मानव फेफड़ों के ऊतकों में $W10 बातचीत प्रोटीन के इम्यूनोस्टेनिंग का डिजिटल विश्लेषण

Summary

$W10 बातचीत प्रोटीन (जेडआईओटी) माइटोटिक धुरी जांच की चौकी और कार्सिनोमा के रोगजनन में भाग लेता है। यहाँ, हम मानव फेफड़ों के कैंसर के ऊतकों में $WINT के इम्यूनोस्टेनिंग की एक पद्धति पेश करते हैं, जिसके बाद पूरी स्लाइड्स और छवि विश्लेषण की डिजिटल स्कैनिंग होती है। इस पद्धति उच्च गुणवत्ता वाले डिजिटल छवियों और विश्वसनीय परिणाम प्रदान कर सकते हैं.

Abstract

इस अध्ययन का उद्देश्य मानव फेफड़ों के ऊतकों के इम्यूनोस्टेनिंग की एक पद्धति शुरू करना है, जिसके बाद पूरे-स्लाइड डिजिटल स्कैनिंग और छवि विश्लेषण का पालन किया जाता है। डिजिटल स्कैनिंग स्लाइड के ढेर को स्कैन करने और उच्च गुणवत्ता वाले डिजिटल छवियों का उत्पादन करने का एक तेज़ तरीका है। यह पैथोलॉजिस्ट द्वारा पारंपरिक प्रकाश माइक्रोस्कोपी (सीएलएम) के साथ सामंजस्यपूर्ण परिणाम का उत्पादन कर सकते हैं। इसके अलावा, डिजिटल छवियों की उपलब्धता यह संभव है कि एक ही स्लाइड समवर्ती कई लोगों द्वारा मनाया जा सकता है बनाता है. इसके अलावा, स्लाइड की डिजिटल छवियों को डेटाबेस में संग्रहीत किया जा सकता है, जिसका अर्थ है कि कांच की स्लाइडों की दीर्घकालिक गिरावट से बचा जा सकता है। इस तकनीक की सीमाएं इस प्रकार हैं। सबसे पहले, यह किसी भी क्षति या अतिरिक्त सीलेंट अवशेषों के बिना उच्च गुणवत्ता वाले तैयार ऊतक और मूल इम्यूनोहिस्टोकेमिस्ट्री (आईएचसी) स्लाइड की जरूरत है। दूसरा, ट्यूमर या nontumor क्षेत्रों सॉफ्टवेयर का उपयोग कर विश्लेषण से पहले अनुभवी पैथोलॉजिस्ट द्वारा निर्दिष्ट किया जाना चाहिए, स्कोरिंग के दौरान ट्यूमर या nontumor क्षेत्रों के बारे में किसी भी भ्रम से बचने के लिए. तीसरा, ऑपरेटर पूरे स्लाइड इमेजिंग में डिजिटलीकरण प्रक्रिया भर में रंग प्रजनन को नियंत्रित करने की जरूरत है.

Introduction

$W10 बातचीत प्रोटीन ($WINT) kinetochore परिसर का एक आवश्यक घटक है जो माइटोटिक धुरी जांच की चौकी^1,2,3में शामिल है । यह सूचित किया गया है कि जिंट की कमी से समय पूर्व गुणसूत्र पृथक्करण^1,2,3होता है . हाल के अध्ययनों से पता चला है कि ट्यूमर कोशिकाओं^केप्रसार को बढ़ावा देने के द्वारा कई ट्यूमर के रोगजनन में शामिल है^{4 ,5}. हम पहले फेफड़ों के कैंसर⁵में $WINT के overexpression की सूचना दी. यह व्यापक रूप से स्वीकार किया गया है कि सीएलएम का उपयोग करने वाले पैथोलॉजिस्ट द्वारा स्लाइडों का विश्लेषण समय लेने वाला है न कि मात्रात्मक^6,7,8_. इसके अलावा, संग्रहीत ग्लास स्लाइड की गिरावट से पहले बनाई गई स्लाइड्स को वापस लेना असंभव हो सकता है। कंप्यूटर आधारित, डिजिटल पूरे स्लाइड इमेजिंग (डब्ल्यूएसआई) के उभरते विधि इन सीमाओं को पार कर सकते^{हैं 6,7,8}.

