זיהוי, בידוד ואפיון של אבות פיברו-אדיפוגניים (FAPs) ואבעות מיוגניים (חברי פרלמנט) בשריר השלד בחולדה
Summary
פרוטוקול זה מתאר שיטה לבודד אבות פיברו-אדיפוגניים (FAPs) ואבים מיוגניים (MPs) משרירי השלד של חולדה. ניצול החולדה במודלים של פגיעה בשרירים מספק זמינות רקמות מוגברת משריר אטרופי לניתוח ורפרטואר גדול יותר של שיטות מאומתות להערכת כוח השריר וההליכה בבעלי חיים הנעים חופשיים.
Abstract
אבות פיברו-אדיפוגניים (FAPs) הם תאים ביניים המתגוררים בשריר השלד, שיחד עם אבות מיוגניים (חברי פרלמנט) ממלאים תפקיד מפתח בהומאוסטזיס שרירים, פציעה ותיקון. הפרוטוקולים הנוכחיים לזיהוי FAPs ובידוד משתמשים בציטומטריה של זרימה/מיון תאים המופעלים על-ידי פלואורסצנטיות (FACS) ומחקרים המעריכים את תפקודם ב-vivo עד כה בוצעו אך ורק בעכברים. הגודל הטבוע הגדול יותר של החולדה מאפשר ניתוח מקיף יותר של FAPs במודלים לפגיעה בשרירי השלד, במיוחד בשריר ניוון חמור או כאשר החוקרים דורשים מסת רקמה משמעותית כדי לבצע בדיקות מרובות במורד הזרם. החולדה מספקת בנוסף מבחר גדול יותר של בדיקות תפקודיות שרירים שאינן דורשות סדציה או הקרבה של בעלי חיים, ובכך מזעור התחלואה והשימוש בבעלי חיים על ידי הפעלת הערכות סדרתיות. פרוטוקולי ציטומטריית הזרימה/FACS הממוטבים לעכברים הם ספציפיים למינים, במיוחד מוגבלים על ידי המאפיינים של נוגדנים זמינים מסחרית. הם לא עברו אופטימיזציה להפרדת FAPs מעכברוש או שריר סיבי מאוד. פרוטוקול ציטומטריית זרימה /FACS לזיהוי ובידוד של FAPs וחברי פרלמנט משריר השלד של חולדה בריא ופגום פותח, תוך הסתמכות על הביטוי הדיפרנציאלי של סמני פני השטח CD31, CD45, Sca-1 ו- VCAM-1. מכיוון שנוגדנים ראשיים מאומתים בציטומטריה של זרימה מוגבלים מאוד, בוצעה הטיות פנימיות של הנוגדן שמכוון ל-Sca-1. באמצעות פרוטוקול זה, הטיות מוצלחות של Sca-1 אושרו, וזיהוי ציטומטרי של FAPs וחברי פרלמנט אומת על ידי תרבית תאים וחיסון של FAPs וחברי פרלמנט מבודדים FACS. לבסוף, אנו מדווחים על קורס זמן FAPs חדשני במודל גינה ממושכ (14 שבועות) חולדה. שיטה זו מספקת לחוקרים את היכולת לחקור FAPs במודל בעלי חיים חדשני.
Introduction
תאי אב פיברו-אדיפוגניים (FAPs) הם אוכלוסייה של תאי אב רב-תכליתיים בשריר השלד הממלאים תפקיד קריטי בהומאוסטזיס שרירים, תיקון והתחדשות, ומנגד, גם מתווכים תגובות פתולוגיות לפגיעה בשרירים. כפי שהשם מרמז, FAPs זוהו במקור כאוכלוסייה ילידית עם פוטנציאל להבדיל לתוך פיברובלסטים אדיפוציטים1, היו אמורים להיות המתווכים העיקריים של חדירה פיברו-שומני של שריר השלד בפציעה כרונית ומחלות. מחקר נוסף גילה כי FAPs מסוגלים בנוסף אוסטוגנזה וכונדרוגנזה2,3,4. לכן, הם נרשמים באופן רחב יותר בספרות כמו אבות mesenchymal או סטרומי3,5,6,7,8. בפגיעה חריפה בשריר השלד, FAPs בעקיפין לסייע myogenesis התחדשות על ידי התפשטות חולפת כדי לספק סביבה נוחה עבור תאי לווין שריר מופעל שלהם במורד הזרם myogenic אבות (MPs) עמיתיהם1,9,10. במקביל להתחדשות מוצלחת, FAPs עוברים אפופטוזיס, מחזירים את מספרם לרמות בסיסיות1,9,10,11. לעומת זאת, בפציעה כרונית בשריר, FAPs לעקוף אותות פרו-אפופטוטיים, אשר התוצאההיא ההתמדהשלהם 9,10,11 ותיקון שרירים חריג.
