JoVE Journal > Cancer Research
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Risultati
Discussion
Divulgazioni
Acknowledgements
Materials
Riferimenti
Traduzione automatica
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Ricerca sul cancro

הזרקת וריד פורטל של אורגנואידים לסרטן המעי הגס לחקר סטרומה גרורות בכבד

Published: September 03, 2021
doi:
10.3791/62630
, , , , , , , , , , , , , , , ,
1Adelaide Medical School,University of Adelaide, 2South Australian Health and Medical Research Institute (SAHMRI), 3Department of Pathology,Nagoya University Graduate School of Medicine, 4Division of Molecular Pathology, Center for Neurological Disease and Cancer,Nagoya University Graduate School of Medicine, 5Department of Gastroenterology, Graduate School of Medicine,The University of Tokyo, 6Translational and Clinical Research Institute,Newcastle University, 7International Center for Cell and Gene Therapy,Fujita Health University

Summary

הזרקת וריד פורטל של אורגנואידים מסרטן המעי הגס (CRC) יוצרת גרורות כבד עשירות בסטרומה. מודל עכבר זה של גרורות כבד CRC מייצג כלי שימושי לחקר אינטראקציות בין גידול לסטרומה ולפיתוח טיפולים חדשניים המכוונים לסטרומה כגון טיפולים גנטיים בתיווך וירוסים הקשורים לאדנו.

Abstract

גרורות בכבד של סרטן המעי הגס (CRC) הן הגורם המוביל למוות הקשור לסרטן. פיברובלסטים הקשורים לסרטן (CAFs), מרכיב מרכזי במיקרו-סביבה של הגידול, ממלאים תפקיד מכריע בהתקדמות CRC גרורתית ומנבאים פרוגנוזה לקויה של המטופלים. עם זאת, חסרים מודלים משביעי רצון של עכברים כדי לחקור את ההצלבה בין תאים סרטניים גרורתיים לבין CAFs. כאן אנו מציגים שיטה לחקור כיצד התקדמות גרורות בכבד מווסתת על ידי הנישה הגרורתית וייתכן שניתן לרסן אותה על ידי טיפול מכוון סטרומה. הזרקת ורידים פורטלית של אורגנואידים CRC יצרה תגובה דסמופלסטית, אשר שחזרה בנאמנות את ההיסטולוגיה העשירה בפיברובלסטים של גרורות כבד CRC אנושיות. מודל זה היה ספציפי לרקמות עם עומס גידול גבוה יותר בכבד בהשוואה למודל הזרקה תוך-טחולית, מה שמפשט את ניתוחי ההישרדות של העכברים. על ידי הזרקת אורגנואידים של גידולים המבטאים לוציפראז, ניתן היה לנטר קינטיקה של גדילת הגידול על ידי הדמיית in vivo . יתר על כן, מודל פרה-קליני זה מספק פלטפורמה שימושית להערכת היעילות של טיפולים המכוונים למזנכים של הגידול. אנו מתארים שיטות לבחון אם העברה בתיווך נגיף הקשור לנגיף של גן סטרומלי מעכב גידול להפטוציטים יכולה לשפץ את המיקרו-סביבה של הגידול ולשפר את הישרדות העכברים. גישה זו מאפשרת פיתוח והערכה של אסטרטגיות טיפוליות חדשניות לעיכוב גרורות בכבד של CRC.

Introduction

סרטן המעי הגס (CRC) הוא הגורם העיקרי לתמותה מסרטן ברחבי העולם1. יותר ממחצית מחולי ה-CRC מפתחים גרורות בכבד המתרחשות באמצעות הפצת וריד הפורטל1. נכון לעכשיו, אין טיפולים יעילים שיכולים לרפא גרורות מתקדמות בכבד, ורוב החולים נכנעים למחלה גרורתית.

