Orthotopen Transplantation von Phänomen Lungenzellen Adenokarzinom, PD-L1 Ausdruck zu studieren
Summary
Hier beschreiben wir eine minimalinvasive Phänomen orthotopen Transplantation Modell der Lunge Adenokarzinom Mauszellen als Zeit und kostensenkende Modell, nicht-kleinzelligem Lungenkrebs zu studieren.
Abstract
Die Nutzung von Maus-Modellen ist unverzichtbar für die Erforschung der Pathophysiologie von verschiedenen Krankheiten. In Bezug auf Lungenkrebs gibt es mehrere Modelle, einschließlich gentechnisch Modelle sowie Transplantation Modelle entwickelt. Gentechnisch veränderte Mausmodelle sind jedoch aufwändig und teuer, während einige orthotopen Transplantation Modelle schwer zu reproduzieren sind. Hier ist eine nicht-invasive intratrachealen Übermittlungsmethode der Lunge Tumorzellen als alternative orthotopen Transplantation Modell beschrieben. Die Nutzung von Maus Lungenzellen Adenokarzinom und Phänomen Transplantat-Empfänger ermöglicht Studium der Tumorgenese unter Anwesenheit eines voll aktiven Immunsystems. Darüber hinaus genetische Manipulationen der Tumor Zellen vor Transplantation macht dieses Modell eine attraktive zeitsparende Ansatz zur Untersuchung der Auswirkungen von genetischen Faktoren auf Tumorwachstum und Tumor Zelle Genexpression unter physiologischen Bedingungen Profile. Mit Hilfe dieses Modells zeigen wir diese Lunge Adenokarzinom Zellen programmiert express erhöhte Spiegel von der T-Zell-Suppressor Tod-Liganden 1 (PD-L1) Wenn Sie in ihrer natürlichen Umgebung im Vergleich zum Anbau in-vitro-angebaut.
Introduction
Lungenkrebs ist nach wie vor bei weitem die krebsbedingte Todesursache bei Männern und Frauen1. In der Tat, nach der American Cancer Society, Menschen Sie jedes Jahr sterben mehr an Lungenkrebs zu erkranken als der Brust-, Prostata- und Darmkrebs Krebs zusammen1. Bis vor kurzem wurden die Mehrheit der Patienten mit nicht-kleinzelligem Lungenkrebs (NSCLC), die am häufigsten vorkommende Subtyp an Lungenkrebs zu erkranken, mit Platin-basierten Chemotherapie in einer Erstlinien Umgebung, meist mit dem Zusatz von Angiogenese behandelt. Inhibitoren2. Nur eine Teilmenge der Patienten birgt Onkogene Mutationen in den epidermalen Wachstumsfaktor-Rezeptor (EGFR), anaplastische Lymphom Kinase (ALK) oder ROS1, und mit verfügbaren targeting Drogen3,4behandelt werden kann. Mit dem Aufkommen von immun Checkpoint-Inhibitoren entstanden neuer Hoffnung für Patienten mit Lungenkrebs, obwohl bis jetzt nur 20 – 40 % der Patienten reagieren auf Immuntherapie5. Daher ist weitere Forschung erforderlich, um dieses Ergebnis zu verbessern, indem Sie Feinabstimmung immun Checkpoint Therapie und Untersuchung von kombinatorischen Behandlungsmöglichkeiten.
Um Lungenkrebs zu studieren, eine breite Palette von präklinischen Modellen stehen zur Verfügung, einschließlich spontane Modelle ausgelöst durch Chemikalien und Karzinogene und gentechnisch Maus Modelle (GEMM) wo autochthone Tumoren im Anschluss an die bedingte Aktivierung des entstehen Onkogene und/oder die Inaktivierung von Tumorsuppressor Gene6,7,8. Diese Modelle sind von besonderem Wert zu untersuchen, grundlegende Prozesse in der Entwicklung von Lungen-Tumoren, aber sie erfordern auch umfangreiches Mäuse züchten, und Experimente sind zeitaufwendig. Deshalb nutzen viele Studien bewerten potentielle Inhibitoren subkutane (Patienten-abgeleitet) Xenograft Modelle menschlichen Lunge-Krebs-Zell-Linien werden wo in immungeschwächte Mäuse9subkutan injiziert.
