Transuretral Instillation Procedure i voksne mandlige mus
Summary
Transuretral instillation er en udfordrende procedure og er ikke blevet godt beskrevet i litteraturen. Formålet med dette manuskript er at beskrive en teknik til transuretral indsættelse af et kateter til intravesikal levering af væsker med aktive stoffer ind i urinblæren og/eller prostata hos voksne mandlige mus.
Abstract
Transuretral instillation kan bruges til at levere forskellige løsninger med aktive ingredienser (f.eks. narkotika, kemikalier, bakterier og vira) lokalt i urinblæren til enten fremkalde dyremodeller for blære patologier eller vurdere den effektiviteten af intravesikal behandlinger. De fleste gnavere modeller af nedre urinveje (LUT) patologier er induceret i hunmus grund at lette af intravesikal instillation af stoffer via den kvindelige urinrøret. Men på grund af anatomiske forskelle mellem kvindelige og mandlige LUT, transuretral instillation i en mandlig mus har været anset for en meget udfordrende procedure, og det er ikke tidligere beskrevet. I dette manuskript giver vi en detaljeret beskrivelse af hvordan man forbereder polyethylen (PE) rør til efterfølgende indsættelse i urinrøret mandlige musen. Derudover diskuterer vi de ideelle typer af PE rør anvendes afhængigt af det ønskede websted af podning. Desuden, vi beskriver punkt af punkt Sådan Forbered en animalsk nemlig en vellykket transuretral instillation til at undgå skade på urinrøret og sikre levering af løsningen til den ønskede placering. Proceduren, der er startet af tilbagetrækningskraften forhud og glans at udsætte indledningen af den urethral meatus. Næste, glans er forstået af stump ikke-knusning pincet til at stabilisere penis og PE rør. PE rør indsættes først i urethral meatus parallelt med det animalske organ, så dets vinkel er justeret ved at vippe kateter for at manøvrere det for at følge den naturlige krumning af urinrøret. Denne teknik kan bruges til inducerede murine modeller af blæren patologier og/eller vurdere effektiviteten af intravesikal behandlinger i mandlige mus.
Introduction
Transuretral instillation tilgang har været anvendt i tidligere undersøgelser som en af metoderne til at oprette gnavere modeller af blæren patologier1,2,3,4 og kan bruges til at evaluere de effektiviteten af lokalt leverede behandlinger i mus. Selvom dyremodeller ikke fuldt sammenfatte menneskelige patologier, giver identifikation af de underliggende mekanismer i dyreforsøg en bedre forståelse af de menneskelige LUT lidelser såsom interstitiel cystitis/blæresmerter syndrom, neurogen blærebetændelse, autoimmune blærebetændelse og prostata inflammation5.
Transuretral instillation procedure udføres på en voksen mand mus er mere teknisk udfordrende end intravesikal instillation i en voksen kvindelig musen6. Den naturligt buede anatomi af de mandlige urinrøret sammen med sin lille diameter gør det teknisk vanskeligt at gøre transuretral indsættelse af et kateter. Derfor detaljerede instruktioner for transuretral induktion af musen urinary spore infektion6 og LUT betændelse7,8,9,10,11 , 12 , 13 , 14 , 15 via blære-indsat kateter var tidligere skitseret for kvindelige mus kun. Dette manuskript har til formål at give en trinvis beskrivelse af teknikken for transuretral instillation af stoffer i mandlige mus herunder videoklip, billeder og illustrationer. Transuretral instillation procedurer i en voksen mand mus kan udføres med variabel inokulerede samme som tidligere beskrevet i den kvindelige mus7 og fusioneret med supplerende teknikker såsom electromyogram optagelser af visceromotor svar (VMR)16.
Protocol
Representative Results
Discussion
Dette manuskript beskriver i detaljer en metode af transuretral instillation i voksne mandlige mus. Differential primære seeding område kan nås ved hjælp af PE rør af forskellige diametre. PE-50 anbefales for med held at nå urinblæren lumen, mens en større diameter PE-10 anvendes til at nå AP og SV (figur 3A-B). Ud over valget af størrelsen på PE rør og målorgan for podning spille andre faktorer, såsom omfanget af indpodet inokulum, også en rolle i slutningen …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Forfatterne har ikke nogen anerkendelser.