הנישה הגרורתית או המיקרו-סביבה של הגידול ממלאת תפקיד מפתח בהשתקה ובצמיחה של תאי CRC מופצים2. פיברובלסטים הקשורים לסרטן (CAFs), מרכיב בולט במיקרו-סביבה של הגידול, מקדמים או מרסנים את התקדמות הסרטן באמצעות הפרשת גורמי גדילה, שיפוץ המטריצה החוץ-תאית (ECM) וויסות נופי מערכת החיסון והאנגיוגנזה 3,4,5. CAFs גם מעניקים עמידות לכימותרפיה ולאימונותרפיות3. יתר על כן, CAFs מווסתים את ההתחלה וההתקדמות של גרורות בכבד CRC ומנבאים פרוגנוזה בחולים עם CRC 3,6,7,8. לפיכך, גורמים הקשורים ל- CAF יכולים להיות מנוצלים לפיתוח אסטרטגיות טיפוליות לעיכוב גרורות בכבד CRC. עם זאת, היעדר מודלים משביעי רצון של עכברים לחקר סטרומה של הגידול הגרורתי היווה מכשול מרכזי לפיתוח טיפולים ממוקדי סטרומה.

נכון לעכשיו, מודלים של בעלי חיים לחקר גרורות בכבד CRC כוללים מודלים ראשוניים של CRC המפתחים באופן ספונטני גרורות בכבד ומודלים של השתלת תאים סרטניים לתוך הכבד. מודלים ראשוניים של עכברי CRC, כגון מודלים של עכברים מהונדסים גנטית והזרקה מעי גסה של תאים סרטניים, מראים רק לעתים רחוקות גרורות לכבד 9,10,11,12. יתר על כן, גם אם נצפתה גרורתה בכבד, מודלים אלה מראים חביון ארוך מהאינדוקציה של הגידול הראשוני ועד גרורות, ועלולים למות מנטל הגידול הראשוני12. כדי ליצור ביעילות גרורות בכבד CRC, תאי CRC בתרבית מושתלים בכבד באמצעות שלוש גישות הזרקה: הזרקה תוך-הטחולית, הזרקה תוך-פרנכימית ישירה לתוך הכבד והזרקת וריד פורטלי. תאים סרטניים שהוזרקו באופן תוך-ספלני התפשטו לווריד הטחול, לווריד הפורטלי, ובסופו של דבר לכבד13,14. עם זאת, הזריקה התוך-טחולית מניבה יחס נטילת גידול נמוך יותר בהשוואה למודלים אחרים של השתלה15,16. עם הזרקה תוך-טחולית, הסרה כירורגית של הטחול מבוצעת כדי למנוע צמיחת סרטן בטחול, מה שעלול לפגוע בהבשלת תאי מערכת החיסון17. יתר על כן, הזרקה תוך-טחולית יכולה גם לגרום לצמיחה לא מכוונת של הגידול בטחול ובחלל הבטן18, מה שמסבך את ניתוחי הגרורות בכבד. הזרקה תוך-פרנכימלית ישירה לתוך הכבד גורמת ביעילות לגרורות בכבד 16,19,20. עם זאת, גישה זו אינה משחזרת באופן מלא שלב ביולוגי של גרורות בכבד המתרחש באופן טבעי באמצעות הפצת ורידים בפורטל. באמצעות הזרקה ישירה לתוך הכבד, כניסה של תאים סרטניים לתוך לא פורטל, אבל מחזור הדם המערכתי יכול גם לגרום למספר גרורות ריאה גדולות16. למרות שרוב החולים עם גרורות בכבד CRC מראים מספר גושים של גידולים בכבד21, הזרקה ישירה לאונת כבד ספציפית מייצרת מסת גידול אחת19,20. הזרקת וריד פורטלי או הזרקת ורידים מזנטריים, למרות שהיא מאתגרת מבחינה טכנית, מאפשרת העברה יעילה של תאי גידול לתוך הכבד באופן שמשחזר את דפוסי הגדילה שנראו בחולים17. אסטרטגיה זו יכולה למזער את האפשרות של גרורות באתר משני ומאפשרת צמיחה מהירה של תאים סרטניים בכבד, תוך פישוט ניתוחי הישרדות של עכברים.