इस अंत में, हम मानव फेफड़ों के कैंसर के ऊतकों में $WINT के इम्यूनोस्टेनिंग की एक पद्धति का वर्णन करते हैं, जो पूरे-स्लाइड डिजिटल स्कैनिंग और सॉफ्टवेयर-आधारित छवि विश्लेषण के साथ मिलकर होते हैं। इस पद्धति का मुख्य लाभ सीएलएम के साथ सुसंगत परिणामों का उत्पादन है। इस प्रौद्योगिकी व्यापक रूप से hematoxylin-eosin धुंधला (एच एंड ई) और IHC, situ संकरीकरण (फिश), ऊतक microarrays (TMA), और दवा की खोज और विकास में फ्लोरोसेंट के रोग स्कोरिंग के क्षेत्रों में इस्तेमाल किया जा सकता है.

Protocol

यहाँ वर्णित सभी तरीकों वुहान विश्वविद्यालय के झोंगना अस्पताल और वुहान विश्वविद्यालय के रेनमिन अस्पताल की नैतिक समिति द्वारा अनुमोदित किया गया है. 1. आईएचसी स्लाइड की तैयारी कमरे के ताप?…

Representative Results

हमने IHC द्वारा 14 स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा (एससीसी) और 14 एडेनोकार्सीनोमा (एडीसी) सहित गैर-छोटे-छोटे कोशिका फेफड़ों के कैंसर (एनएससीएलसी) नमूनों (ट्यूमर और आसन्न nontumor ऊतकों) के 28 जोड़े में $WINT की अभि?…

Discussion

पूरे स्लाइड स्कैनिंग अपनी मजबूत स्कैनिंग और नैदानिक और अनुसंधान प्रयोजनों के लिए उच्च गुणवत्ता वाले छवियों के उत्पादन के लिए एक गर्म विषय बनता जा रहा है^11,12,13. छवियाँ<s…

Materials

Pannoramic MIDI	3D HISTECH	Cat: PMIDI-040709	An automated digital slide scanner with a remarkable feature set :12-slide capacity, fluorescence scanning, and many more.
QuantCenter	3D HISTECH	Downloaded from the official website of the company	The framework for 3DHISTCH's image analysis applications.
LEICA RM2235	Leica Microsystems	Cat: 14050038604	The enhanced precision of the new accessories will add convenience to block to knife approach as well as specimen orientation.
Rabbit anti-human Anti-ZWINT antibody	Abcam	Cat: ab197794	Immunohistochemical analysis of ZWINT in human lung tissue.
Anti-rabbit secondary antibody	Wuhan Goodbio Technology	Cat:GB23303-1	Secondary antibody for IHC staining.
Phosphate-buffered saline	Wuhan Goodbio Technology	Cat:G0002	A solution containing a phosphate buffer.
OLYMPUS CX23	OLYMPUS	Cat:6M87620	Microscope for detection of H&E or IHC slides.
Dimethylbenzene	Shanghai Lingfeng Chemical Reagent	Cat:1330-20-7	A colorless, flammable fluid used as a solvent and clarifying agent in the preparation of tissue sections for microscopic study.
Hematoxylin Staining Solution	Wuhan Servicebio technology	Cat:G1039	It is commonly used for histologic studies, oftern colors the nuclei of cells blue.
Tween 20	Baitg	Cat:2005-64-5	It is a polysorbate-type nonionic surfactant formed by the ethoxylation of sorbitan before the addition of lauric acid. It is used as a deterent and emulsifier in pharmacological applications.
Citric acid repair liquid	Wuhan Servicebio technology	Cat:G1202	Is is used to repair antigen after fixation during IHC procedure.
LEICA ASP200s	Leica	Cat: 14048043626	It was designed for routine and research histopathology of up to 200 cassettes.
LEICA Arcadia H	Leica	Cat: 14039354103	It is a heated paraffin embedding station and allows for simple operation and precise control, resulting in improved quality, a smooth workflow and reliability.
LEICA Arcadia C	Leica	Cat: 14039354102	It is a cold plate holding more than 60/65 cassettes on its large working surface. It was designed with an environment adaptive control module to make sure the operating temperature is always stabilized at -6°C.
CaseViewer Software	3DHISTECH