Orthotopic nakli PD-L1 ifade çalışmaya Syngeneic akciğer adenokarsinom hücre
Summary
Burada küçük hücreli dışı akciğer kanseri çalışma için zaman ve maliyet azaltma mankenlik minimal invaziv syngeneic orthotopic nakli manken fare akciğer adenokarsinom hücre açıklayın.
Abstract
Fare modelleri kullanımını çeşitli hastalıkların Patofizyoloji eğitimi için vazgeçilmezdir. Akciğer kanseri ile ilgili birkaç misal are elde edilebilir, genetik olarak dahil olmak üzere tasarlanmış modelleri yanı sıra ekimi modelleri. Ancak, bazı orthotopic nakli modelleri yeniden oluşturulması zor olan ise genetik fare modelleri zaman alıcı ve pahalı. Burada, akciğer tümör hücreleri bir non-invaziv boğaza teslim yöntemi bir alternatif orthotopic nakli model olarak tanımlanmaktadır. Tumorigenesis tam etkin bir bağışıklık sistemi altında eğitim fare akciğer adenokarsinom hücre ve syngeneic greft alıcılar kullanımını sağlar. Ayrıca, genetik manipülasyon tümör hücreleri fizyolojik koşullar altında bu model tümör büyüme ve tümör hücre gen ekspresyonu genetik faktörlerin etkisini incelemek için çekici bir zaman tasarrufu yaklaşım profilleri ekimi yapar önce. Bu akciğer adenokarsinom hücre gösterdiğimiz bu modeli kullanan T hücreli bastırıcı, hızlı yüksek düzeyde ölüm-ligand 1 (PD-L1) ekimi ile karşılaştırıldığında onların doğal ortamda tüp bebek yetiştirilen programlanmış.
Introduction
Akciğer kanseri kanser ile ilgili en büyük katil kadın ve erkek1hala gereğidir. Gerçekten de, Amerikan Kanser Derneği göre her yıl daha akciğer kanseri meme, prostat ve kolon kanseri birlikte1insanlar ölür. Yakın zamana kadar akciğer kanserinin en bol alt türü olan küçük hücreli dışı akciğer kanseri (NSCLC), muzdarip hastaların çoğu çoğunlukla angiogenez ilavesi ile bir ilk satır ortamda platin tabanlı kemoterapi ile tedavi edildi inhibitörleri2. Yalnızca alt küme küme küme kümesini hastalar oncogenic epidermal büyüme faktörü reseptörü (EGFR), mutasyonların Anaplastik Lenfoma kinaz (ALK) veya ROS1, limanlar ve kullanılabilir hedefleme uyuşturucu3,4ile tedavi edilebilir. Her ne kadar şimdiye kadar hastaların sadece % 20-40 yanıt bağışıklık terapisi5‘ e bağışıklık denetim noktası inhibitörleri ve advent ile akciğer kanseri hastalar için yeni bir umut, çıkmıştır. Bu nedenle, daha fazla araştırma bu sonucu bağışıklık denetim noktası terapisi ince ayar ve birleşimsel tedavi seçenekleri soruşturma geliştirmek için gereklidir.
Akciğer kanseri çalışmaya preklinik modelleri geniş bir dizi mevcut, spontan modelleri de dahil olmak üzere kimyasallar ve kanserojen ve genetiği fare tarafından tetiklenen nerede otokton tümörler koşullu aktivasyonu ortaya çıkan modelleri (et) oncogenes ve/veya tümör baskılayıcı genler6,7,8inactivation. Akciğer tümörü geliştirmede temel süreçleri araştırmak için belirli değerli bu modeller için ama ayrıca geniş fareler ıslahı gerektirir ve deneyler zaman alıcı. Bu nedenle, birçok çalışma potansiyel inhibitörleri değerlendirilmesi subkutan xenograft (hasta kaynaklı) modelleri nerede insan akciğer kanseri hücre hatları subkutan immünyetmezligi fareler9içine enjekte edilir yararlanın.