מבחינה היסטורית, קווי תאים של סרטן המעי הגס כגון עכבר MC-38, HT-29 אנושי ו- SW-620 שימשו ליצירת מודלים של עכברים של גרורות בכבד22,23. עם זאת, קווי תאים אלה של סרטן המעי הגס אינם גורמים לתגובה סטרומלית דסמופלסטית. תכולה סטרומלית נמוכה בגידולים מקשה על חקר התפקידים הביולוגיים של פיברובלסטים הקשורים לסרטן. ההתקדמות האחרונה באורגנואידים של CRC ובהשתלתם הציעה פלטפורמות שימושיות להערכת תפקידים חיוניים של הסטרומה בהתקדמות הסרטן24. השתלת כבד של אורגנואידים CRC מייצרת מיקרו-סביבה של גידול עשיר בפיברובלסטים וסיפקה תובנות חדשניות על מחקר סטרומלי 6,25. נכון לעכשיו, הזרקת ורידים פורטלית או מזנטרית של אורגנואידים הפכה לגישה סטנדרטית זהב ליצירת גרורות בכבד CRC 6,25,26,27,28. עם זאת, למיטב ידיעתנו, אף מאמר קודם לא תיאר שיטות מפורטות להזרקת ורידים פורטליים של גידולים במעי הגס. כאן, אנו מציגים מתודולוגיה לשימוש בהזרקת ורידים פורטלית של אורגנואידים מסוג CRC כדי לפתח טיפול חדשני בהכוונת סטרומה בתיווך נגיף אדנו (AAV).

הפטוציטים הם מרכיב חשוב של המיקרו-סביבה של הגידול הגרורתי בכבד וממלאים תפקיד קריטי בהתקדמות סרטן גרורתי29. בהשראת ההצלחה של גישות ריפוי גנטי AAV להשראת ביטוי חלבונים בהפטוציטים בחולים שאינם ניאופלסטיים30,31, חקרנו גישה דומה אך מכוונת לשנות את המיקרו-סביבה של גידולי הכבד ב-CRC25. ככזה, אנו מתארים כאן גם את הזרקת וריד הזנב של AAV8 כדי לגרום לביטוי של חלבונים אנטי-סרטניים כדי לשנות את המיקרו-סביבה של גידולי הכבד. הסרוטיפ AAV8, המיועד על ידי בחירה של חלבון קפסיד נגיפי במהלך ייצור הנגיף, מוביל ליעילות טרנסדוקציה גבוהה במיוחד של הפטוציטים (כלומר, ביטוי גנים ממוקד במיקרו-סביבה של גידולי הכבד)32. בעבר הראינו כי Islr (משפחת-על אימונוגלובולינים המכילה חזרה עשירה בלאוצין) הוא גן ספציפי ל-CAF המעורר איתות של חלבון מורפוגנטי בעצמות (BMP), מפחית את צמיחת הגידולים של CRC ומקדם התמיינות תאי גזע במעיים Lgr5+ 25. בדקנו אם ביטוי יתר בתיווך AAV8 של הגן הסטרומלי מרסן הסרטן, Islr, בהפטוציטים יכול להחליש את התקדמות גרורות הכבד על ידי ביצוע הזרקת ורידים פורטליים של גידולי CRC בעכברים שטופלו ב-AAV8-Islr.

במאמר זה, אנו מתארים לראשונה את הליך הזרקת ורידי הזנב של AAV טרופי כבד. לאחר מכן, אנו מתארים שיטה להכנת תאים סרטניים והזרקת ורידים פורטליים לעכברים שטופלו ב-AAV. לבסוף, אנו מציגים גישות לניטור התקדמות הגידול הגרורתי כדי להעריך את היעילות של טיפולים מכווני סטרומה.

Protocol

כל ההליכים בבעלי חיים במאמר זה נבדקו ואושרו על ידי הוועדה לאתיקה של בעלי חיים במכון הבריאות והמחקר הרפואי של דרום אוסטרליה (מספר אישור, SAM322). 1. הזרקת וריד זנב של וירוס הקשור לאדנו הערה: יש לטפל בנגיף הקשור ל-Adeno (AAV) כביו-האזרד תחת הנחיות בטיחות ביולוגית ברמה 1. אנא…

Representative Results

כדי לגרום לביטוי יתר בתיווך AAV של גן סטרומלי מרסן גידול, Islr 4,25,43,44, בהפטוציטים, הזרקנו תוך ורידי AAV8 המקודד על ידי איסלר. 1.0 x 1011 גנומים נגיפיים (vg) של AAV8-Islr, או כבקרה, AAV8-mRuby2, הוזרקו לווריד זנב העכבר הבוגר (…

Discussion

במחקר זה, הראינו כי הזרקת ורידים פורטליים של אורגנואידים CRC של עכברים יוצרת באופן משוחזר גרורות כבד עשירות בפיברובלסטים המחקות תכונות היסטולוגיות של גרורות כבד CRC אנושיות. יתר על כן, בשילוב עם טיפולים מכווני סטרומה כגון ריפוי גנטי בתיווך AAV8, מודל פרה-קליני זה משמש ככלי שימושי להערכת השפעות…

