마우스에 있는 기종의 평가를 위한 일정한 압력의 밑에 폐 고정
Summary
여기에 제시된 폐 고정을 위한 유용한 프로토콜은 기종의 마우스 모델에서 폐 견본의 조직학적 평가를 위한 안정한 조건을 만드는. 이 모델의 주요 장점은 폐 붕괴 또는 디플레이션없이 동일한 일정한 압력으로 많은 폐를 고정 할 수 있다는 것입니다.
Abstract
폐기종은 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD)의 중요한 특징입니다. 기종 마우스 모형을 관련시키는 연구 결과는 폐의 믿을 수 있는 조직학 견본을 생성하기 위하여 최적 폐 고정을 요구합니다. 주로 공기와 조직으로 구성된 폐의 구조 구성의 특성으로 인해 고정 과정에서 붕괴또는 수축 될 위험이 있습니다. 다양한 폐 고정 방법이 존재하며, 각각은 자신의 장점과 단점을 가지고 있습니다. 여기에 제시된 폐 고정 방법은 기종 마우스 폐 모델을 사용하여 연구를 위한 최적 조직 평가를 가능하게 하기 위하여 일정한 압력을 이용합니다. 주요 장점은 한 번에 동일한 조건으로 많은 폐를 고칠 수 있다는 것입니다. 폐 표본은 만성 담배 연기 노출 마우스로부터 수득된다. 폐 고정은 일정한 압력의 생산을 가능하게 하는 특수 장비를 사용하여 수행됩니다. 이 일정한 압력은 합리적으로 팽창 된 상태에서 폐를 유지합니다. 따라서, 이 방법은 담배 연기 유발 경증 기종을 평가하기에 적합한 폐의 조직학적 표본을 생성한다.
Introduction
COPD는 사망의 주요 한 세계적인 원인 중 하나입니다1. 담배 연기는 COPD의 가장 중요한 원인이지만 병인의 메커니즘은 불완전하게 정의되어 있습니다. COPD는 공기 흐름의 점진적 제한 및 폐의 비정상적인 염증 반응을 포함하여 두 가지 주요 특성을 보여줍니다. 폐기장애는 COPD 환자의 폐에서 빈번하게 발생한다2. 폐기종의 병리학적 발견은 폐포 벽 파괴3을특징으로한다. 여러 동물 종은 생체 내에서 COPD 모델(즉, 개, 기니피그, 원숭이 및 설치류)을 생성하는데 사용되어 왔다.4. 그러나, 마우스는 COPD 모델의 구성에 가장 일반적으로 사용되고 있다. 이는 저렴한 비용, 유전자 변형 능력, 광범위한 게놈 정보 가용성, 항체의 가용성 및 다양한 마우스 균주를 사용하는 능력을 포함하여 많은 장점을 갖는다5. 현재, 인간 COPD의 전체 기능을 모방할 수 있는 마우스 모델은 없다; 따라서, 개별 연구원은 특정 COPD 연구에 가장 적합한 모델을 선택해야합니다6. 폐기종 마우스 모델은 현재 이용 가능한 많은 COPD 마우스 모델 중 하나입니다. 추가 모델은 악화 마우스 모델, 전신 동이환 모델 및 COPD 감수성 모델7을포함한다.
폐기종 마우스 모델은 화학약제 및 담배 연기 노출을 포함하는 여러 종류의 외인성 제제에 의해 생성될 수있다 4. 화학적 노출(예를 들어, 엘라스타제)은 심각한 유형의 기종을 생성하는 반면, 담배 연기는 경증 기종8,9를초래한다. 담배 연기는 COPD의 병인에 대한 주요 원인으로 여겨진다; 따라서, COPD 마우스 모델을 만드는 수단으로 담배 연기의 선택은 합리적인10이다. 많은 연구는 마우스에 기종을 만들기 위해 담배 연기를 사용했습니다. 예를 들어, Nikula 등은 B6C3F1 암컷 마우스로부터 7개월 또는 13개월 동안 담배 연기에 노출시킴으로써 기종 마우스 모델을 성공적으로생성하였다. 우리는 또한 노화 마커 단백질/SMP-30 KO 마우스12를통해 기종 마우스 모델을 확립했습니다. 담배 연기 노출에 의해 이 온화한 기종 모형을 제대로 구상할 수 있는 폐 고정 방법을 능력을 발휘하는 것이 중요합니다.
