Orthotopic Transplantation de cellules d’adénocarcinome pulmonaire syngénique pour étudier l’Expression des PD-L1
Summary
Nous décrivons ici un modèle de transplantation orthotopique syngénique minimalement invasives des cellules d’adénocarcinome pulmonaire souris comme un modèle de temps – et réduction des coûts pour étudier le cancer du poumon non à petites cellules.
Abstract
L’utilisation de modèles murins est indispensable pour l’étude de la physiopathologie des maladies diverses. En ce qui concerne le cancer du poumon, plusieurs modèles sont disponibles, y compris les organismes génétiquement machiné des modèles ainsi que les modèles de la transplantation. Cependant, les modèles de souris génétiquement modifiées sont long et coûteux, que certains modèles de transplantation orthotopique sont difficiles à reproduire. Ici, une méthode de livraison non invasif par voie intratrachéale de cellules de tumeur du poumon comme un modèle de transplantation orthotopique alternative est décrite. L’utilisation de cellules d’adénocarcinome pulmonaire souris et receveurs de greffe syngénique permet à étudier la tumorigenèse sous la présence d’un système immunitaire pleinement active. En outre, les manipulations génétiques de tumeur cellules avant transplantation rend ce modèle une approche intéressante de gagner du temps pour étudier l’impact des facteurs génétiques sur la croissance tumorale et l’expression des gènes cellulaires tumorales profils dans des conditions physiologiques. En utilisant ce modèle, nous montrons ce poumon cellules d’adénocarcinome express niveaux accrus de l’éliminateur de lymphocytes programmé mort-ligand 1 (PD-L1) lorsqu’il est cultivé dans leur milieu naturel par rapport à la culture in vitro.
Introduction
Cancer du poumon est toujours de loin le plus grand tueur de liés au cancer dans les hommes et les femmes1. En effet, selon l’American Cancer Society, chaque année plus de personnes meurent du cancer du poumon que du cancer du sein, la prostate et du côlon cancer ensemble1. Jusqu’à récemment, la majorité des patients souffrant de cancer de poumon non à petites cellules (NSCLC), qui est le plus abondant sous-type de cancer du poumon, ont été traitée avec une chimiothérapie à base de platine dans un cadre de première ligne, principalement avec l’ajout de l’angiogenèse inhibiteurs de la2. Seulement un sous-ensemble de patients recèle oncogènes mutations dans le récepteur du facteur de croissance épidermique (EGFR), kinase de lymphome anaplasique (ALK), ou dans ROS1 et peut être traité avec disponible ciblant médicaments3,4. Avec l’avènement des inhibiteurs de la point de contrôle immunitaire, nouvel espoir pour les patients atteints de cancer du poumon a été soulevée, même si jusqu’à présent, seulement 20 à 40 % des patients répondent à l’immunothérapie5. Par conséquent, plus recherche est nécessaire pour améliorer ce résultat en thérapie immunitaire de point de contrôle de réglage fin et d’étudier les options de traitement combinatoire.
Pour étudier le cancer du poumon, une vaste gamme de modèles précliniques sont disponible, y compris les modèles spontanés déclenché par des produits chimiques et les agents cancérigènes et les souris génétiquement modifiée modèles (GEMM) où autochtones tumeurs surviennent suite à l’activation conditionnelle d’ oncogènes et/ou l’inactivation du suppresseur de tumeur gènes6,7,8. Ces modèles sont particulièrement utile pour étudier les processus fondamentaux dans le développement de tumeurs du poumon, mais elles exigent également une vaste souris d’élevage, et expériences sont coûteuses en temps. Par conséquent, plusieurs études évaluant les inhibiteurs potentiels Profitez des modèles de xénogreffes de (patient dérivés) sous-cutané où lignées de cellules cancéreuses du poumon humain sont injectées par voie sous-cutanée de souris immunodéficientes9.
Dans ces modèles, le micromilieu des tumeurs n’est pas représenté en conséquence ; par conséquent, les chercheurs utilisent aussi des modèles de transplantation orthotopique, où les cellules tumorales sont injectées par voie intraveineuse, intrabronchially ou directement dans le poumon parenchyme10,11,12,13, 14,15,16,17,18,19,20. Certaines de ces méthodes sont techniquement difficiles, difficiles à reproduire et nécessitent une formation intensive des chercheurs. 21 ici, nous avons adapté un orthotopique non invasif, méthode de transplantation par voie intratrachéale chez les souris immunocompétentes, où les tumeurs se développent dans les 3 à 5 semaines et présentent une similitude importante de tumeurs humaines, à induire l’expression de la T-cellule suppresseur programmé mort-ligand 1 (PD-L1) sur les cellules tumorales. 11 , 12 , 20 l’utilisation de cellules de tumeur de souris provenant de modèles GEMM et souris destinataires syngéniques permet une étude appropriée du microenvironnement tumoral, y compris les cellules immunitaires. En outre, gène outils comme CRISPR/Cas9 technologie22 d’édition peut être utilisé in vitro avant la transplantation qui facilite la recherche sur l’impact des facteurs génétiques dans la tumorigenèse du poumon.
Protocol
Representative Results
Discussion
Afin d’étudier les manifestations physiologiques et pathologiques de poumon dans le poumon, méthodes intubation par voie intratrachéale invasive et non invasive pour l’instillation de différents réactifs sont largement utilisé26,27,28,29 ,30,31,32. Dans le domaine du cancer, les c…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs aimeraient remercier Safia Zahma pour son aide avec la préparation des coupes de tissus.
Materials
| mouse lung adenocarcinoma cell line | isolated in house | ||
| C57Bl/6 mice | F1 of the cross of the two backgrounds may be used (8-12 weeks) | ||
| 129S mice | |||
| RPMI 1640 Medium | Life Technologies | 11544446 | |
| Fetal Calf Serum | Life Technologies | 11573397 | |
| Penicillin/Streptomycin Solution | Life Technologies | 11548876 | |
| L-Glutamine | Life Technologies | 11539876 | |
| Trypsin, 0.25% (1X) with EDTA | Life Technologies | 11560626 | |
| UltraPure 0.5M EDTA, pH 8.0 | Thermo Fisher Scientific | 15575020 | |
| Ketasol (100 mg/ml Ketamine) | Ogris Pharma | 8-00173 | |
| Xylasol (20 mg/ml Xylazine) | Ogris Pharma | 8-00178 | |
| BD Insyste (22GA 1.00 IN) | BD | 381223 | |
| Blunt forceps | Roboz | RS8260 | |
| Leica CLS150 LED | Leica | 30250004 | Fibre Light Illuminator |
| Student Iris Scissors | Fine Science Tools | 91460-11 | |
| DNase I (RNase-Free) | New England Biolabs | M0303S | |
| Collagenase Type I | Life Technologies | 17100017 | |
| ACK Lysing Buffer | Lonza | 10-548E | |
| CD274 (PD-L1, B7-H1) Monoclonal Antibody (MIH5), PE-Cyanine7 | eBioscience | 25-5982-82 | |
| Rat IgG2a kappa Isotype Control, PE-Cyanine7 | eBioscience | 25-4321-82 |
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