Divulgazioni

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

מחקר זה נתמך על ידי מענקים מהמועצה הלאומית לבריאות ומחקר רפואי (APP1156391 ל- D.L.W., S.L.W.) (APP1081852 עד D.L.W., APP1140236 עד S.L.W., APP1099283 עד D.L.W.,); מועצת הסרטן SA ניצחה את פרויקט הסרטן בשם התורמים שלה וממשלת המדינה של דרום אוסטרליה באמצעות מחלקת הבריאות (MCF0418 ל- S.L.W., D.L.W.); מענק סיוע למחקר מדעי (B) (20H03467 ל- M.T.) שהוזמן על ידי משרד החינוך, התרבות, הספורט, המדע והטכנולוגיה של יפן; AMED-CREST (הסוכנות היפנית למחקר ופיתוח רפואי, מחקר ליבה למדע וטכנולוגיה אבולוציונית (19gm0810007h0104 ו- 19gm1210008s0101 עד A.E.); הפרויקט לחקר הסרטן ואבולוציה טיפולית (P-CREATE) מ- AMED (19cm0106332h0002 עד A.E.); האגודה היפנית לקידום המדע בחו”ל תוכנית אתגר לחוקרים צעירים (ל- H.K.), מלגת קרן טקדה למדע (ל- H.K.), מלגת הדוקטורט הבינלאומית של גרייטון (ל- H.K.), מלגת קרן המחקר הרפואי של ליונס (ל- K.G.).

אנו מודים לד”ר לזק ליסובסקי במתקן להנדסת וקטורים וגנום (VGEF), מכון המחקר הרפואי לילדים (CMRI) (NSW, אוסטרליה) על ייצור וקטורים רקומביננטיים AAV.

Materials

10% Formalin Sigma HT501128
15 mL centrifuge tube Corning 430791
33-gauge needle TSK LDS-33013 For portal vein injection
4-0 vicryl suture ETHICON J494G
40-µm cell strainer Corning 431750
5 mL Syringe BD 302130 Used to apply saline to the intestine after portal vein injection
50 mL centrifuge tube Corning 430829
50 mL syringe TERUMO SS*50LE Luer lock syringe for perfusion fixation
70% Isopropyl alcohol wipe Briemar 5730
Anaesthesia machine Darvall 9356
αSMA antibody DAKO M0851 Clone 1A4. 1/500 dilution for immunohistochemistry
Buprenorphine TROY N/A ilium Temvet Injection, 300 µg/ml Buprenorphine
Cotton buds Johnson & Johnson N/A Johnson's pure cotton bud applicators. Need to be autoclaved before use.
D-luciferin Biosynth L-8220
Electric shaver Sold by multiple suppliers
Forceps Sold by multiple suppliers
Hamilton syringe HAMILTON 81020 For portal vein injection
Heat box (animal warming chamber) Datesand MK3
Heat lamp Sold by multiple suppliers
Hemostatic sponge Pfizer 09-0891-04-015 Gelfoam absorbable gelatin sponge, USP, 12-7 mm
India ink Talens 44727000
Injection syringe and needle BD 326769 For tail vein injection
Islr probe (RNAscope) ACD 450041
Isoflurane Henry Schein 988-3244
IVIS Spectrum In Vivo Imaging System Perkin Elmer 124262
Living Image Software Perkin Elmer 128113
Matrigel Corning 356231
MRI fibrosis tool N/A N/A https://github.com/MontpellierRessourcesImagerie/imagej_macros_and_scripts/wiki/MRI_Fibrosis_Tool
Phosphate-buffered saline (PBS) Sigma D8537
RNAscope kit ACD 322300
Rodent restrainer Sold by multiple suppliers
Rosa26-Cas9 mouse The Jackson Laboratory 024858
Saline Pfizer PHA19042010
Scissors Sold by multiple suppliers
Skin staplers Able Scientific AS59028 9 mm wound clips
Stapler applicator Able Scientific AS59026 9 mm wound clip applicator
Stapler remover Able Scientific AS59037 Wound clip remover
Surgical drape Multigate 29-220
Surgical gauze Sentry Medical GS001
Topical anesthesia cream EMLA N/A EMLA 5% cream, 25 mg/g lignocaine and 25 mg/g prilocaine
TrypLE Express Gibco 12605028 Recombinant cell-dissociation enzyme mix
Y-27632 Tocris 1254
DOWNLOAD MATERIALS LIST