במחקרים של vivo המעריכים את המנגנונים התאיים והמולקולריים שבאמצעותם FAPs מתווכים תגובות שרירים השתמשו במודלים של בעלי חיים מורינים עד כה1,7,9,10,11,12,13,14. בעוד עכברים מהונדסים גנטית הם כלים רבי עוצמה לשימוש ניתוחים אלה, הגודל הקטן של החיה מגביל את זמינות הרקמות למחקר במודלים פציעה מקומית לטווח ארוך שבו ניוון שרירים יכול להיות עמוק, כגון denervation טראומטי. יתר על כן, מדידת כוח השריר ותפקוד פיזי דורשת ex vivo או מדידות במקום המחייבות סיום של העכבר, או בשיטות vivo הדורשות ניתוח ו/או הרדמה כללית כדי לאפשר הערכה של ביצועי התכווצותשרירים 15,16,17,18,19,20 . בחולדות, ניתוחים תפקודיים שרירים מאומתים היטב ומנוצלים ברחבי העולם, בנוסף לניתוחים להתנהגויות מוטוריות מורכבות יותר כגון ניתוח הליכה (למשל, מדד תפקודים סיאטיים, ניתוח מסלול) קיימים ומבוצעים בבעלי חיים ערים ונועים באופן ספונטני21,22,23,24 . זה גם מייעל את העקרונות של תחלואה מינימלית בניסויים בבעלי חיים, ומספרי בעלי החיים במחקר בשימוש. החולדה ובכך מספקת לחוקר FAPs את הגמישות הנוספת של נפח שרירים פגוע גדול יותר עבור ניתוחי חלבון ותאים ואת היכולת לבצע הערכות סדרתיות של פעילות והתנהגויות תפקודיות סטטיות ודינמיות מורכבות שרירים, בחיה המתריעה.
FAPs זוהו בעיקר ובודדו מדגימות שרירים שלמות באמצעות ציטומטריית זרימה ומיון תאים המופעל על ידי פלואורסצנטיות (FACS) בהתאמה. אלה הם בדיקות מבוססות לייזר המסוגלות לזהות אוכלוסיות תאים ספציפיות מרובות בהתבסס על תכונות אופייניות כגון גודל, פירוט, ושילוב ספציפי של פני תא או סמנים תאיים25. זה יתרון רב במחקר של מערכת איברים כגון שריר השלד, כמו הומאוסטזיס והתחדשות הם תהליכים מורכבים, רב-גורמיים מתואמים על ידי שפע של סוגי תאים. מחקר מכונן זיהה FAPs, כמו גם חברי פרלמנט, באמצעות שיטות ציטומטריות זרימה בשריר השלד של העכבר1. הם הוכיחו כי FAPs הם mesenchymal בטבע, כפי שהם חסרים אנטיגנים פני השטח ספציפי לתאים מן אנדותל (CD31), hematopoietic (CD45), או מיוגניים (Integrin-α7 [ITGA7]) מקורות, אבל ביטא את סמן תא גזע mesenchymal Sca-1 (אנטיגן תא גזע1) 1 מובחן לתאים פיברוגניים אדיפוגניים בתרבות. מחקרים אחרים הדגימו בידוד מוצלח של אבות מזנכימלים בשריר בהתבסס על ביטוי של סמן תאי גזע חלופי, קולטן גורם גדילה נגזר טסיות דם אלפא (PDGFRα)2,7,8 וניתוח נוסף גילה אלה צפויים להיות אותה אוכלוסיית תאים כמו FAPs3. FAPs מזוהים כעת בציטומטריית זרימה באמצעות Sca-1 או PDGFRα כסמן בחירה חיובי1,9,10,11,12,13,14,26,27,28,29,30,31 . השימוש PDGFRα הוא מועדף על רקמה אנושית עם זאת, כמו הומולוג אנושי ישיר של מורין Sca-1 עדיין לא זוהה32. בנוסף, חלבונים אחרים על פני התא דווחו כסמנים של חברי פרלמנט (למשל, VCAM-1), המספקים חלופה פוטנציאלית ל- ITGA7 כאינדיקטור לתאי שושלת מיוגנית במהלך בידוד FAPs33.
