Doğal Bisiklet Fareleri Kullanarak Endometriozis Bir Syngeneic Murine Modeli
Summary
Endometriozisin birçok kemirgen modeli teknik karmaşıklık, tekrarlanabilirlik ve / veya bağışıklığı baskılanmış hayvanlara veya özel muhabir farelere ihtiyaç duyma ile sınırlıdır. Bağımsız olarak doğrulanabilir, objektif puanlama sistemine sahip ve ovaerektomi veya sağkalım ameliyatı için gereklilik olmayan herhangi bir deneysel fare kullanarak basitleştirilmiş bir lezyon indüksiyon sistemi sunuyoruz.
Abstract
Endometriozis pelvik ağrı ve kısırlığın önde gelen bir nedenidir. Ekstrauterin yerlerde endometriyal dokunun varlığı ile tanımlanır. Endometriozis için yeni tedavilerin ve tanı araçlarının geliştirilmesi, kısmen hastalığın incelenmesindeki zorluklar nedeniyle sınırlı olmuştur. Primatların dışında, az sayıda memeli adet gösterir ve hiçbiri spontan endometriozis geliştirmez. Kemirgen modelleri popülerdir, ancak endometriozis yapay indüksiyonu gerektirir, birçoğu immün sistemi baskılanmış fareler veya cerrahi olarak indüklenen hastalık kullanır. Son zamanlarda intraperitoneal enjeksiyon içeren modellere daha fazla dikkat edilmiştir. Mevcut endometriozis modellerinin çeşitli özelliklerini öznel derecelendirme yerine mikroskobik niceleme dayanan yeni, basitleştirilmiş bir sisteme entegre eden bir endometriozis modeli sunuyoruz. Bu modelde donör farelerin hormonal stimülasyonu, intraperitoneal enjeksiyon, sistematik abdominal etüt ve doku hasadı ve nekropsi sonrası her an yapılabilen ve doğrulanabilen histolojik niceleme gerçekleştiriyoruz. Bu model minimum kaynak ve eğitim gerektirir; murine sağkalım cerrahisinde veya brüt endometriotik lezyonların tanımlanmasında laboratuvar teknisyenleri tarafından uzmanlık gerektirmez; bağışıklık sistemi baskılanmış, immün yetecekli ve/veya mutant farelerde kullanılabilir; ve güvenilir bir şekilde insan endometriotik hastalığı ile histolojik olarak tutarlı endometriotik lezyonlar oluşturur.
Introduction
Endometriozis, kadınlar üzerinde önemli finansal ve sağlık yükleri olan kadın üreme sisteminin esrarengiz bir hastalığıdır1,2. Endometriozis etiyolojisi tam olarak anlaşılamamıştır ve koelomik metaplazi, embriyonik Müllerian restleri, kemik iliği türevli progenitör hücrelerin işe alınması ve retrograd adet3dahil olmak üzere birden fazla açıklama önerilmiştir. Önerilen bu mekanizmaların birden fazla yönü söz konusu olsa da ve hastalığın tüm formlarını tek bir açıklama açıklayamasa da, endometriozis patogenezinin önde gelen modeli retrograd adettir. Retrograd adet, adet atıklarının fallop tüplerinden ve periton boşluğuna geçişidir; adet gören kadınların% 90’ının düzenli olarak retrograd adet gördüğü tahmin edilmektedir4,5. Retrograd adet görmenin bu yaygın fenomeni göz önüne alındığında, endometriozisin neden sadece kadınların bir alt kümesinde geliştiği belirsizdir5. Bu hastalığın etiyolojisini daha iyi anlamak için doğrudan insan çalışmaları mümkün değildir ve hayvan çalışmaları garanti edilir.
Endometriozis hem tedavi etmek hem de çalışmak için bir zorluktur. Hastalığın prevalansı bilinmemekle birlikte %101olarak tahmin edilmektedir. Bazı ileri endometriozis türleri noninvaziv görüntüleme ile doğru bir şekilde tanımlanabilirken, kesin tanı ancak cerrahi olarak elde edilen biyopsi örneklerinin histopatolojik analizi ile elde edilir; görsel olarak hastalıklı gibi görünen lezyonlar, aslında fibrozis veya diğer nedenlerden yara izi olabilir6. Hastalığın şiddeti ve kapsamı semptomatoloji ile ilişkili değildir7.
