पीडी-L1 एक्सप्रेशन का अध्ययन करने के लिए Syngeneic लंग ग्रंथिकर्कटता कोशिकाओं का Orthotopic ट्रांसप्लांटेशन
Summary
यहाँ हम एक समय के रूप में माउस फेफड़ों ग्रंथिकर्कटता कोशिकाओं की एक न्यूनतम इनवेसिव syngeneic orthotopic ट्रांसप्लांटेशन मॉडल का वर्णन और लागत को कम करने के लिए गैर छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर का अध्ययन मॉडल.
Abstract
माउस मॉडलों का उपयोग विभिन्न रोगों के pathophysiology के अध्ययन के लिए अपरिहार्य है । फेफड़ों के कैंसर के संबंध में, कई मॉडल आनुवंशिक रूप से इंजीनियर मॉडल के रूप में के रूप में अच्छी तरह से प्रत्यारोपण मॉडल सहित उपलब्ध हैं । हालांकि, आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल समय लेने वाली और महंगी हैं, जबकि कुछ orthotopic ट्रांसप्लांटेशन मॉडल को पुन: पेश करने के लिए मुश्किल हैं । यहां, एक वैकल्पिक orthotopic प्रत्यारोपण मॉडल के रूप में फेफड़ों के ट्यूमर कोशिकाओं के एक गैर इनवेसिव intratracheal वितरण पद्धति का वर्णन किया गया है । माउस फेफड़ों ग्रंथिकर्कटता कोशिकाओं और syngeneic भ्रष्टाचार प्राप्तकर्ताओं का उपयोग एक पूरी तरह से सक्रिय प्रतिरक्षा प्रणाली की उपस्थिति के तहत tumorigenesis का अध्ययन करने की अनुमति देता है । इसके अलावा, प्रत्यारोपण से पहले ट्यूमर कोशिकाओं के आनुवंशिक जोड़तोड़ इस मॉडल बनाता है एक आकर्षक समय की बचत दृष्टिकोण शारीरिक स्थितियों के तहत ट्यूमर विकास और ट्यूमर सेल जीन अभिव्यक्ति प्रोफाइल पर आनुवंशिक कारकों के प्रभाव का अध्ययन करने के लिए । इस मॉडल का प्रयोग, हम बताते है कि फेफड़ों ग्रंथिकर्कटता कोशिकाओं टी सेल दमन क्रमादेशित मौत के स्तर में वृद्धि-ligand 1 (पीडी-L1) जब उनके प्राकृतिक पर्यावरण में हो के रूप में खेती की तुलना में इन विट्रो ।
Introduction
फेफड़ों के कैंसर अब तक का सबसे बड़ा कैंसर दोनों पुरुषों और महिलाओं में1से संबंधित हत्यारा है । दरअसल, अमेरिकन कैंसर सोसायटी के अनुसार, हर साल अधिक लोग स्तन, प्रोस्टेट की तुलना में फेफड़ों के कैंसर से मर जाते हैं, और एक साथ पेट के कैंसर1। हाल ही में जब तक, गैर से पीड़ित रोगियों के बहुमत छोटे सेल फेफड़ों के कैंसर (NSCLC), जो फेफड़ों के कैंसर का सबसे प्रचुर मात्रा में उपप्रकार है, प्लेटिनम के साथ इलाज किया गया एक पहली लाइन की स्थापना में कीमोथेरेपी आधारित, ज्यादातर angiogenesis के अलावा के साथ अवरोधों2. रोगियों का केवल एक सबसेट एपिडर्मल वृद्धि कारक रिसेप्टर में oncogenic उत्परिवर्तनों बंदरगाह (EGFR), anaplastic लिंफोमा कळेनासे में (ALK), या ROS1 में, और उपलब्ध लक्ष्यीकरण दवाओं के साथ इलाज किया जा सकता3,4. प्रतिरक्षा चौकी अवरोधकों के आगमन के साथ, फेफड़ों के कैंसर के रोगियों के लिए नई आशा पैदा हुई है, हालांकि अब तक, केवल 20-रोगियों के 40% प्रतिरक्षा चिकित्सा का जवाब5. इसलिए, आगे अनुसंधान ठीक ट्यूनिंग प्रतिरक्षा चौकी थेरेपी और combinatory उपचार के विकल्प की जांच द्वारा इस परिणाम में सुधार करने के लिए आवश्यक है ।
फेफड़ों के कैंसर का अध्ययन करने के लिए, नैदानिक मॉडल की एक विशाल सरणी सहज रसायनों और कैंसर और आनुवंशिक रूप से इंजीनियर माउस मॉडल (GEMM) द्वारा ट्रिगर मॉडल सहित उपलब्ध हैं, जहां autochthonous ट्यूमर के सशर्त सक्रियण के बाद पैदा oncogenes और/या ट्यूमर शमन करनेवाला जीन6,7,8की निष्क्रियता । ये मॉडल फेफड़ों के ट्यूमर के विकास में मौलिक प्रक्रियाओं की जांच करने के लिए विशेष मूल्य के हैं, लेकिन वे भी व्यापक चूहों प्रजनन की आवश्यकता होती है, और प्रयोगों समय लेने वाले हैं. इसलिए, कई संभावित अवरोधकों का मूल्यांकन अध्ययन के चमड़े के नीचे (रोगी व्युत्पंन) xenograft मॉडल का लाभ ले जहां मानव फेफड़ों के कैंसर कोशिका लाइनों के चमड़े के नीचे immunodeficient9चूहों में इंजेक्ट कर रहे हैं ।