בעוד cytometry זרימה / FACS היא מתודולוגיה רבת עוצמה לחקר התפקיד ואת הפוטנציאל הפתוגניים של FAPs בשריר השלד1,9,10,11,13,29, הוא מוגבל מבחינה טכנית על ידי הספציפיות והאופטימיזציה של ריאגנטים הנדרשים שלה. מאז זיהוי ציטומטרי זרימה ובידוד של FAPs פותח ונערך במודלים של חיות עכבר1,9,10,11,29, זה מציב אתגרים עבור חוקרים המעוניינים לחקור FAPs באורגניזמים מודל אחרים. גורמים רבים – כגון גודל רקמות אופטימלי לעיבוד, כמו גם ריאגנט ו / או ייחודיות נוגדנים וזמינות – שונים בהתאם למין המשמש.
בנוסף למחסומים הטכניים לחקר FAPs במודל בעלי חיים חדשני, הם נחקרו במידה רבה בסביבה חריפה ורעילה – בדרך כלל באמצעות הזרקה כימית תוך שרירית או cardiotoxin. הערכת הדינמיקה ארוכת הטווח של FAPs מוגבלת בעיקר להערכה בניוון השרירים של דושן, באמצעות עכבר mdx מודל9,10,11, ומודלים של פגיעה שרירים משולבת כגון קרע מסיבי בשרוול סיבוב שבו טרנספר גיד בו זמנית ו denervation מבוצע על שריריהכתף 26,27,28 . התגובה של FAPs לעלבון הבלעדי של denervation טראומטי כרוני, תופעה שכיחה בתאונות במקום העבודה בתעשייה כבדה, בחקלאות, ובטראומות לידה (פגיעת מקלעת ברכיאלית)34,35,36,37עםתחלואה משמעותית, לא היה מאופיין היטב, לעתים קרובות מוגבל למסגרת זמן לטווח קצר11,38.
אנו מתארים שיטה לזיהוי ובידוד של FAPs וחברי פרלמנט משריר שלד בריא, כמו גם ניוון וסיברוטי חמור בחולדה. ראשית, זיהוי של CD31-/CD45-/Sca-1+/VCAM-1- FAPs ו- CD31-/CD45-/Sca-1-/VCAM-1+ חברי פרלמנט באמצעות עיכול רקמות ופרוטוקול הכתמת ציטומטריה של זרימה מוצג ואימות לאחר מכן של הממצאים שלנו מתבצע באמצעות תרבית והכתמה חיסונית של תאים מבודדים FACS. באמצעות שיטה זו, אנו מדווחים גם על קורס זמן חדש של FAPs במודל פגיעה מבודד לטווח ארוך בחולדה.
Protocol
Representative Results
Discussion
פרוטוקול בידוד FAPs מותאם ומאומת לשרירי חולדות חיוני לחוקרים המעוניינים לחקור מודלים לפציעות שאינם אפשריים בעכבר מסיבות ביולוגיות או טכניות. לדוגמה, עכברים אינם מודל בעלי חיים אופטימלי שבו לחקור פגיעות מקומיות כרוניות, או ניווניות כגון denervation לטווח ארוך. מבחינה ביולוגית, תוחלת החיים הקצרה…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ברצוננו להודות למתקני הליבה של ציטומטריית הזרימה באוניברסיטת אוטווה ולמרכז המחקר קינן למדעים ביו-רפואיים (KRC), לבית החולים סנט מייקלס בריאות מאוחדת טורונטו על המומחיות וההדרכה שלהם באופטימיזציה של פרוטוקול ציטומטריית הזרימה / FACS המוצג בכתב יד זה. עבודה זו מומנה על ידי רפואה על ידי קרן עיצוב רעיונות חדשים 2018 (MbDNI-2018-01) ל- JB.
