닭 에이메리아 기생충의 핵 과 생체 내 전파
Summary
여기서, 우리는 포자조이트 또는 2세대 메로조이트에 의한 닭에이메리아 기생충의 안정적인 형질변환을 달성할 수 있는 방법을 제공했다. 이종 항원 유전자를 발현하는 유전자 변형 에이메리안 기생충은 백신 전달 차량으로 사용될 수 있었다.
Abstract
형질감염은 DNA와 이중 가닥 RNA와 같은 유전 물질이 관심있는 유전자를 수정하기 위해 세포로 전달되는 기술적 과정입니다. 현재, 형질전환 기술은 가금류 및 가축에서 coccidiosis의 원인 인 Eimeria의연구를위한 필수 도구가되고있다. 이 프로토콜은 에이메라체 기생충의 안정적인 형질 감염에 대한 자세한 설명을 제공합니다 : 포자형 또는 2 세대 메로 조이의 정제 및 핵, 형질 감염된 기생충의 생체 전파. 이 프로토콜을 사용하여, 우리는 Eimeria의여러 종에서 형질 감염을 달성했다. 종합하면, 핵은 에이메리안 기생충의 유전자 조작을 촉진하는 유용한 도구입니다.
Introduction
Eimeria spp. 가축 및 가금류 산업에 상당한 경제적 손실로 이어지는 coccidiosis를 일으키는 원인이 됩니다. 항구균 약물, 그리고 어느 정도, 감쇠된 항구균 백신은, cocciiosis의 통제를 위해 널리 이용되고 있더라도, 그들의 약 저항, 약 잔류물 및 독성을 되찾는 백신 긴장의 잠재적인 확산에 관하여 아직도 결점이 있습니다1. 분자 생물학의 발달과 함께, 형질감염은 유전자 기능을 연구하고, 새로운 백신을 개발하고, Eimeria를위한 새로운 약 표적을 검열하기 위한 중요한 공구가 되었습니다.
지난 수십 년 동안, 형질감염은 플라스모듐과 톡소플라즈마 곤디2,3,4,5,6과같은 복합기생충에 성공적으로 적용되었다. E. 테넬라에서 형질 감염에 대한 기자로 β-gal을 사용하여 연구는 에이메리아에서이러한 작업을 조종7. E. tenella8,9, E. 미염10,및 E. acervulina (장 외, 미공개 데이터)의 형질감염은 닭에서 성공적이었다. 최근에는핵11을통해 E. necatrix의 메로조이스를 사용하여 형질혈을 달성했습니다.
연구 결과에 따르면 이종항균을 발현하는 에이메리아는 캄필로박터 제자니 항원 A(CjaA) 또는 닭인터류친 2(chIL-2)12,13을 발현하는 것과 같은 재조합 백신으로 개발될 가능성이 있는 것으로 나타났다. 따라서, 이 프로토콜은 닭에 있는 Eimeria spp. 의 핵 제거 연구 결과 기술합니다. 절차는 포자형 Eimeria 기생충에 대한 연구를 시작하는 연구원을 돕기 위하여 포자조이트 또는 merozoites의 정화, 플라스미드 DNA를 가진 핵, cloacal 접종/정맥 주입 및 생체 내 전파를 기술합니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
1990 년대에, 형질 전환 시스템은 apicomplexan 기생충을 위해 개발되고, eimerian 기생충에 대한 연구를 위해 이용되었습니다. 최근에는 E. 테넬라8,9 및 E. nieschulzi15에서안정적인 형혈이 수행되었다. 2세대 메로조이트11을트랜스펙팅하여 E. 네카트릭스의 안정적인 형혈을 달성했습니다. 날개 정맥을 통해 …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 중국의 국가 핵심 연구 개발 프로그램 (2017YFD0501200)과 중국 국립 자연 과학 재단 (31572507, 31772728 및 31873007)에 의해 지원되었습니다.
Materials
| ATP-disodium | Sigma | A26209 | |
| Cellulose DE-52 | Solarbio | C8350 | |
| Constant Flow Pump | SHANGHAI JINGKE INDUSTRIAL CO., LTD. | HL-2B | |
| DMEM | MACGENE | CM15019 | |
| Glass beads | Sigma | Z250473-1PAK | |
| Glucose | Sigma | No. V900116 | |
| Glycine | Biotopped | G6200 | |
| HBSS | MACGENE | CC016 | |
| KH2PO4 | Sigma | No. V900041 | |
| Low Speed Centrifuge | BEIJING ERA BEILI CENTRIFUGE CO., LTD. | DT5-2 | |
| Magnetic Mixer | SCILOGEX | MS-H280-Pro | |
| MgCl2 | Sigma | 449164 | |
| MoFlo cell sorter | BeckMan Coulter, US | 201309995 | |
| NaHCO3 | Sigma | 144-55-8 | |
| Nucleofection device | LONZA/amaxa | 90900012 (Nucleofector II) | |
| PBS | Solarbio | P1010 | |
| Percoll (DG gradient stock solution) | GE Healthcare | 17-0891-09 | |
| Sodium taurodeoxycholate hydrate | Sigma | T0875 | |
| Sorvall Legend Micro 17 Microcentrifuge | ThermoFisher Scientific | 75002430 | |
| The composition of DMEM: 4.5 g/L glucose with sodium pyruvate, L-glutamine, and 25 mM HEPES. | |||
| Trypsin | Solarbio | T8150 | |
| Vortex Mixer | Beijing North TZ-Biotech Develop.co. | HQ-60-II | |
| Water Bath Thermostat | Grant Instruments (Cambridge), Ltd. | GD120,GM0815010 |
Riferimenti
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