Digitale Analyse der Immunostainierung von ZW10 Interacting Protein in menschlichen Lungengeweben
Summary
ZW10 Interacting Protein (ZWINT) beteiligt sich am mitotischen Spindel-Checkpoint und der Pathogenese des Karzinoms. Hier stellen wir eine Methodik zur Immunostainierung von ZWINT in menschlichen Lungenkrebsgeweben vor, gefolgt vom digitalen Scannen ganzer Dias und Bildanalyse. Diese Methode kann qualitativ hochwertige digitale Bilder und zuverlässige Ergebnisse liefern.
Abstract
Ziel dieser Studie ist es, eine Methodik zur Immunfärbung menschlichen Lungengewebes einzuführen, gefolgt von einem digitalen Volldia-Scanning und einer Bildanalyse. Digitales Scannen ist eine schnelle Möglichkeit, einen Stapel von Dias zu scannen und digitale Bilder mit hoher Qualität zu erzeugen. Es kann konkordante Ergebnisse mit konventioneller Lichtmikroskopie (CLM) von Pathologen produzieren. Darüber hinaus ermöglicht die Verfügbarkeit digitaler Bilder, dass dieselbe Folie gleichzeitig von mehreren Personen beobachtet werden kann. Darüber hinaus können digitale Bilder von Dias in einer Datenbank gespeichert werden, was eine langfristige Verschlechterung von Glasdias vermeidet. Die Grenzen dieser Technik sind wie folgt. Zunächst benötigt es hochwertiges vorbereitetes Gewebe und die ursprüngliche Immunhistochemie (IHC) gleitet ohne Beschädigung oder überschüssige Dichtstoffrückstände. Zweitens sollten Tumor- oder Nichttumorbereiche von erfahrenen Pathologen vor der Analyse mit Software angegeben werden, um Verwirrung über den Tumor oder Nichttumorbereiche während der Bewertung zu vermeiden. Drittens muss der Bediener die Farbwiedergabe während des gesamten Digitalisierungsprozesses in der Ganzschiebebildgebung steuern.
Introduction
ZW10 interagierendes Protein (ZWINT) ist ein notwendiger Bestandteil des Kinetochore-Komplexes, der am mitotischen Spindel-Checkpoint1,2,3beteiligt ist. Es wurde berichtet, dass die Erschöpfung von ZWINT zu einer abnormen vorzeitigen Chromosomentrennung1,2,3führt. Jüngste Studien haben ergeben, dass ZWINT an der Pathogenese mehrerer Tumoren beteiligt ist, indem die Proliferation von Tumorzellen gefördert wird4,5. Wir berichteten zuvor über die Überexpression von ZWINT bei Lungenkrebs5. Es ist allgemein anerkannt, dass die Analyse von Dias durch Pathologen mit CLM zeitaufwändig und nicht quantitativist 6,7,8. Darüber hinaus könnte die Verschlechterung der gelagerten Glasgweise es unmöglich machen, zuvor erstellte Dias zurückzuziehen. Die neue Methode der computerbasierten, digitalen Ganzdia-Bildgebung (WSI) kann diese Einschränkungen überwinden6,7,8.
Zu diesem Zweck beschreiben wir eine Methodik der Immunostainierung von ZWINT in menschlichen Lungenkrebsgeweben, gekoppelt mit ganzdia-digitalem Scannen und softwarebasierter Bildanalyse. Der Hauptvorteil dieser Methodik ist die Erstellung von konkordanten Ergebnissen mit CLM. Diese Technologie kann weit verbreitet in den Bereichen der pathologischen Bewertung von Hämatoxylin-Eosin-Färbung (H&E) und IHC, Fluoreszenz-in-Situ-Hybridisierung (FISH), Gewebemikroarrays (TMA) und Arzneimittelentdeckung und -entwicklung eingesetzt werden.
Protocol
Representative Results
Discussion
Ganzdia-Scanning wird zu einem heißen Thema für sein robustes Scannen und die Produktion von qualitativ hochwertigen Bildern für klinische und Forschungszwecke11,12,13. Bilder können mit Dia-Scanning-Mikroskopen innerhalb von Minuten erstellt werden11,12,13. Mit dieser Methode erhielten wir hochwertige Bilder für ZWINT IHC-Dias und…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dieses Projekt wurde von der National Natural Foundation of China (Nr. 81500151, 81400121, 81270607, 81541027 und 81501352) und der Natural Foundation of Hubei Province (China) (Nr. 2017CFB631) unterstützt. Die Autoren danken Guo Qin, Chang Min, Li Hui und ihren Kollegen von Wuhan Google Biological Technology Co., LTD für ihren technischen Support. Die Autoren danken auch Muhammad Jamal für die Sprachbearbeitung.
Materials
| Pannoramic MIDI | 3D HISTECH | Cat: PMIDI-040709 | An automated digital slide scanner with a remarkable feature set :12-slide capacity, fluorescence scanning, and many more. |
| QuantCenter | 3D HISTECH | Downloaded from the official website of the company | The framework for 3DHISTCH's image analysis applications. |
| LEICA RM2235 | Leica Microsystems | Cat: 14050038604 | The enhanced precision of the new accessories will add convenience to block to knife approach as well as specimen orientation. |
| Rabbit anti-human Anti-ZWINT antibody | Abcam | Cat: ab197794 | Immunohistochemical analysis of ZWINT in human lung tissue. |
| Anti-rabbit secondary antibody | Wuhan Goodbio Technology | Cat:GB23303-1 | Secondary antibody for IHC staining. |
| Phosphate-buffered saline | Wuhan Goodbio Technology | Cat:G0002 | A solution containing a phosphate buffer. |
| OLYMPUS CX23 | OLYMPUS | Cat:6M87620 | Microscope for detection of H&E or IHC slides. |
| Dimethylbenzene | Shanghai Lingfeng Chemical Reagent | Cat:1330-20-7 | A colorless, flammable fluid used as a solvent and clarifying agent in the preparation of tissue sections for microscopic study. |
| Hematoxylin Staining Solution | Wuhan Servicebio technology | Cat:G1039 | It is commonly used for histologic studies, oftern colors the nuclei of cells blue. |
| Tween 20 | Baitg | Cat:2005-64-5 | It is a polysorbate-type nonionic surfactant formed by the ethoxylation of sorbitan before the addition of lauric acid. It is used as a deterent and emulsifier in pharmacological applications. |
| Citric acid repair liquid | Wuhan Servicebio technology | Cat:G1202 | Is is used to repair antigen after fixation during IHC procedure. |
| LEICA ASP200s | Leica | Cat: 14048043626 | It was designed for routine and research histopathology of up to 200 cassettes. |
| LEICA Arcadia H | Leica | Cat: 14039354103 | It is a heated paraffin embedding station and allows for simple operation and precise control, resulting in improved quality, a smooth workflow and reliability. |
| LEICA Arcadia C | Leica | Cat: 14039354102 | It is a cold plate holding more than 60/65 cassettes on its large working surface. It was designed with an environment adaptive control module to make sure the operating temperature is always stabilized at -6°C. |
| CaseViewer Software | 3DHISTECH |
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