Здесь мы представляем протокол, который демонстрирует технику и необходимые элементы управления для лазерной доплеровой визуализации перфузии для измерения кровотока в задней части мыши.
Восстановление кровотока является критическим показателем исхода после экспериментальной ишемии хиндлимбой или ишемии-реперфузии. Лазерная доплеровая перфузия (LDPI) является распространенным, неинвазивным, повторяемым методом оценки восстановления кровотока. Техника вычисляет общий кровоток в отобранной ткани из доплеровского сдвига частоты, вызванного лазерными попаданиями движущихся красных кровяных телец. Измерения выражаются в произвольных перфузионых единицах, поэтому контралатеральные невмешательные на ногу, как правило, используются для управления измерениями. Глубина измерения находится в диапазоне 0,3-1 мм; для ишемии хиндлимбой, это означает, что дермальная перфузия оценивается. Дермальная перфузия зависит от нескольких факторов – самое главное температуры кожи и обезболивающее средство, которое должно быть тщательно контролируется, чтобы привести к надежным показаниям. Кроме того, пигментация волос и кожи может изменить способность лазера либо достичь или проникнуть в дерму. Эта статья демонстрирует технику LDPI в задней части мыши.
Язва кожи с недостаточным заживлением ран является основной причиной ампутаций у пациентов1. Адекватное заживление ран требует более высоких уровней артериальной перфузии, чем это необходимо для поддержания нетронутой кожи, которая скомпрометирована у пациентовс периферической артериальной болезнью 2,3,4. Несколько других ревматологических состояний и диабета также может привести к нарушенной и неадекватной микроциркуляции кожи, чтобызалечить раны 5,6. Многие больные сахарным диабетом имеют сопутствующие периферические артериальные заболевания, что ставит их на особенно высокий риск ампутации. Лазерная перфузионная визуализация Доплера (LDPI) используется в клинических ситуациях для оценки микроциркуляции кожи, а также в исследовательских ситуациях для оценки кровотока и восстановления кровотока после экспериментальной ишемии хиндлимбо, ишемии-реперфузии и микрохирургическихзакрылков 7.
Система LDPI проецирует малоэнездкую лазерный луч, который отклоняется сканирующее зеркало для перемещения по области, представляющие интерес. Это отличается от лазерной доплеровского потокаметрии, которая обеспечивает измерение перфузии для небольшой площади ткани в непосредственном контакте с зондомflowmetry 8. Когда лазерный луч взаимодействует с двигающейся кровью в микроваскулатуре, он подвергается сдвигу частоты Доплера, который фотодехтируется сканером и преобразуется в произвольные единицы перфузии. Поскольку LDPI является световой техникой, он ограничен с точки зрения глубины проникновения до 0,3-1 мм, а это означает, что по большей части дермальная перфузия оценивается7. Кожный поток может быть изменен температурой кожи и симпатической нервной системы, которые могут быть затронуты различными анестезией9. Измерения от оптического лазера также повлияны на окружающими условиями освещения, пигментацией кожи, и могут быть прегражены overlying мехом иливолосами 7.
LDPI является наиболее часто используемым методом исследования для мониторинга восстановления перфузии после ишемии, потому что он неинвазивный, не требует контрастного введения, и имеет быстрое время сканирования, позволяющее сбор данных о нескольких животных. Это делает его идеальным, чтобы помочь определить, являются ли методы лечения, направленные на терапевтический артериогенез или ангиогенез являются эффективными в малых животных моделей. Восстановление кровотока после ишемии хиндлимбой, измеряемой LDPI, хорошо коррелирует с развитием сопутствующих артерий при оценке другими средствами, такими как литье микрофила или микро-КТ10,11. Цель этого протокола состоит в том, чтобы продемонстрировать оценку перфузии хиндлимба с помощью LDPI.
Последовательный метод имеет решающее значение для получения надежных результатов с помощью LDPI. Один и тот же анестетик, настройки температуры, положение мыши и область интереса должны использоваться на протяжении всего курса времени. Различные анестетические средства приведут к бол…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была проведена с использованием средств и ресурсов в В. А. Пьюджет-Саунд медицинского центра. Эта работа является работой автора и не обязательно отражает позицию или политику Департамента по делам ветеранов или правительства Соединенных Штатов. Д-р Тан в настоящее время финансируется через В. А. (Merit 5 I01 BX004975-02).
Black nonreflective material | Fabric store, black neoprene recommended by company | ||
F/air cannister | A.M. Bickford Inc | 80120 | |
Homeothermic blanket with rigid metal probe | Harvard Apparatus | Also comes with flexible probe, but this is less durable | |
Isoflurane Anesthesia machine | Drager | Multiple manufacturers | |
Isoflurane induction chamber | VetEquip | 941444 | 2 L chamber |
Moor laser Doppler perfusion imager | Moor Instruments | MoorLDI2-IR | Higher resolution imager (MoorLDI2-HIR) |
Mouse Anesthesia nose cone | Multiple manufacturers | ||
Nair | Nair | ||
Oxygen tank | Multiple manufacturers | ||
Surgilube | Multiple distributors |