Derivazione e differenziazione delle cellule mesenchimali ovarico canini
Summary
Qui, descriviamo un metodo per l’isolamento, espansione e differenziazione delle cellule staminali mesenchimali da tessuto ovarico canino.
Abstract
Interesse in cellule staminali mesenchimali (MSCs) è aumentato nell’ultimo decennio grazie alla loro facilità di isolamento, espansione e cultura. Recentemente, gli studi hanno dimostrato la capacità di vasta differenziazione che queste cellule possiedono. Ovaia rappresenta un candidato di promessa per le terapie basate sulle cellule dovuto al fatto che è ricco di MSCs e che viene spesso ignorata dopo interventi chirurgici ovariectomia come rifiuti biologici. Questo articolo vengono descritte le procedure per l’isolamento, espansione e differenziazione di cellule staminali mesenchimali derivate dall’ovaia canino, senza la necessità di ordinamento delle cellule tecniche. Questo protocollo rappresenta un importante strumento per la medicina rigenerativa a causa l’ampia applicabilità di queste cellule altamente differenziabile in studi clinici e usi terapeutici.
Introduction
Il numero degli studi pubblicati che lo stato attivo sulle cellule staminali è aumentato notevolmente nell’ultimo decennio, uno sforzo di ricerca che è stato alimentato dall’obiettivo collettivo di scoprire terapie potente medicina rigenerativa. Le cellule staminali hanno due marcatori definizione primari: auto – rinnovamento e differenziazione. Cellule staminali mesenchimali sono responsabili del suo fatturato regolare del tessuto e hanno una più limitata capacità di differenziazione rispetto alle cellule staminali embrionali1. Recentemente, molti studi hanno dimostrato una vasta gamma di differenziazione di cellule staminali mesenchimali, e un argomento in discussione è se esistono differenze tra cellule staminali embrionali ed adulte a tutti2.
L’epitelio di superficie ovarium è un commit strato di cellule, relativamente meno differenziato, che esprime entrambi marcatori epiteliali e mesenchimali3, mantenendo la capacità di differenziarsi in diversi tipi di cellule in risposta a segnali ambientali4. La posizione esatta delle cellule staminali nell’ovaia non è ben nota; Tuttavia, è stato proposto che bipotential progenitori in tunica albuginea dare origine a cellule germinali5. Gli studi immunologici hanno ipotizzato che queste cellule hanno un origine stromal6 o si trovano in o prossimale alla superficie dell’ovaia7. Poiché le cellule staminali mesenchimali esprimono numerosi recettori che svolgono un ruolo importante nella cellula adesione8, un esperimento è stato progettato per verificare l’ipotesi che la selezione di una popolazione di cellule con adesione rapida isolerebbero chiaramente una popolazione di cellule caratterizzabili come mesenchymal in natura. Recentemente, il nostro gruppo ha riferito la derivazione di cellule staminali mesenchimali da tessuto ovarico basata sulla loro capacità di aderenza alla superficie plastica del piatto cultura dei primi 3 h di cultura, al fine di ottenere una popolazione purificata delle cellule che esibiscono adesione rapida9. Qui, descriviamo il metodo sviluppato per l’isolamento di cellule staminali mesenchimali da tessuto ovarico.
Protocol
Representative Results
Discussion
Qui forniamo la prova che MSCs possono essere isolate da tessuto ovarico canino, che è considerato un rifiuto biologico dopo l’ovariectomia. Dovuto al fatto che molti tipi di cellule possono essere trovati nell’ovaia, abbiamo proposto un protocollo per selezionare MSCs basato sulla loro aderenza rapida alla plastica, che ha selezionato correttamente le cellule che si è sviluppato in un monostrato con una morfologia di fibroblasto-come.
Il primo rapporto della derivazione di cellule staminali…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli autori riconoscono il programma di sterilizzazione canina a UNESP-FCAV per aver gentilmente fornito le ovaie. Questo lavoro è stato sostenuto da sovvenzioni da FAPESP (processo n. 2013/14293-0) e mantelle.
Materials
| DPBS | Thermo Fisher | 14190144 | |
| Collagenase I | Thermo Fisher | 17100017 | |
| Tissue flask | Corning | CLS3056 | |
| DMEM low glucose | Thermo Fisher | 11054020 | |
| FBS | Thermo Fisher | 12484-010 | |
| TrypLE express | Thermo Fisher | 12604021 | |
| StemPro Adipogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007001 | |
| StemPro Chondrogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007101 | |
| StemPro Osteogenesis Differentiation Kit | Thermo Fisher | A1007201 | |
| STEMdiff Definitive Endoderm Kit | StemCell | 5110 | |
| Penicillin-Streptomycin | Thermo Fisher | 15070063 | |
| CD45 | AbD Serotec | MCA 2035S | |
| CD34 | AbD Serotec | MCA 2411GA | |
| CD90 | AbD Serotec | MCA 1036G | |
| CD44 | AbD Serotec | MCA 1041 | |
| Nestin | Milipore | MAB353 | |
| β-Tubulin | Milipore | MAB1637 | |
| DDX4 | Invitrogen | PA5 -23378 | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR80F | |
| IgG- FITC | AbD Serotec | STAR120F |
Riferimenti
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