Materials
| 5 mL Polypropylene Round-Bottom Tube | Falcon | 352063 | |
| 5 mL Polystyrene Round-Bottom Tube with Cell-Strainer Cap | Falcon | 352235 | |
| 10 cm cell culture dishes | Sarstedt | 83.3902 | |
| 12-well cell culture plate | ThermoFisher | 130185 | |
| 12 mm glass coverslips, No.2 | VWR | 89015-724 | |
| 10 mL Syringe | Beckton Dickenson | 302995 | |
| 15 mL centrifuge tubes | FroggaBio | 91014 | |
| 20 gauge needle | Beckton Dickenson | 305176 | |
| 25mL Serological pipette | Sarstedt | 86.1685.001 | |
| 40µm cell strainer | Fisher Scientific | 22363547 | |
| 50mL centrifuge tubes | FroggaBio | TB50 | |
| AbC Total Antibody Compensation Beads | ThermoFisher | A10497 | |
| Ammonium Chloride, Reagent Grade | Bioshop | AMC303.500 | |
| APC Conjugation Kit, 50-100µg | Biotium | 92307 | |
| Aquatex Aqueous Mounting Medium | Merck | 108562 | |
| Biolaminin 411 LN | Biolamina | LN411 | |
| Bovine Serum Albumin (BSA) | Bioshop | ALB001 | |
| Calcium Chloride | Bioshop | CCL444.500 | |
| Collagenase Type II | Gibco | 17101015 | |
| CountBright Plus Absolute Counting Beads | ThermoFisher | C36995 | |
| Dexamethasone | Millipore Sigma | D4902 | |
| Dispase | Gibco | 17105041 | |
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) (1X) | Gibco | 11995-065 | (+)4.5 g/L D-Glucose (+)L-Glutamine (+)110 mg/L Sodium Pyruvate |
| EDTA | FisherScientific | S311 | |
| FACSClean Solution | Beckton Dickenson | 340345 | |
| FACSDiva Software | Beckton Dickenson | — | |
| FACSRinse Solution | Beckton Dickenson | 340346 | |
| Fetal Bovine Serum | Sigma | F1051 | |
| Flow Cytometry Sheath Fluid | Beckton Dickenson | 342003 | |
| FlowJo Software | Beckton Dickenson | — | |
| Fluorescent Mounting Medium | Dako | S302380-2 | |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 555 secondary antibody | Invitrogen | A21424 | |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 488 secondary antibody | Invitrogen | A11008 | |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 555 secondary antibody | Invitrogen | A21429 | |
| Goat Serum | Gibco | 16210-064 | |
| Ham's F10 Media | ThermoFisher | 11550043 | (+) Phenol Red (+) L-Glutamine (-) HEPES |
| Hank’s Balanced Salt Solution (HBSS) (1X) | Multicell | 311-513-CL | |
| Heat Inactivated Horse Serum | Gibco | 26050-088 | |
| Hemocytometer | Reichert | N/A | |
| HEPES, minimum 99.5% titration | Sigma | H3375 | |
| Horse Serum | ThermoFisher | 16050130 | |
| Human Transforming Growth Factor β1 (hTGF-β1) | Cell Signaling | 8915LF | |
| Humulin R | Lilly | HI0210 | |
| IBMX | Millipore Sigma | I5879 | Also known as 3-Isobutyl-1-methylxanthine |
| Isopropanol | Sigma | I9516 | Also known as 2-propanol |
| Lewis Rat, Female | Charles River Kingston | 004 (Strain Code) | 200-250 grams used |
| LSRFortessa X-20 Benchtop Cytometer | Beckton Dickenson | — | |
| Microcentrifuge | Eppendorf | EP-5417R | |
| MoFlo XDP Cell Sorter | Beckman Coulter | — | |
| Mouse Anti-CD31::FITC Antibody | Abcam | ab33858 | Clone TLD-3A12 |
| Mouse Anti-CD45::FITC Antibody | Biolegend | 202205 | Clone OX-1 |
| Mouse Anti-CD106::PE Antibody | Biolegend | 200403 | Also known as VCAM-1 |