Bu modellerinde, tümör micromilieu buna göre faaliyet gösterdiği; Bu nedenle, araştırmacılar da nerede tümör hücreleri intravenöz, intrabronchially veya doğrudan akciğer parankimi10,11,12,13enjekte edilir orthotopic nakli modelleri, kullanma, 14,15,16,17,18,19,20. Bu yöntemlerden bazıları Teknik olarak zor, zor çoğaltılamaz ve araştırmacıların yoğun bir eğitim gerektirir. 21 burada bir non-invaziv orthotopic, boğaza nakli yöntemi nerede tümörleri 3-5 hafta içinde geliştirmek ve önemli benzerlikler T-hücre ifade ikna etmek için insan tümörler, sergi immün farelerde adapte bastırıcı ölüm-ligand 1 (PD-L1) tümör hücreleri üzerinde programlanmış. 11 , 12 , Syngeneic alıcı fareler sağlar uygun bağışıklık hücreleri de dahil olmak üzere tümör microenvironment eğitim ve 20 fare tümör hücreleri kullanımı et modellerden elde. Ayrıca, düzenleme araçları gibi CRISPR/Cas9 teknoloji22 gen tüp bebek etkisi akciğer tumorigenesis genetik faktörlerin incelenmesi kolaylaştıran nakli önce kullanılabilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Akciğer akciğer fizyolojik ve patolojik olayları çalışmaya, invaziv ve non-invaziv boğaza entübasyon çeşitli reaktifler korumak için yaygın olarak kullanılan26,27,28,29 metodlar ,30,31,32. Kanser alanında araştırmacılar boğaza kullanmak (ve etkilerinin) virüslerin akciğe…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar Safia Zahma doku bölümleri hazırlanması konusunda ona yardım için teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| mouse lung adenocarcinoma cell line | isolated in house | ||
| C57Bl/6 mice | F1 of the cross of the two backgrounds may be used (8-12 weeks) | ||
| 129S mice | |||
| RPMI 1640 Medium | Life Technologies | 11544446 | |
| Fetal Calf Serum | Life Technologies | 11573397 | |
| Penicillin/Streptomycin Solution | Life Technologies | 11548876 | |
| L-Glutamine | Life Technologies | 11539876 | |
| Trypsin, 0.25% (1X) with EDTA | Life Technologies | 11560626 | |
| UltraPure 0.5M EDTA, pH 8.0 | Thermo Fisher Scientific | 15575020 | |
| Ketasol (100 mg/ml Ketamine) | Ogris Pharma | 8-00173 | |
| Xylasol (20 mg/ml Xylazine) | Ogris Pharma | 8-00178 | |
| BD Insyste (22GA 1.00 IN) | BD | 381223 | |
| Blunt forceps | Roboz | RS8260 | |
| Leica CLS150 LED | Leica | 30250004 | Fibre Light Illuminator |
| Student Iris Scissors | Fine Science Tools | 91460-11 | |
| DNase I (RNase-Free) | New England Biolabs | M0303S | |
| Collagenase Type I | Life Technologies | 17100017 | |
| ACK Lysing Buffer | Lonza | 10-548E | |
| CD274 (PD-L1, B7-H1) Monoclonal Antibody (MIH5), PE-Cyanine7 | eBioscience | 25-5982-82 | |
| Rat IgG2a kappa Isotype Control, PE-Cyanine7 | eBioscience | 25-4321-82 |
Riferimenti
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2018. CA: A Cancer Journal for Clinicians. 68 (1), 7-30 (2018).
- Zappa, C., Mousa, S. A. Non-small cell lung cancer: current treatment and future advances. Translational Lung Cancer Research. 5 (3), 288-300 (2016).
- Dolly, S. O., Collins, D. C., Sundar, R., Popat, S., Yap, T. A. Advances in the Development of Molecularly Targeted Agents in Non-Small-Cell Lung. Drugs. 77 (8), 813-827 (2017).
- Stinchcombe, T. E. Targeted Therapies for Lung Cancer. Cancer Treatment Research. 170, 165-182 (2016).
- Brody, R., et al. PD-L1 expression in advanced NSCLC: Insights into risk stratification and treatment selection from a systematic literature review. Lung Cancer. 112, 200-215 (2017).
- Safari, R., Meuwissen, R. Practical use of advanced mouse models for lung cancer. Methods in Molecular Biology. 1267, 93-124 (2015).
- DuPage, M., Dooley, A. L., Jacks, T. Conditional mouse lung cancer models using adenoviral or lentiviral delivery of Cre recombinase. Nature Protocols. 4 (7), 1064-1072 (2009).
- Kwon, M. C., Berns, A. Mouse models for lung cancer. Molecular Oncology. 7 (2), 165-177 (2013).
- Hidalgo, M., et al. Patient-derived xenograft models: an emerging platform for translational cancer research. Cancer Discovery. 4 (9), 998-1013 (2014).
