Presentato qui è un protocollo utile per la fissazione polmonare che crea una condizione stabile per la valutazione istologica di campioni polmonari da un modello murino di enfisema. Il vantaggio principale di questo modello è che può fissare molti polmoni con la stessa pressione costante senza collasso polmonare o deflazione.
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Articolo metodologico
Fissazione polmonare sotto pressione costante per la valutazione dell'enfisema nei topi
In questo articolo
Sommario
Abstract
L'enfisema è una caratteristica significativa della broncopneumopatia cronica ostruttiva (BPCO). Gli studi che coinvolgono un modello murino enfisematoso richiedono una fissazione polmonare ottimale per produrre campioni istologici affidabili del polmone. A causa della natura della composizione strutturale del polmone, che consiste in gran parte di aria e tessuto, c'è il rischio che collassi o si sgonfi durante il processo di fissazione. Esistono vari metodi di fissaggio polmonare, ognuno dei quali ha i propri vantaggi e svantaggi. Il metodo di fissazione polmonare qui presentato utilizza una pressione costante per consentire una valutazione ottimale dei tessuti per gli studi che utilizzano un modello polmonare di topo infisematoso. Il vantaggio principale è che può fissare molti polmoni con la stessa condizione in una sola volta. Gli esemplari polmonari sono ottenuti da topi cronici esposti al fumo di sigaretta. La fissazione polmonare viene eseguita utilizzando apparecchiature specializzate che consentono la produzione di pressione costante. Questa pressione costante mantiene il polmone in uno stato ragionevolmente gonfiato. Così, questo metodo genera un esemplare istologico del polmone che è adatto per valutare il fumo di sigaretta indotta enfisema lieve.
Introduzione
La BPCO è una delle principali cause di morte a livello mondiale1. Il fumo di sigaretta è la causa più importante della BPCO, ma i meccanismi di patogenesi rimangono incompleti. La BPCO dimostra due caratteristiche principali, tra cui la progressiva limitazione del flusso d'aria e una risposta infiammatoria anormale del polmone. Il disturbo dell'insensato si verifica frequentemente nei polmoni dei pazienti affetti da BPCO2. I risultati patologici dell'enfisema sono caratterizzati dalla distruzione della parete alveolare3. Diverse specie animali sono state utilizzate per generare modelli di BPCO in....
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Protocollo
I seguenti metodi sono stati approvati dai comitati per la cura e l'uso degli animali della Juntendo University School of Medicine. Sono state seguite le Linee guida per la corretta condotta degli esperimenti sugli animali, Science Council of Japan, 1 giugno 2006. Ci sono tre passaggi principali in questo metodo: 1) dissezione del topo, 2) essanguinazione polmonare, e 3) fissazione dei tessuti polmonari assistiti da attrezzature specializzate. Tipicamente, i campioni polmonari vengono elaborati all'incorporamento dopo 48 h di fissazione12,15,16,17....
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Risultati
Come descritto in precedenza, l'apparecchiatura specializzata, che genera una pressione costante estesa, può essere suddivisa in tre parti (Figura 3A). La parte inferiore è il punto in cui inserire il campione polmonare (Figura 4A). Il polmone è collegato tramite una cannula (20 G) alla punta del flusso di formalina utilizzando un cazzo di arresto a tre vie (Figura 4B). La pressione.......
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Discussione
La procedura di fissazione per i polmoni dei roditori qui presentata non è una novità; tuttavia, questo sistema ha diversi vantaggi. In primo luogo, può fissare molti polmoni (massimo 20) con la stessa condizione in una sola volta. La Società di Patologia Tossicologica afferma che la pressione per l'instillazione gravitazionale varia da 22 a 25 cmH2O22. In particolare, diversi studi hanno eseguito fissazione polmonare ad una pressione di 25 cmH2O13
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Dichiarazioni
Gli autori non hanno interessi contradditori da dichiarare.
Ringraziamenti
Questo lavoro è stato supportato in parte da JSPS KAKENHI Grant Number 26461199 (T. Sato) e dall'Institute for Environmental and Gender-Specific Medicine, Juntendo University Graduate School of Medicine, Grant Number E2920 (T. Sato). Il fingeto non ha avuto alcun ruolo nella progettazione dei metodi attuali e nella scrittura del manoscritto.
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| 10% formalina (soluzione tampone neutra in formalina) | Wako | 060-01667 | |
| Forcipe piegato | Hammacher | HSC187-11 | |
| Cannula, misura 20G | Cannula Terumo | SR-FS2032 | |
| , misura 22G | Cannula Terumo | SR-OT2225C | per dissanguare il polmone |
| Hammacher | HSC184-10 | ||
| Kimtowel | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 61000 | |
| Kimwipe | Nippon Paper Crecia (Kimberly Clark) | 62011 | |
| Contenitore inferiore (materiale in vetro acrilico) | Tokyo | Science Su misura | Componente per apparecchiature a pressione |
| Pompa a rulli | Nissin Scientific Corp | NRP-75 | Pompa per dissanguare il polmone |
| Pompa a rulli RP-2000 | Eyela (Tokyo Rikakikai Co. Ltd) | 160200 | Pompa per apparecchiature a pressione |
| Tubo in silicone e Oslash; 9 mm | Sansyo | 94-0479 | Componente per apparecchiature a pressione |
| Somnopentyl (64,8 mg/mL) | Kyoritsu Seiyaku | SOM02-YA1312 | Pentobarbital Sodio |
| Forbice chirurgica | Hammacher | HSB014-11 | |
| Filettatura di sutura, misura 0 | Nescosuture | GA01SW | |
| Siringa, 1 mL | Terumo | SS-01T | |
| , 1 ml con ago | Siringa Terumo | SS-01T2613S | |
| , 10 mL | Terumo | SS-10ESZ | |
| Rubinetto a tre vie | Terumo | TS-TR1K01 | |
| Contenitore superiore (materiale in vetro acrilico) | Tokyo Science | Componente per apparecchiature a pressione | su misura |
Riferimenti
- Vogelmeier, C. F., et al. Global strategy for the diagnosis, management, and prevention of chronic obstructive lung disease 2017 report. GOLD Executive Summary. American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine. 195 (5), 557-582 (2017).
- Pauwels, R. A., Rabe, K. F.
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Ristampe e permessi