Endometriozis lezyonları, mikroçevrinde karmaşık şekillerde etkileşime giren heterojen hücre tiplerinden ve popülasyonlardan oluşur, bu nedenle hücresel modellerin yararlılığını sınırlar8,9. In vivo modelleri vardır, ancak bunlar doğal zorluklara ve sınırlamalara sahiptir10,11,12. Primat modelleri idealdir, ancak genellikle uygulanabilir değildir13,14,15. Birkaç primat olmayan memeli adet gören ve kendiliğinden endometriozis geliştiren16. Kemirgen endometriozis modelleri vardır, ancak her birinin sınırlamaları vardır17. Bu modellerin çoğu, donör alıcı duvarına veya bağırsayasına endometriyal doku dikmek veya implante etmek için sağkalım ameliyatı gerektirir, teknik karmaşıklık, anestezi ihtiyacı ve ameliyatın kendisinden şaşırtıcı bağışıklık faktörleri ekler18,19,20. Ek olarak, birçok model yumurtalık ve östrojen takviyesi gerektirir; lezyon verimini artırırken, bu zaman, masraf ve ek sağkalım cerrahisi ekler. Intraperitoneal (IP) enjeksiyon modelleri anestezi veya sağkalım ameliyatı gerektirmez ve bu modeller mantıksal olarak retrograd adeti dikiş modellerinden daha iyi simüle eder21,22,23. Bununla birlikte, çoğu IP modeli, enjeksiyondan sonra endometriyal parçaların rastgele dağılımı ve dolayısıyla lezyon tanımlama ve ölçümünde daha fazla önyargı nedeniyle lezyon konumunda daha fazla değişkenliğe maruz kalmaktadır.
Burada, mevcut endometriozis modellerinin çeşitli özelliklerini öznel derecelendirme yerine mikroskobik niceleme dayanan yeni, basitleştirilmiş ve verimli bir sisteme entegre eden bir endometriozis murine modeli sunuyoruz.
Protocol
Representative Results
Discussion
Çalışmamız, endometriozisin farelerde ovaerektomi ve/veya sağkalım cerrahisi kullanılmadan güvenilir bir şekilde indüklenebileceğini ve ektopik endometriyal lezyonların karın ve histolojik analizlerin standart bir anketi kullanılarak tespit edilip nicelleştirilebileceğini göstermektedir.
Endometriozis ile ilgili birçok murine çalışması, donör endometriyumun bağırsak, karın d…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Reizes laboratuvarı üyelerine makalenin hazırlanması sırasındaki eleştirel incelemeleri ve içgörüleri için ve Lerner Araştırma Enstitüsü’ndeki Görüntüleme ve Histoloji çekirdeklerine veri toplama ve veri analizi konusundaki yardımları için teşekkür ederiz. Bu çalışma, Cleveland Clinic’teki Araştırma Programı Komitesi aracılığıyla bir iç hibe fonu ve Üreme Araştırmaları Derneği ve Bayer aracılığıyla harici bir hibe ile desteklendi. Reizes Laboratuvarı’ndaki araştırmalar ayrıca VeloSano Bike to Cure, Jinekolojik Kanser araştırma mükemmelliği merkezi ve Laura J. Fogarty Uterin Kanser Araştırmaları Için Bağışlanan Sandalye aracılığıyla finanse edilir. Cleveland Clinic, Şekil 1 ve Şekil 2için telif hakkı iznine sahiptir.
Materials
| Supplies for injecting PMSG into donor mouse | |||
| 1 mL Tuberculin syringe with 27G needle | Fisher Scientific | 14-826-87 | |
| Pregnant mare serum gonadotropin | Sigma-Aldrich | 9002-70-4 | |
| Supplies for necropsy of donor mouse and tissue processing | |||
| 6” serrated forceps, curved tip | Electron Microscopy Sciences | 72993-6C | |
| 70% ethanol solution | Pharmco | 33000HPLCCS4L | 70% solution dilute ethyl acetate 200 proof |
| Analytical balance | Mettler Toledo | ME54TE | |
| Carbon dioxide | TriGas Supplier | ||
| Dissecting tray | Fisher Scientific | S14000 | |
| No. 10 disposable scalpel | Fisher Scientific | NC9999403 | |
| Scissors, curved | Electron Microscopy Sciences | 72941 | |
| Scissors, straight | Electron Microscopy Sciences | 72940 | |
| Stereo microscope | Leica Microsystems | Leica SE 4 | For tissue dissection |
| Sterile phosphate buffered saline (PBS) | Institutional core facility supplies | ||
| Surgical instrument sterilization tray | Electron Microscopy Sciences | 66112-02 | |
| Tissue culture dishes | Fisher Scientific | 08-772E | |
| Weighing dishes | Fisher Scientific | 02-202-103 | |
| Supplies for injecting into recipient mouse | |||
| 1 cc syringe | BD Biosciences | 301025 | |
| 18 G needle | Fisher Scientific | 148265d | |
| 200 uL pipette tip | Fisher Scientific | 02-707-422 | |
| Double distilled water | Institutional core facility supplies | ||
| Latex bulb | Fisher Scientific | 03-448-21 | |
| Micro cover glass slip | VWR | 48366-067 | |
| Microscope slide | Fisher Scientific | 12-544-7 | |
| Standard light microscope | Leica Microsystems | DM IL | For evaluating vaginal cytology smears |
| Supplies for harvesting tissue from recipient mouse | |||
| 10% Buffered formalin | Fisher Scientific | SF100-4 | |
| Biopsy foam pads | Fisher Scientific | 22-038-222 | |
| Precision Digital Calipers | Electron Microscopy Sciences | 62065-40 | |
| Processing/embedding cassettes | Fisher Scientific | 22-272416 |
Riferimenti
- Zondervan, K. T., Becker, C. M., Missmer, S. A. Endometriosis. England Journal of Medicine. 382 (13), 1244-1256 (2020).