폐 고정을위한 다양한 방법이13설립되었습니다. 그러나, 폐기종14를평가하기 위한 폐 조직 고정의 금 표준 방법은 없다. 이 실험실에서 여러 연구는 여기에 제시 된 고정 시스템이 기종12,15, 16,17,18을평가하기위한 안정적인 조건을 생성하여 유용하다는 것을 보여 주었다. 현재 시스템의 주요 장점은 폐 붕괴 또는 디플레이션없이 한 번에 동일한 조건으로 많은 폐를 해결할 수 있다는 것입니다. 현재 폐 고정 시스템은 주어진 기간 동안 적절한 일정한 압력으로 폐 표본을 팽창 할 수있는 몇 가지 특수 장비를 사용합니다. 이 특수 장비는 하부 컨테이너, 상부 컨테이너 및 펌프를 포함한 세 부분으로 구성됩니다. 폐 시편은 가압 고정제에 연결되는 하부 용기에 배치되어 상부 및 하부용기(19)사이의 제제 수준에서 25cmH2O 압력 차이를 초래한다.
Protocol
Representative Results
Discussion
여기에 제시 된 설치류 폐에 대한 고정 절차는 소설이 아닙니다. 그러나 이 시스템에는 몇 가지 장점이 있습니다. 첫째, 한 번에 동일한 조건으로 많은 폐 (최대 20)를 해결할 수 있습니다. 독성 병리학 의 사회는 중력 주입을 위한 압력이 22-25 cmH2O22에서변화한다는 것을 말합니다. 특히, 여러 연구는 25 cmH2O13, 19,<sup class="x…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 JSPS KAKENHI 교부금 번호 26461199 (T. 사토)와 환경 및 성별 특정 의학 연구소, 준텐도 대학 의학 대학원, 그랜트 번호 E2920 (T. 사토)에 의해 부분적으로 지원되었습니다. 이 파동은 현재의 방법의 설계와 원고 작성에 아무런 역할이 없었다.
Materials
| 10% formalin (formalin neutral buffer solution) | Wako | 060-01667 | |
| Bent forceps | Hammacher | HSC187-11 | |
| Cannula, size 20G | Terumo | SR-FS2032 | |
| Cannula, size 22G | Terumo | SR-OT2225C | Cannula to exsanguinate lung |
| Forceps | Hammacher | HSC184-10 | |
| Kimtowel | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 61000 | |
| Kimwipe | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 62011 | |
| Lower container (acrylic glass material) | Tokyo Science | Custom-made | Pressure equipment component |
| Roller pump | Nissin Scientific Corp | NRP-75 | Pump machine to exsanguinate lung |
| Roller pump RP-2000 | Eyela (Tokyo Rikakikai Co. Ltd) | 160200 | Pressure equipment pump |
| Silicone tube Ø 9 mm | Sansyo | 94-0479 | Pressure equipment component |
| Somnopentyl (64.8 mg/mL) | Kyoritsu Seiyaku | SOM02-YA1312 | Pentobarbital Sodium |
| Surgical scissor | Hammacher | HSB014-11 | |
| Suture thread, size 0 | Nescosuture | GA01SW | |
| Syringe, 1 mL | Terumo | SS-01T | |
| Syringe, 1 ml with needle | Terumo | SS-01T2613S | |
| Syringe, 10 mL | Terumo | SS-10ESZ | |
| Three-way stopcock | Terumo | TS-TR1K01 | |
| Upper container (acrylic glass material) | Tokyo Science | Custom-made | Pressure equipment component |
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