Analyse numérique de l'immunostaining de ZW10 Interagir les protéines dans les tissus pulmonaires humains
Summary
La protéine interagissante ZW10 (ZWINT) participe au point de contrôle mitotique de fuseau et à la pathogénie du carcinome. Ici, nous introduisons une méthodologie de l’immunostaining de ZWINT dans les tissus humains de cancer du poumon, suivie de la numérisation numérique des diapositives entières et de l’analyse d’image. Cette méthodologie peut fournir des images numériques de haute qualité et des résultats fiables.
Abstract
Le but de cette étude est d’introduire une méthodologie de l’immunostaining des tissus pulmonaires humains, suivie d’une analyse numérique et d’une analyse d’images. La numérisation numérique est un moyen rapide de numériser une pile de diapositives et de produire des images numériques de haute qualité. Il peut produire des résultats concordants avec la microscopie lumineuse conventionnelle (CLM) par des pathologistes. En outre, la disponibilité d’images numériques permet que la même diapositive peut être observée simultanément par plusieurs personnes. En outre, les images numériques des diapositives peuvent être stockées dans une base de données, ce qui signifie que la détérioration à long terme des diapositives en verre est évitée. Les limites de cette technique sont les suivantes. Tout d’abord, il a besoin de tissus préparés de haute qualité et l’immunohistochimie originale (IHC) glisse sans aucun dommage ou résidu de scellant excédentaire. Deuxièmement, les secteurs de tumeur ou nontumor devraient être spécifiés par les pathologistes expérimentés avant l’analyse utilisant le logiciel, afin d’éviter n’importe quelle confusion au sujet de la tumeur ou des secteurs nontumorpendants pendant la notation. Troisièmement, l’opérateur doit contrôler la reproduction des couleurs tout au long du processus de numérisation dans l’imagerie de diapositives entières.
Introduction
ZW10 protéine d’interaction (ZWINT) est un composant nécessaire du complexe kinetochore qui est impliqué dans le point de contrôle de fuseau mitotique1,2,3. Il a été rapporté que l’épuisement de ZWINT conduit à la ségrégation prématurée aberrante de chromosome1,2,3. Des études récentes ont suggéré que ZWINT est impliqué dans la pathogénie des tumeurs multiples en favorisant la prolifération des cellules tumorales4,5. Nous avons précédemment rapporté la surexpression de ZWINT dans le cancer du poumon5. Il a été largement admis que l’analyse des diapositives par les pathologistes utilisant CLM est longue et non quantitative6,7,8. En outre, la détérioration des glissières en verre stockées pourrait rendre impossible de rétracter les diapositives précédemment créées. La nouvelle méthode d’imagerie numérique à glissière (WSI) par ordinateur peut surmonter ces limites6,7,8.
À cette fin, nous décrivons une méthodologie de l’immunostaining de ZWINT dans les tissus humains de cancer du poumon, couplée à la numérisation numérique de glissement entier et à l’analyse d’image basée sur le logiciel. Le principal avantage de cette méthodologie est la production de résultats concordants avec CLM. Cette technologie peut être largement utilisée dans les domaines de la notation pathologique de la coloration de l’hématoxylin-éosine (H et E) et IHC, de la fluorescence in situ hybridation (FISH), des microréseaux tissulaires (TMA) et de la découverte et du développement de médicaments.
Protocol
Representative Results
Discussion
La numérisation de diapositives entières devient un sujet brûlant pour sa numérisation robuste et la production d’images de haute qualité à des fins cliniques et de recherche11,12,13. Les images peuvent être produites par des microscopes à balayage en quelques minutes11,12,13. En appliquant cette méthodologie, nous avons obtenu…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce projet a été soutenu par la National Natural Foundation of China (No. 81500151, 81400121, 81270607, 81541027, et 81501352) et la Natural Foundation of Hubei Province (Chine) (No. 2017CFB631). Les auteurs expriment leur gratitude à Guo Qin, Chang Min, Li Hui, et leurs collègues de Wuhan Google Biological Technology Co., LTD pour leur soutien technique. Les auteurs remercient également Muhammad Jamal pour l’édition linguistique.
Materials
| Pannoramic MIDI | 3D HISTECH | Cat: PMIDI-040709 | An automated digital slide scanner with a remarkable feature set :12-slide capacity, fluorescence scanning, and many more. |
| QuantCenter | 3D HISTECH | Downloaded from the official website of the company | The framework for 3DHISTCH's image analysis applications. |
| LEICA RM2235 | Leica Microsystems | Cat: 14050038604 | The enhanced precision of the new accessories will add convenience to block to knife approach as well as specimen orientation. |
| Rabbit anti-human Anti-ZWINT antibody | Abcam | Cat: ab197794 | Immunohistochemical analysis of ZWINT in human lung tissue. |
| Anti-rabbit secondary antibody | Wuhan Goodbio Technology | Cat:GB23303-1 | Secondary antibody for IHC staining. |
| Phosphate-buffered saline | Wuhan Goodbio Technology | Cat:G0002 | A solution containing a phosphate buffer. |
| OLYMPUS CX23 | OLYMPUS | Cat:6M87620 | Microscope for detection of H&E or IHC slides. |
| Dimethylbenzene | Shanghai Lingfeng Chemical Reagent | Cat:1330-20-7 | A colorless, flammable fluid used as a solvent and clarifying agent in the preparation of tissue sections for microscopic study. |
| Hematoxylin Staining Solution | Wuhan Servicebio technology | Cat:G1039 | It is commonly used for histologic studies, oftern colors the nuclei of cells blue. |
| Tween 20 | Baitg | Cat:2005-64-5 | It is a polysorbate-type nonionic surfactant formed by the ethoxylation of sorbitan before the addition of lauric acid. It is used as a deterent and emulsifier in pharmacological applications. |
| Citric acid repair liquid | Wuhan Servicebio technology | Cat:G1202 | Is is used to repair antigen after fixation during IHC procedure. |
| LEICA ASP200s | Leica | Cat: 14048043626 | It was designed for routine and research histopathology of up to 200 cassettes. |
| LEICA Arcadia H | Leica | Cat: 14039354103 | It is a heated paraffin embedding station and allows for simple operation and precise control, resulting in improved quality, a smooth workflow and reliability. |
| LEICA Arcadia C | Leica | Cat: 14039354102 | It is a cold plate holding more than 60/65 cassettes on its large working surface. It was designed with an environment adaptive control module to make sure the operating temperature is always stabilized at -6°C. |
| CaseViewer Software | 3DHISTECH |
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