इन मॉडलों में, ट्यूमर के micromilieu के अनुसार प्रतिनिधित्व नहीं है; इसलिए, शोधकर्ताओं ने भी orthotopic ट्रांसप्लांटेशन मॉडल का उपयोग करें, जहां ट्यूमर कोशिकाओं नसों में इंजेक्ट कर रहे हैं, intrabronchially, या सीधे फेफड़ों में पैरेन्काइमा10,11,12,13, 14,15,16,17,18,19,20. इन तरीकों में से कुछ तकनीकी रूप से, चुनौतीपूर्ण मुश्किल reproduced हो रहे हैं, और शोधकर्ताओं के गहन प्रशिक्षण की आवश्यकता है । 21 यहां हम एक गैर इनवेसिव orthotopic, असुरक्षित चूहों, जहां ट्यूमर 3-5 सप्ताह के भीतर विकसित करने और मानव ट्यूमर के लिए महत्वपूर्ण समानताएं प्रदर्शित करने में intratracheal ट्रांसप्लांटेशन विधि अनुकूलित, टी सेल की अभिव्यक्ति के लिए प्रेरित दमन क्रमादेशित मौत-ligand 1 (पीडी-L1) ट्यूमर कोशिकाओं पर । 11 , 12 , 20 माउस ट्यूमर कोशिकाओं GEMM मॉडल और syngeneic प्राप्तकर्ता चूहों से व्युत्पंन का उपयोग प्रतिरक्षा कोशिकाओं सहित ट्यूमर microenvironment के समुचित अध्ययन की अनुमति देता है । इसके अलावा, CRISPR/Cas9 प्रौद्योगिकी22 की तरह जीन संपादन उपकरण प्रत्यारोपण से पहले इन विट्रो में इस्तेमाल किया जा सकता है जो फेफड़ों tumorigenesis में आनुवंशिक कारकों के प्रभाव की जांच की सुविधा ।
Protocol
Representative Results
Discussion
फेफड़ों में शारीरिक और रोग की घटनाओं का अध्ययन करने के लिए, विभिन्न रिएजेंट के जगाकर के लिए आक्रामक और गैर इनवेसिव intratracheal इंटुबैषेण तरीकों व्यापक रूप से इस्तेमाल कर रहे हैं26,27,<su…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखक ऊतक वर्गों की तैयारी के साथ उसकी मदद के लिए साफिया Zahma शुक्रिया अदा करना चाहूंगा ।
Materials
| mouse lung adenocarcinoma cell line | isolated in house | ||
| C57Bl/6 mice | F1 of the cross of the two backgrounds may be used (8-12 weeks) | ||
| 129S mice | |||
| RPMI 1640 Medium | Life Technologies | 11544446 | |
| Fetal Calf Serum | Life Technologies | 11573397 | |
| Penicillin/Streptomycin Solution | Life Technologies | 11548876 | |
| L-Glutamine | Life Technologies | 11539876 | |
| Trypsin, 0.25% (1X) with EDTA | Life Technologies | 11560626 | |
| UltraPure 0.5M EDTA, pH 8.0 | Thermo Fisher Scientific | 15575020 | |
| Ketasol (100 mg/ml Ketamine) | Ogris Pharma | 8-00173 | |
| Xylasol (20 mg/ml Xylazine) | Ogris Pharma | 8-00178 | |
| BD Insyste (22GA 1.00 IN) | BD | 381223 | |
| Blunt forceps | Roboz | RS8260 | |
| Leica CLS150 LED | Leica | 30250004 | Fibre Light Illuminator |
| Student Iris Scissors | Fine Science Tools | 91460-11 | |
| DNase I (RNase-Free) | New England Biolabs | M0303S | |
| Collagenase Type I | Life Technologies | 17100017 | |
| ACK Lysing Buffer | Lonza | 10-548E | |
| CD274 (PD-L1, B7-H1) Monoclonal Antibody (MIH5), PE-Cyanine7 | eBioscience | 25-5982-82 | |
| Rat IgG2a kappa Isotype Control, PE-Cyanine7 | eBioscience | 25-4321-82 |
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