale Instillation Eingriff auf einem erwachsenen männlichen Maus ist technisch anspruchsvoll als intravesikale Instillation eines Erwachsenen weiblichen Maus6. Die natürlich geschwungene Anatomie der männlichen Harnröhre zusammen mit seinem kleinen Durchmesser machen es technisch schwierig, die transurethrale einführen des Katheters zu erreichen. Daher, eine ausführliche Anleitung für die transurethrale Induktion der Maus urinausscheidende Fläche Infektion6 und LUT Entzündung7,8,9,10,11 , 12 , 13 , 14 , 15 über Katheter Blase eingefügt wurden zuvor für weibliche Mäuse nur skizziert. Dieses Manuskript soll eine schrittweise Beschreibung der Technik für transurethrale Instillation von Stoffen bei männlichen Mäusen, einschließlich video-Clips, Bilder und Illustrationen. Transurethrale Instillation Verfahren in Erwachsener männliche Mäuse mit Variablen durchgeführt werden können inoculates ähnlich wie zuvor beschrieben in der weiblichen Maus7 und fusionierte mit zusätzlichen Techniken wie Elektromyogramm Aufnahmen von visceromotor Reaktionen (VMR)16.
Protocol
Representative Results
Discussion
Dieses Manuskript beschreibt ausführlich eine Methode der transurethrale Instillation in erwachsenen männlichen Maus. Differenzielle seeding Hauptbereich erreicht mit PE-Rohre mit unterschiedlichen Durchmessern. PE-50 empfiehlt sich für erfolgreich erreichen der Harnblase Lumen, während Sie einen größeren Durchmesser, die, den PE-10 verwendet wird, um die AP und SV (Abb. 3A-B) zu erreichen. Neben der Wahl der Größe von PE-Rohren und Zielorgan für die Impfung Rolle a…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren haben kein Bestätigungen.
Materials
| BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 10 | BD Medical | 63019-004 | |
| BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 50 | BD Medical | 63019-048 | |
| BD Insyte-N Autoguard/ Angiocath | BD Medical | 311411 | |
| Ethanol (EtOH) | Fisher Scientific | BP2818500 | |
| BD Needle Only 22 Gauge (G) 1 inch | Becton Dickson | 205155 | |
| BD Needle Only 27 Gauge (G) 1/2 inch | Becton Dickson | 305129 | |
| Luer stub, 22 G X 0.5 in / Blunt Needle | Instech | LS22 | |
| Luer stub, 27 G X 0.5 in / Blunt Needle | Instech | LS27 | |
| 6" Long x 2" Wide x 1" Thick, Aluminum Oxide Sharpening Stone / Oil Stone | Norton | 40204034 | |
| Surgical Lubricant Sterile Bacteriostatic Folilpac | Surgilube | 281020543 | |
| Isoflurane | Fluriso | 13985-528-60 | |
| SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System | Kent Scientific | SS-01 | |
| Dissecting Forceps, Curved | vwr | 82027-392 | |
| BD 1 ml Syringe | BD Medical | 309626 | |
| India Ink Solution., 0.2% in PBS buffer | Alfa Aesar | J61007 | |
| 8~12 weeks old male C57B/6 Mice | Jackson Lab | #000664 |
Riferimenti
- Lee, S., Yang, G., Bushman, W. Prostatic inflammation induces urinary frequency in adult mice. PLoS One. 10 (2), e0116827 (2015).
- Wong, L., Hutson, P. R., Bushman, W. Prostatic inflammation induces fibrosis in a mouse model of chronic bacterial infection. PLoS One. 9 (6), e100770 (2014).
- Elkahwaji, J. E., Zhong, W., Hopkins, W. J., Bushman, W. Chronic bacterial infection and inflammation incite reactive hyperplasia in a mouse model of chronic prostatitis. Prostate. 67 (1), 14-21 (2007).
- Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. Acute bacterial inflammation of the mouse prostate. Prostate. 72 (3), 307-317 (2012).
- Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Bushman, W. Models of inflammation of the lower urinary tract. Neurourol Urodyn. 30 (5), 673-682 (2011).
- Thai, K. H., Thathireddy, A., Hsieh, M. H. Transurethral induction of mouse urinary tract infection. J Vis Exp. (42), (2010).
- Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Boldon, K., Bushman, W. Bacterial cystitis is accompanied by increased peripheral thermal sensitivity in mice. J Urol. 179 (2), 759-763 (2008).
- Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. T. Time course and host responses to Escherichia coli urinary tract infection in genetically distinct mouse strains. Infect Immun. 66 (6), 2798-2802 (1998).
- Dinis, P., Charrua, A., Avelino, A., Cruz, F. Intravesical resiniferatoxin decreases spinal c-fos expression and increases bladder volume to reflex micturition in rats with chronic inflamed urinary bladders. BJU Int. 94 (1), 153-157 (2004).
- Cayan, S., et al. Botulinum toxin type A may improve bladder function in a rat chemical cystitis model. Urol Res. 30 (6), 399-404 (2003).
- Jerde, T. J., Bjorling, D. E., Steinberg, H., Warner, T., Saban, R. Determination of mouse bladder inflammatory response to E. coli lipopolysaccharide. Urol Res. 28 (4), 269-273 (2000).
- Saban, M. R., et al. LPS-sensory peptide communication in experimental cystitis. Am J Physiol Renal Physiol. 282 (2), F202-F210 (2002).
- Schilling, J. D., Mulvey, M. A., Vincent, C. D., Lorenz, R. G., Hultgren, S. J. Bacterial invasion augments epithelial cytokine responses to Escherichia coli through a lipopolysaccharide-dependent mechanism. J Immunol. 166 (2), 1148-1155 (2001).
- Saban, M. R., et al. Discriminators of mouse bladder response to intravesical Bacillus Calmette-Guerin (BCG). BMC Immunol. 8, 6 (2007).
- Bjorling, D. E., et al. Acute acrolein-induced cystitis in mice. BJU Int. 99 (6), 1523-1529 (2007).
- Sadler, K. E., Stratton, J. M., Kolber, B. J. Urinary bladder distention evoked visceromotor responses as a model for bladder pain in mice. J Vis Exp. (86), (2014).