In diesen Modellen wird die Micromilieu von Tumoren nicht entsprechend dargestellt. Daher verwenden die Forscher auch orthotopen Transplantation Modelle, wo werden Tumorzellen intravenös, intrabronchially oder direkt in die Lunge Parenchym10,11,12,13injiziert, 14,15,16,17,18,19,20. Einige dieser Methoden sind technisch anspruchsvoll, schwer reproduziert werden und erfordern intensive Ausbildung der Forscher. 21 hier angepasst wir eine nicht-invasive orthotopen, intratrachealen Haartransplantation Methode bei immunkompetenten Mäusen, denen Tumoren entwickeln sich innerhalb 3-5 Wochen und weisen deutliche Ähnlichkeiten zum menschlichen Tumoren induzieren die Expression von der T-Zell Suppressor programmierten Tod-Liganden 1 (PD-L1) auf Tumorzellen. 11 , 12 , 20 die Nutzung von Maus Tumorzellen von GEMM Modellen abgeleitet und Phänomen Empfänger Mäuse ermöglicht ordnungsgemäßen Studium der der Tumor Mikroumgebung einschließlich Immunzellen. Darüber hinaus kann gen Bearbeitungstools wie CRISPR/Cas9 Technologie22 in vitro vor der Transplantation verwendet werden, die die Untersuchung der Auswirkungen der genetischen Faktoren bei der Lunge Tumorgenese erleichtert.
Protocol
Representative Results
Discussion
Um die Lunge physiologische und pathologische Ereignisse in der Lunge zu untersuchen, sind invasive und nicht-invasive intratracheale Intubation Methoden für die Instillation von verschiedenen Reagenzien weit verbreiteten26,27,28,29 ,30,31,32. Im Bereich Krebs Forscher nutzen die intratrac…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren möchten Safia Zahma Danke für ihre Hilfe bei der Vorbereitung von Gewebeschnitten.
Materials
| mouse lung adenocarcinoma cell line | isolated in house | ||
| C57Bl/6 mice | F1 of the cross of the two backgrounds may be used (8-12 weeks) | ||
| 129S mice | |||
| RPMI 1640 Medium | Life Technologies | 11544446 | |
| Fetal Calf Serum | Life Technologies | 11573397 | |
| Penicillin/Streptomycin Solution | Life Technologies | 11548876 | |
| L-Glutamine | Life Technologies | 11539876 | |
| Trypsin, 0.25% (1X) with EDTA | Life Technologies | 11560626 | |
| UltraPure 0.5M EDTA, pH 8.0 | Thermo Fisher Scientific | 15575020 | |
| Ketasol (100 mg/ml Ketamine) | Ogris Pharma | 8-00173 | |
| Xylasol (20 mg/ml Xylazine) | Ogris Pharma | 8-00178 | |
| BD Insyste (22GA 1.00 IN) | BD | 381223 | |
| Blunt forceps | Roboz | RS8260 | |
| Leica CLS150 LED | Leica | 30250004 | Fibre Light Illuminator |
| Student Iris Scissors | Fine Science Tools | 91460-11 | |
| DNase I (RNase-Free) | New England Biolabs | M0303S | |
| Collagenase Type I | Life Technologies | 17100017 | |
| ACK Lysing Buffer | Lonza | 10-548E | |
| CD274 (PD-L1, B7-H1) Monoclonal Antibody (MIH5), PE-Cyanine7 | eBioscience | 25-5982-82 | |
| Rat IgG2a kappa Isotype Control, PE-Cyanine7 | eBioscience | 25-4321-82 |
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