| Mouse Anti-MHC Antibody | Developmental Studies Hybridoma Bank (DSHB) | N/A | Also known as MF20 |
| Mouse Anti-Pax7 Antibody | Developmental Studies Hybridoma Bank (DSHB) | N/A | |
| Neutral Buffered Formalin, 10 % | Sigma | HT501128 | |
| Oil Red O | Millipore Sigma | O0625 | |
| PE-Cy7 Conjugation Kit | Abcam | ab102903 | |
| Penicillin-Streptomycin | Sigma | P4333 | |
| Phosphate Buffered Saline, pH 7.4 (1X) | Gibco | 10010-023 | (-)Calcium Chloride (-)Magnesium Chloride |
| Potassium Bicarbonate, Reagent Grade | Bioshop | PBC401.250 | |
| Rabbit Anti-Fibroblast Specific Protein 1 (FSP-1) Antibody | Invitrogen | MA5-32347 | FSP-1 also known as S100A4 |
| Rabbit Anti-Integrin-a7 Antibody | Abcam | ab203254 | |
| Rabbit Anti-Laminin Antibody | Sigma | L9393 | |
| Rabbit Anti-Perilipin-1 Antibody | Abcam | ab3526 | |
| Rabbit Anti-Sca-1 Antibody | Millipore Sigma | AB4336 | |
| Rabbit Recombinant Anti-Collagen Type I Antibody | Abcam | ab260043 | Also known as Col1a1 |
| Rabbit Recombinant Anti-PDGFR Alpha Antibody | Abcam | ab203491 | |
| Recombinant Human FGF-basic | Gibco | PHG0266 | |
| Sodium Azide | Sigma | S2002 | |
| Triton-X-100 | Fisher Scientific | BP151 | |
| Troglitazone | Millipore Sigma | T2573 | |
| Tween-20 | Bioshop | TWN510 |
Riferimenti
- Joe, A. W. B., et al. Muscle injury activates resident fibro/adipogenic progenitors that facilitate myogenesis. Nature Cell Biology. 12, 153-163 (2010).
- Wosczyna, M. N., Biswas, A. A., Cogswell, C. A., Goldhamer, D. J. Multipotent progenitors resident in the skeletal muscle interstitium exhibit robust BMP-dependent osteogenic activity and mediate heterotopic ossification. Journal of Bone and Mineral Research. 27 (5), 1004-1017 (2012).
- Uezumi, A., Ikemoto-Uezumi, M., Tsuchida, K. Roles of nonmyogenic mesenchymal progenitors in pathogenesis and regeneration of skeletal muscle. Frontiers in Physiology. 5, 1-11 (2014).
- Biswas, A. A., Goldhamer, D. J. FACS fractionation and differentiation of skeletal-muscle resident multipotent Tie2+ progenitors. Methods in Molecular Biology. 1460, 255-267 (2016).
- Biferali, B., Proietti, D., Mozzetta, C., Madaro, L. Fibro-adipogenic progenitors cross-talk in skeletal muscle: The social network. Frontiers in Physiology. 10, 1-10 (2019).
- Wosczyna, M. N., Rando, T. A. A muscle stem cell support group: Coordinated cellular responses in muscle regeneration. Developmental Cell. 46 (2), 135-143 (2018).
- Uezumi, A., Fukada, S. I., Yamamoto, N., Takeda, S., Tsuchida, K. Mesenchymal progenitors distinct from satellite cells contribute to ectopic fat cell formation in skeletal muscle. Nature Cell Biology. 12 (2), 143-152 (2010).
- Uezumi, A., et al. Fibrosis and adipogenesis originate from a common mesenchymal progenitor in skeletal muscle. Journal of Cell Science. 124 (21), 3654-3664 (2011).
- Lemos, D. R., et al. Nilotinib reduces muscle fibrosis in chronic muscle injury by promoting TNF-mediated apoptosis of fibro/adipogenic progenitors. Nature Medicine. 21 (7), 786-794 (2015).
- Malecova, B., et al. Dynamics of cellular states of fibro-adipogenic progenitors during myogenesis and muscular dystrophy. Nature Communications. 9 (1), (2018).