- Schwartz, K., Llarena, N. C., Rehmer, J. M., Richards, E. G., Falcone, T. The role of pharmacotherapy in the treatment of endometriosis across the lifespan. Expert Opinion on Pharmacotherapy. 21 (8), 893-903 (2020).
- Giudice, L. C. Clinical practice. Endometriosis. New England Journal of Medicine. 362 (25), 2389-2398 (2010).
- D’Hooghe, T. M., Debrock, S. Endometriosis, retrograde menstruation and peritoneal inflammation in women and in baboons. Human Reproduction Update. 8 (1), 84-88 (2002).
- Ahn, S. H., et al. Pathophysiology and immune dysfunction in endometriosis. BioMed Research International. 2015, (2015).
- Falcone, T., Flyckt, R. Clinical management of endometriosis. Obstetrics and Gynecology. 131 (3), 557-571 (2018).
- Vercellini, P., et al. Association between endometriosis stage, lesion type, patient characteristics and severity of pelvic pain symptoms: a multivariate analysis of over 1000 patients. Human Reproduction. 22 (1), 266-271 (2007).
- Bulun, S. E., et al. Endometriosis. Endocrine Reviews. 40 (4), 1048-1079 (2019).
- Brueggmann, D., et al. Novel three-dimensional in vitro models of ovarian endometriosis. Journal of Ovarian Research. 7, 17 (2014).
- Dodds, K. N., Beckett, E. A. H., Evans, S. F., Hutchinson, M. R. Lesion development is modulated by the natural estrous cycle and mouse strain in a minimally invasive model of endometriosis. Biology of Reproduction. 97 (6), 810-821 (2017).
- Martinez, J., Bisbal, V., Marin, N., Cano, A., Gómez, R. Noninvasive monitoring of lesion size in a heterologous mouse model of endometriosis. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (144), (2019).
- Pelch, K. E., Sharpe-Timms, K. L., Nagel, S. C. Mouse model of surgically-induced endometriosis by auto-transplantation of uterine tissue. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (59), e3396 (2012).
- Nishimoto-Kakiuchi, A., et al. Spontaneous endometriosis in cynomolgus monkeys as a clinically relevant experimental model. Human Reproduction. 33 (7), 1228-1236 (2018).
- Nair, H. B., et al. An efficient model of human endometriosis by induced unopposed estrogenicity in baboons. Oncotarget. 7 (10), 10857-10869 (2016).
- Laganà, A. S., et al. Translational animal models for endometriosis research: a long and windy road. Annals of Translational Medicine. 6 (22), 431 (2018).
- Bellofiore, N., et al. First evidence of a menstruating rodent: the spiny mouse (Acomys cahirinus). Amercian Journal of Obstetrics and Gynecology. 216 (1), 1-11 (2017).
- Bruner-Tran, K. L., Mokshagundam, S., Herington, J. L., Ding, T., Osteen, K. G. Rodent models of experimental endometriosis: identifying mechanisms of disease and therapeutic targets. Current Women’s Health Reviews. 14 (2), 173-188 (2018).
- Bilotas, M. A., et al. Interplay between endometriosis and pregnancy in a mouse model. PloS One. 10 (4), 0124900 (2015).
- Peterse, D., et al. Of mice and women: a laparoscopic mouse model for endometriosis. Journal of Minimally Invasive Gynecology. 25 (4), 578-579 (2018).
- Richards, E. G., et al. KLF11 is an epigenetic mediator of DRD2/dopaminergic signaling in endometriosis. Reproductive Sciences. 224 (8), 1129-1138 (2017).
- Jones, R. L., Lang, S. A., Kendziorski, J. A., Greene, A. D., Burns, K. A. Use of a Mouse Model of Experimentally Induced Endometriosis to Evaluate and Compare the Effects of Bisphenol A and Bisphenol AF Exposure. Environmental Health Perspectives. 126 (12), 127004 (2018).
- Greaves, E., et al. A novel mouse model of endometriosis mimics human phenotype and reveals insights into the inflammatory contribution of shed endometrium. The American Journal of Pathology. 184 (7), 1930-1939 (2014).
- Nothnick, W. B., Graham, A., Holbert, J., Weiss, M. J. miR-451 deficiency is associated with altered endometrial fibrinogen alpha chain expression and reduced endometriotic implant establishment in an experimental mouse model. PloS One. 9 (6), 100336 (2014).