- Chen, X., et al. An orthotopic model of lung cancer to analyze primary and metastatic NSCLC growth in integrin alpha1-null mice. Clinical & Experiment Metastasis. 22 (2), 185-193 (2005).
- Kang, Y., et al. Development of an orthotopic transplantation model in nude mice that simulates the clinical features of human lung cancer. Cancer Science. 97 (10), 996-1001 (2006).
- Kang, Y., et al. Proliferation of human lung cancer in an orthotopic transplantation mouse model. Experimental and Therapeutic. 1 (3), 471-475 (2010).
- Kuo, T. H., et al. Orthotopic reconstitution of human small-cell lung carcinoma after intravenous transplantation in SCID mice. Anticancer Research. 12 (5), 1407-1410 (1992).
- Li, B., et al. A novel bioluminescence orthotopic mouse model for advanced lung cancer. Radiation Research. 176 (4), 486-493 (2011).
- Mase, K., et al. Intrabronchial orthotopic propagation of human lung adenocarcinoma–characterizations of tumorigenicity, invasion and metastasis. Lung Cancer. 36 (3), 271-276 (2002).
- McLemore, T. L., et al. Novel intrapulmonary model for orthotopic propagation of human lung cancers in athymic nude mice. Ricerca sul cancro. 47 (19), 5132-5140 (1987).
- Tsai, L. H., et al. The MZF1/c-MYC axis mediates lung adenocarcinoma progression caused by wild-type lkb1 loss. Oncogene. 34 (13), 1641-1649 (2015).
- Winslow, M. M., et al. Suppression of lung adenocarcinoma progression by Nkx2-1. Nature. 473 (7345), 101-104 (2011).
- Zou, Y., Fu, H., Ghosh, S., Farquhar, D., Klostergaard, J. Antitumor activity of hydrophilic Paclitaxel copolymer prodrug using locoregional delivery in human orthotopic non-small cell lung cancer xenograft models. Clinical Cancer Research. 10 (21), 7382-7391 (2004).
- Buckle, T., van Leeuwen, F. W. Validation of intratracheal instillation of lung tumour cells in mice using single photon emission computed tomography/computed tomography imaging. Lab Animal. 44 (1), 40-45 (2010).
- Berry-Pusey, B. N., et al. A semi-automated vascular access system for preclinical models. Physics in Medicine & Biology. 58 (16), 5351-5362 (2013).
- Ran, F. A., et al. Genome engineering using the CRISPR-Cas9 system. Nature Protocols. 8 (11), 2281-2308 (2013).
- Singer, B. D., et al. Flow-cytometric method for simultaneous analysis of mouse lung epithelial, endothelial, and hematopoietic lineage cells. American Journal of Physiology – Lung Cellular and Molecular Physiology. 310 (9), L796-L801 (2016).
- Moll, H. P., et al. Afatinib restrains K-RAS-driven lung tumorigenesis. Science Translational Medicine. 10 (446), (2018).
- Campeau, E., et al. A versatile viral system for expression and depletion of proteins in mammalian cells. PLoS One. 4 (8), e6529 (2009).
- Gui, L., Qian, H., Rocco, K. A., Grecu, L., Niklason, L. E. Efficient intratracheal delivery of airway epithelial cells in mice and pigs. American Journal of Physiology – Lung Cellular and Molecular Physiology. 308 (2), L221-L228 (2015).
- Helms, M. N., Torres-Gonzalez, E., Goodson, P., Rojas, M. Direct tracheal instillation of solutes into mouse lung. Journal of Visualized Experiments. (42), e1941 (2010).
- Lin, Y. W., et al. Pharmacokinetics/Pharmacodynamics of Pulmonary Delivery of Colistin against Pseudomonas aeruginosa in a Mouse Lung Infection Model. Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 61 (3), (2017).
- Wegesser, T. C., Last, J. A. Lung response to coarse PM: bioassay in mice. Toxicology and Applied Pharmacology. 230 (2), 159-166 (2008).
- Cai, Y., Kimura, S. Noninvasive intratracheal intubation to study the pathology and physiology of mouse lung. Journal of Visualized Experiments. (81), e50601 (2013).
- Lawrenz, M. B., Fodah, R. A., Gutierrez, M. G., Warawa, J. Intubation-mediated intratracheal (IMIT) instillation: a noninvasive, lung-specific delivery system. Journal of Visualized Experiments. (93), e52261 (2014).
- Vandivort, T. C., An, D., Parks, W. C. An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice. Journal of Visualized Experiments. (108), e53771 (2016).