- Madaro, L., et al. Denervation-activated STAT3-IL-6 signalling in fibro-adipogenic progenitors promotes myofibres atrophy and fibrosis. Nature Cell Biology. 20 (8), 917-927 (2018).
- Heredia, J. E., et al. Type 2 innate signals stimulate fibro/adipogenic progenitors to facilitate muscle regeneration. Cell. 153 (2), 376-388 (2013).
- Fiore, D., et al. Pharmacological blockage of fibro/adipogenic progenitor expansion and suppression of regenerative fibrogenesis is associated with impaired skeletal muscle regeneration. Stem Cell Research. 17 (1), 161-169 (2016).
- Kang, X., et al. Interleukin-15 facilitates muscle regeneration through modulation of fibro/adipogenic progenitors. Cell Communication and Signaling. 16 (1), 1-11 (2018).
- Lovering, R. M., Roche, J. A., Goodall, M. H., Clark, B. B., Mcmillan, A. An in vivo rodent model of contraction-induced injury and non-invasive monitoring of recovery. Journal of Visualized Experiments. (51), e2782 (2011).
- Iyer, S. R., Valencia, A. P., Hernández-Ochoa, E. O., Lovering, R. M. In vivo assessment of muscle contractility in animal studies. Methods in Molecular Biology. 1460, 293-307 (2016).
- Mintz, E. L., Passipieri, J. A., Lovell, D. Y., Christ, G. J. Applications of in vivo functional testing of the rat tibialis anterior for evaluating tissue engineered skeletal muscle repair. Journal of Visualized Experiments. (116), e54487 (2016).
- Hakim, C. H., Wasala, N. B., Duan, D. Evaluation of muscle function of the extensor digitorum longus muscle ex vivo and tibialis anterior muscle in situ in mice. Journal of Visualized Experiments. (72), e50183 (2013).
- Moorwood, C., Liu, M., Tian, Z., Barton, E. R. Isometric and eccentric force generation assessment of skeletal muscles isolated from murine models of muscular dystrophies. Journal of Visualized Experiments. (71), e50036 (2013).
- Gerlinger-Romero, F., et al. Non-invasive assessment of dorsiflexor muscle function in mice. Journal of Visualized Experiments. (143), e58696 (2019).
- Iohom, G., et al. Long-term evaluation of motor function following intraneural injection of ropivacaine using walking track analysis in rats. British Journal of Anaesthesia. 94 (4), 524-529 (2005).
- Brown, C. J., et al. Self-evaluation of walking-track measurement using a sciatic function index. Microsurgery. 10 (3), 226-235 (1989).
- Bozkurt, A., et al. CatWalk gait analysis in assessment of functional recovery after sciatic nerve injury. Journal of Neuroscience Methods. 173 (1), 91-98 (2008).
- Deumens, R., Jaken, R. J. P., Marcus, M. A. E., Joosten, E. A. J. The CatWalk gait analysis in assessment of both dynamic and static gait changes after adult rat sciatic nerve resection. Journal of Neuroscience Methods. 164 (1), 120-130 (2007).
- McKinnon, K. M. Flow cytometry: An overview. Current Protocols in Immunology. 2018, 1-11 (2018).
- Jensen, A. R., et al. Neer Award 2018: Platelet-derived growth factor receptor α co-expression typifies a subset of platelet-derived growth factor receptor β-positive progenitor cells that contribute to fatty degeneration and fibrosis of the murine rotator cuff. Journal of Shoulder and Elbow Surgery. 27 (7), 1149-1161 (2018).
- Mosich, G. M., et al. Non-fibro-adipogenic pericytes from human embryonic stem cells attenuate degeneration of the chronically injured mouse muscle. JCI Insight. 4 (24), (2019).
- Lee, D., et al. HMGB2 is a novel adipogenic factor that regulates ectopic fat infiltration in skeletal muscles. Scientific Reports. 8 (1), 1-12 (2018).
- Low, M., Eisner, C., Rossi, F. Fibro/Adipogenic Progenitors (FAPs): Isolation by FACS and Culture. Muscle Stem Cells: Methods and Protocols. , 179-189 (2017).
- Giuliani, G., et al. SCA-1 micro-heterogeneity in the fate decision of dystrophic fibro/adipogenic progenitors. Cell Death and Disease. 12 (1), 1-24 (2021).