Materials
| BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 10 | BD Medical | 63019-004 | |
| BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 50 | BD Medical | 63019-048 | |
| BD Insyte-N Autoguard/ Angiocath | BD Medical | 311411 | |
| Ethanol (EtOH) | Fisher Scientific | BP2818500 | |
| BD Needle Only 22 Gauge (G) 1 inch | Becton Dickson | 205155 | |
| BD Needle Only 27 Gauge (G) 1/2 inch | Becton Dickson | 305129 | |
| Luer stub, 22 G X 0.5 in / Blunt Needle | Instech | LS22 | |
| Luer stub, 27 G X 0.5 in / Blunt Needle | Instech | LS27 | |
| 6" Long x 2" Wide x 1" Thick, Aluminum Oxide Sharpening Stone / Oil Stone | Norton | 40204034 | |
| Surgical Lubricant Sterile Bacteriostatic Folilpac | Surgilube | 281020543 | |
| Isoflurane | Fluriso | 13985-528-60 | |
| SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System | Kent Scientific | SS-01 | |
| Dissecting Forceps, Curved | vwr | 82027-392 | |
| BD 1 ml Syringe | BD Medical | 309626 | |
| India Ink Solution., 0.2% in PBS buffer | Alfa Aesar | J61007 | |
| 8~12 weeks old male C57B/6 Mice | Jackson Lab | #000664 |
Riferimenti
- Lee, S., Yang, G., Bushman, W. Prostatic inflammation induces urinary frequency in adult mice. PLoS One. 10 (2), e0116827 (2015).
- Wong, L., Hutson, P. R., Bushman, W. Prostatic inflammation induces fibrosis in a mouse model of chronic bacterial infection. PLoS One. 9 (6), e100770 (2014).
- Elkahwaji, J. E., Zhong, W., Hopkins, W. J., Bushman, W. Chronic bacterial infection and inflammation incite reactive hyperplasia in a mouse model of chronic prostatitis. Prostate. 67 (1), 14-21 (2007).
- Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. Acute bacterial inflammation of the mouse prostate. Prostate. 72 (3), 307-317 (2012).
- Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Bushman, W. Models of inflammation of the lower urinary tract. Neurourol Urodyn. 30 (5), 673-682 (2011).
- Thai, K. H., Thathireddy, A., Hsieh, M. H. Transurethral induction of mouse urinary tract infection. J Vis Exp. (42), (2010).
- Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Boldon, K., Bushman, W. Bacterial cystitis is accompanied by increased peripheral thermal sensitivity in mice. J Urol. 179 (2), 759-763 (2008).
- Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. T. Time course and host responses to Escherichia coli urinary tract infection in genetically distinct mouse strains. Infect Immun. 66 (6), 2798-2802 (1998).
- Dinis, P., Charrua, A., Avelino, A., Cruz, F. Intravesical resiniferatoxin decreases spinal c-fos expression and increases bladder volume to reflex micturition in rats with chronic inflamed urinary bladders. BJU Int. 94 (1), 153-157 (2004).
- Cayan, S., et al. Botulinum toxin type A may improve bladder function in a rat chemical cystitis model. Urol Res. 30 (6), 399-404 (2003).
- Jerde, T. J., Bjorling, D. E., Steinberg, H., Warner, T., Saban, R. Determination of mouse bladder inflammatory response to E. coli lipopolysaccharide. Urol Res. 28 (4), 269-273 (2000).
- Saban, M. R., et al. LPS-sensory peptide communication in experimental cystitis. Am J Physiol Renal Physiol. 282 (2), F202-F210 (2002).
- Schilling, J. D., Mulvey, M. A., Vincent, C. D., Lorenz, R. G., Hultgren, S. J. Bacterial invasion augments epithelial cytokine responses to Escherichia coli through a lipopolysaccharide-dependent mechanism. J Immunol. 166 (2), 1148-1155 (2001).
- Saban, M. R., et al. Discriminators of mouse bladder response to intravesical Bacillus Calmette-Guerin (BCG). BMC Immunol. 8, 6 (2007).
- Bjorling, D. E., et al. Acute acrolein-induced cystitis in mice. BJU Int. 99 (6), 1523-1529 (2007).
- Sadler, K. E., Stratton, J. M., Kolber, B. J. Urinary bladder distention evoked visceromotor responses as a model for bladder pain in mice. J Vis Exp. (86), (2014).
