O micro tomography computado do raio X é eficaz em obter a informação tridimensional dos espécimes humanos não danificados mas tem o sucesso limitado em observar os tecidos macios. O uso do agente do contraste do ácido fosfotúngstico pode resolver esta edição. Nós implementamos este agente do contraste para examinar tecidos fibromusculares delicados humanos (o ligamento de retenção dos orbicularis).
A dissecção manual e a observação histológica são métodos comuns usados para investigar tecidos humanos. Entretanto, a dissecção manual pode danificar estruturas delicadas, quando o processamento e a observação histológica fornecerem a informação limitada com a imagem latente transversal. O micro tomography computado do raio X (microCT) é uma ferramenta eficaz para obter a informação tridimensional sem danificar espécimes. Entretanto, mostra a eficiência limitada em diferenciar partes macias do tecido. O uso de agentes que melhoram o contraste, como o ácido fosfotúngstico (PTA), pode resolver este problema melhorando o contraste do tecido macio. Nós implementamos o microCT com o PTA para investigar o ligamento de retenção do orbicularis humano (ORL), que é uma estrutura delicada na área da órbita. Neste método, os espécimes colhidos são fixados em formalina, desidratados em soluções de etanol serial, e coradas com uma solução de PTA. Após a coloração, a varredura de microCT, a reconstrução 3D, e a análise são executadas. A pele, os ligamentos, e os músculos podem claramente ser visualizados usando este método. O tamanho da amostra e a duração da coloração são características essenciais do método. A espessura adequada do espécime foi de cerca de 5 – 7 mm, acima da qual o processo foi retardado, e a duração ótima foi de 5 a 7 dias, abaixo do qual um buraco vazio na área central ocasionalmente ocorreu. Para manter a localização e a direção de peças pequenas durante o corte, é recomendável costurar na mesma região de cada peça. Além disso, análises preliminares da estrutura anatômica são necessárias para identificar corretamente cada peça. Parafilm pode ser usado para impedir a secagem, mas o cuidado deve ser tomado para impedir a distorção do espécime. Nossa observação multidirecional mostrou que o ORL é compor de um malha multicamada de placas contínuas, um pouco do que a fio-como fibras, como relatado previamente. Estes resultados sugerem que a varredura de microCT com PTA seja útil para examinar compartimentos específicos dentro das estruturas complexas do tecido humano. Pode ser útil nas análises de tecidos de câncer, tecidos nervosos e vários órgãos, como o coração e o fígado.
A dissecção manual e a observação histológica são tipicamente usadas para examinar os tecidos humanos, como músculos e tecidos conjuntivos. No entanto, a dissecção manual pode facilmente danificar estruturas delicadas, e a observação histológica fornece informações limitadas sobre superfícies planas transversais1,2. Portanto, métodos melhorados são necessários para examinar os tecidos de forma mais precisa e eficiente.
A tomografia computadorizada convencional (TC) é geralmente utilizada na prática clínica, mas carece da capacidade de distinguir pequenas estruturas2,3. O micro raio X CT (microCT) é uma ferramenta eficaz para obter a informação tridimensional (3D) de estruturas pequenas dos espécimes, sem destruí-los. Entretanto, microCT tem aplicações limitadas porque somente os tecidos densos podem ser visualizados claramente; Ele não pode ser usado para diferenciar os tecidos moles. Para superar esta limitação, os agentes de coloração podem ser usados. Os agentes que melhoram o contraste, como o ácido fosfotúngstico (PTA), o ácido foshomolíbdico e o iodo de Lugol, melhoram a taxa de contraste dos tecidos moles durante a digitalização4,5. Vários estudos comparando esses agentes sugerem que a PTA demonstra bom desempenho e é de fácil manuseio6,7,8.
O ligamento de retenção de orbicularis (ORL) é uma estrutura delicada em torno da órbita, que pode facilmente ser danificada durante a observação convencional9. Nós examinamos e recuperado com sucesso a informação 3D nesta estrutura usando microCT com o PTA como um agente do contraste. Este método pode ser aplicado a estudos sobre outros tecidos humanos, como o coração e o fígado, com modificações apropriadas10,11,12.
Nós implementamos o microCT com preparação do PTA no exame de tecidos macios humanos. Resumidamente, os espécimes são colhidos e fixados em formalina por alguns dias, seguidos de desidratação em soluções de etanol serial. Coloc a amostra na solução do PTA diretamente depois que a fixação do formalina pode conduzir a algum rachamento do tecido devido à desidratação rápida. Conseqüentemente, a desidratação de série é necessária antes da mancha de PTA. Em seguida, as amostras são manchadas usando a s…
The authors have nothing to disclose.
Este estudo foi apoiado por um subsídio de pesquisa do corpo docente da faculdade de medicina da Universidade de Yonsei (6-2018-0099). Os autores agradecem às pessoas que doaram muito generosamente seus corpos para a faculdade de medicina da Universidade de Yonsei. Estamos gratos a Jun Ho Kim e Jong Ho Bang por seu apoio técnico (membros da equipe do centro de educação em anatomia cirúrgica da faculdade de medicina da Universidade de Yonsei). Nós somos gratos igualmente a Genoss co., Ltd. para o sistema de varredura de alta qualidade de microCT usado nesta pesquisa.
12 Tungsto(Ⅵ)phosphoric acid n-hydrate Phosphotungstic acid |
Junsei | 84220-0410 | PTA powder |
CTvox | Bruker | ver 2.7 | 3D recon software |
Nrecon | Bruker | ver 1.7.0.4 | Reconstruction software |
Skyscan | Bruker | 1173 | MicroCT scanner |
Tconv | Bruker | ver 2.0 | File resizing software |