- Wosczyna, M. N., et al. Mesenchymal stromal cells are required for regeneration and homeostatic maintenance of skeletal muscle. Cell Reports. 27 (7), 2029-2035 (2019).
- Upadhyay, G. Emerging role of lymphocyte antigen-6 family of genes in cancer and immune cells. Frontiers in Immunology. 10, 819 (2019).
- Boscolo Sesillo, F., Wong, M., Cortez, A., Alperin, M. Isolation of muscle stem cells from rat skeletal muscles. Stem Cell Research. 43, 101684 (2020).
- Ciaramitaro, P., et al. Traumatic peripheral nerve injuries: Epidemiological findings, neuropathic pain and quality of life in 158 patients. Journal of the Peripheral Nervous System. 15 (2), 120-127 (2010).
- Noble, J., Munro, C. A., Prasad, V. S. S. V., Midha, R. Analysis of upper and lower extremity peripheral nerve injuries in a population of patients with multiple injuries. Journal of Trauma and Acute Care Surgery. 45 (1), (1998).
- Malik, S. Traumatic peripheral neuropraxias in neonates: A case series. Journal of Clinical and Diagnostic Research. 8 (10), 10-12 (2014).
- Smith, B. W., Daunter, A. K., Yang, L. J. S., Wilson, T. J. An update on the management of neonatal brachial plexus palsy-replacing old paradigms a review. JAMA Pediatrics. 172 (6), 585-591 (2018).
- Rebolledo, D. L., et al. Denervation-induced skeletal muscle fibrosis is mediated by CTGF/CCN2 independently of TGF-β. Matrix Biology. 82, 20-37 (2019).
- Walls, P. L. L., McRae, O., Natarajan, V., Johnson, C., Antoniou, C., Bird, J. C. Quantifying the potential for bursting bubbles to damage suspended cells. Scientific Reports. 7 (1), 1-9 (2017).
- Yuen, D. A., et al. Culture-modified bone marrow cells attenuate cardiac and renal injury in a chronic kidney disease rat model via a novel antifibrotic mechanism. PLOS One. 5 (3), 9543 (2010).
- Fukada, S. I. The roles of muscle stem cells in muscle injury, atrophy and hypertrophy. Journal of Biochemistry. 163 (5), 353-358 (2018).
- Itabe, H., Yamaguchi, T., Nimura, S., Sasabe, N. Perilipins: A diversity of intracellular lipid droplet proteins. Lipids in Health and Disease. 16 (1), 1-11 (2017).
- Chapman, M. A., Mukund, K., Subramaniam, S., Brenner, D., Lieber, R. L. Three distinct cell populations express extracellular matrix proteins and increase in number during skeletal muscle fibrosis. American Journal of Physiology – Cell Physiology. 312 (2), 131-143 (2016).
- Hillege, M., Galli Caro, R., Offringa, C., de Wit, G., Jaspers, R., Hoogaars, W. TGF-β regulates Collagen Type I expression in myoblasts and myotubes via transient Ctgf and Fgf-2 Expression. Cells. 9 (2), 375 (2020).
- Kafadar, K. A., Yi, L., Ahmad, Y., So, L., Rossi, F., Pavlath, G. K. Sca-1 expression is required for efficient remodeling of the extracellular matrix during skeletal muscle regeneration. Biologia dello sviluppo. 326 (1), 47-59 (2009).
- Batt, J. A. E., Bain, J. R. Tibial nerve transection – a standardized model for denervation-induced skeletal muscle atrophy in mice. Journal of Visualized Experiments. (81), e50657 (2013).
- Carlson, B. M. The biology of long-term denervated skeletal muscle. European Journal of Translational Myology. 24 (1), (2014).
- Kennedy, E., et al. Embryonic rat vascular smooth muscle cells revisited – A model for neonatal, neointimal SMC or differentiated vascular stem cells. Vascular Cell. 6 (1), 1-13 (2014).
- Pannérec, A., Formicola, L., Besson, V., Marazzi, G., Sassoon, D. A. Defining skeletal muscle resident progenitors and their cell fate potentials. Development (Cambridge). 140 (14), 2879-2891 (2013).
