Burada, sporozoitler veya ikinci nesil merozoitler nükleofekting tavuk Eimeria parazitlerin kararlı transfeksiyon elde etmek için bir yöntem sağladı. Heterolog antijenik genleri ifade eden genetiği değiştirilmiş eimerian parazitler aşı dağıtım aracı olarak kullanılabilir.
Transfeksiyon, DNA ve çift iplikli RNA gibi genetik materyalin ilgi genini değiştirmek için hücrelere teslim edildiği teknik bir süreçtir. Şu anda, transgenik teknoloji Eimeriaçalışma için vazgeçilmez bir araç haline geliyor , kümes hayvanları ve hayvancılık koksidoz nedensel ajanlar. Bu protokol eimerian parazitlerde kararlı transfeksiyonun ayrıntılı bir tanımını sağlar: sporozoitlerin veya ikinci nesil merozitlerin saflaştırılması ve nükleofeslenmesi ve transfected parazitlerin in vivo yayılımı. Bu protokolü kullanarak, Eimeriaçeşitli türlerde transfection elde etti. Birlikte ele alındığında, nükleofection eimerian parazitlerde genetik manipülasyon kolaylaştırmak için yararlı bir araçtır.
Eimeria spp. koksidoza neden olur ve bu da hayvancılık ve kümes hayvanları endüstrisinde önemli ekonomik kayıplara yol açar. Antikokokidiyal ilaçlar, ve bir ölçüde, zayıflatılmış antikokokidiyal aşılar, coccidiosis kontrolü için yaygın olarak kullanılmaktadır rağmen, hala onların ilaç direnci ile ilgili eksiklikler vardır, ilaç artıkları, ve virülans yeniden aşı suşlarının potansiyel difüzyon1. Moleküler biyolojinin gelişmesiyle transfeksiyon, gen fonksiyonlarını incelemek, yeni aşılar geliştirmek ve Eimeriaiçin yeni ilaç hedeflerinitleme için hayati bir araç haline gelmiştir.
Son yıllarda, transfeksiyon plazmodium ve Toxoplasma gondii2,3,4,5,6gibi apicomplexan parazitler için başarıyla uygulanmıştır. E. tenella transfection için bir muhabir olarak β-gal kullanarak bir çalışma Eimeria7gibi çalışma pilot . E. tenella8transfeksiyon ,9, E. mitis10, ve E. acervulina (Zhang ve ark., yayınlanmamış veri) tavukbaşarılı oldu. Son zamanlarda, biz nükleofection11ile E. necatrix merozoitler kullanarak transfeksiyon elde etti.
Çalışmalar eimeria heterolog antijen ifade bir rekombinant aşı olarak geliştirilebilir potansiyeline sahip olduğunu gösterdi, bu campylobacter jejuni antijen A ifade gibi (CjaA) veya tavuk interlökin 2 (chIL-2)12,13. Bu nedenle, bu protokol tavuklarda Eimeria spp. bir nükleofection çalışma açıklar. Prosedür, sporozoitlerin veya merozoitlerin saflaştırılmasını, plazmid DNA ile nükleofeksiyonu, kloakal aşılama/intravenöz enjeksiyonu ve araştırmacıların transgenik Eimeria parazitleri üzerinde çalışmalara başlamalarına yardımcı olmak için in vivo yayılımı tanımlar.
1990’larda apikompleks parazitler için bir transfeksiyon sistemi geliştirilmiş ve eimerian parazitler üzerinde çalışmalarda kullanılmıştır. Son zamanlarda, kararlı transfeksiyon E. tenella8yapıldı ,9 ve E. nieschulzi15. İkinci nesil merozoitler 11’i dönüştürerek E. necatrix’in kararlı transfeksiyonuna ulaştık. E. acervulina transfected sporozoitlerin kanat da…
The authors have nothing to disclose.
Bu çalışma Çin Ulusal Anahtar Araştırma ve Geliştirme Programı (2017YFD0501200) ve Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (31572507, 31772728 ve 31873007) tarafından desteklenmiştir.
ATP-disodium | Sigma | A26209 | |
Cellulose DE-52 | Solarbio | C8350 | |
Constant Flow Pump | SHANGHAI JINGKE INDUSTRIAL CO., LTD. | HL-2B | |
DMEM | MACGENE | CM15019 | |
Glass beads | Sigma | Z250473-1PAK | |
Glucose | Sigma | No. V900116 | |
Glycine | Biotopped | G6200 | |
HBSS | MACGENE | CC016 | |
KH2PO4 | Sigma | No. V900041 | |
Low Speed Centrifuge | BEIJING ERA BEILI CENTRIFUGE CO., LTD. | DT5-2 | |
Magnetic Mixer | SCILOGEX | MS-H280-Pro | |
MgCl2 | Sigma | 449164 | |
MoFlo cell sorter | BeckMan Coulter, US | 201309995 | |
NaHCO3 | Sigma | 144-55-8 | |
Nucleofection device | LONZA/amaxa | 90900012 (Nucleofector II) | |
PBS | Solarbio | P1010 | |
Percoll (DG gradient stock solution) | GE Healthcare | 17-0891-09 | |
Sodium taurodeoxycholate hydrate | Sigma | T0875 | |
Sorvall Legend Micro 17 Microcentrifuge | ThermoFisher Scientific | 75002430 | |
The composition of DMEM: 4.5 g/L glucose with sodium pyruvate, L-glutamine, and 25 mM HEPES. | |||
Trypsin | Solarbio | T8150 | |
Vortex Mixer | Beijing North TZ-Biotech Develop.co. | HQ-60-II | |
Water Bath Thermostat | Grant Instruments (Cambridge), Ltd. | GD120,GM0815010 |