Riferimenti

  1. Zarour, L. R., et al. Colorectal cancer liver metastasis: Evolving paradigms and future directions. Cell and Molecular Gastroenterology and Hepatology. 3 (2), 163-173 (2017).
  2. Peinado, H., et al. Pre-metastatic niches: organ-specific homes for metastases. Nature Reviews. Cancer. 17 (5), 302-317 (2017).
  3. Kobayashi, H., et al. Cancer-associated fibroblasts in gastrointestinal cancer. Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology. 16 (5), 282-295 (2019).
  4. Mizutani, Y., et al. Meflin-positive cancer-associated fibroblasts inhibit pancreatic carcinogenesis. Ricerca sul cancro. 79 (20), 5367-5381 (2019).
  5. Gieniec, K. A., Butler, L. M., Worthley, D. L., Woods, S. L. Cancer-associated fibroblasts-heroes or villains. British Journal of Cancer. 121 (4), 293-302 (2019).
  6. Tauriello, D. V. F., et al. TGFbeta drives immune evasion in genetically reconstituted colon cancer metastasis. Nature. 554 (7693), 538-543 (2018).
  7. Calon, A., et al. Dependency of colorectal cancer on a TGF-beta-driven program in stromal cells for metastasis initiation. Cancer Cell. 22 (5), 571-584 (2012).
  8. Shen, Y., et al. Reduction of liver metastasis stiffness improves response to cevacizumab in metastatic colorectal cancer. Cancer Cell. 37 (6), 800-817 (2020).
  9. Romano, G., Chagani, S., Kwong, L. N. The path to metastatic mouse models of colorectal cancer. Oncogene. 37 (19), 2481-2489 (2018).
  10. Roper, J., et al. In vivo genome editing and organoid transplantation models of colorectal cancer and metastasis. Nature Biotechnology. 35 (6), 569-576 (2017).
  11. Lannagan, T. R. M., et al. Genetic editing of colonic organoids provides a molecularly distinct and orthotopic preclinical model of serrated carcinogenesis. Gut. 68 (4), 684-692 (2019).
  12. Lannagan, T. R., Jackstadt, R., Leedham, S. J., Sansom, O. J. Advances in colon cancer research: in vitro and animal models. Current Opinion in Genetics & Development. 66, 50-56 (2021).
  13. Soares, K. C., et al. A preclinical murine model of hepatic metastases. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (91), e51677 (2014).
  14. Yazdani, H. O., Tohme, S. Murine model of metastatic liver tumors in the setting of ischemia reperfusion injury. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (150), e59748 (2019).
  15. Frampas, E., et al. The intraportal injection model for liver metastasis: advantages of associated bioluminescence to assess tumor growth and influences on tumor uptake of radiolabeled anti-carcinoembryonic antigen antibody. Nuclear Medicine Communications. 32 (2), 147-154 (2011).
  16. O’Rourke, K. P., et al. Transplantation of engineered organoids enables rapid generation of metastatic mouse models of colorectal cancer. Nature Biotechnology. 35 (6), 577-582 (2017).
  17. Goddard, E. T., Fischer, J., Schedin, P. A portal vein injection model to study liver metastasis of breast cancer. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (118), e54903 (2016).
  18. Lee, W. Y., Hong, H. K., Ham, S. K., Kim, C. I., Cho, Y. B. Comparison of colorectal cancer in differentially established liver metastasis models. Anticancer Research. 34 (7), 3321-3328 (2014).
  19. Kollmar, O., Schilling, M. K., Menger, M. D. Experimental liver metastasis: standards for local cell implantation to study isolated tumor growth in mice. Clinical & Experimental Metastasis. 21 (5), 453-460 (2004).
  20. McVeigh, L. E., et al. Development of orthotopic tumour models using ultrasound-guided intrahepatic injection. Scientific Reports. 9 (1), 9904 (2019).
  21. Engstrand, J., Nilsson, H., Stromberg, C., Jonas, E., Freedman, J. Colorectal cancer liver metastases – a population-based study on incidence, management and survival. BMC Cancer. 18 (1), 78 (2018).
  22. Thalheimer, A., et al. The intraportal injection model: a practical animal model for hepatic metastases and tumor cell dissemination in human colon cancer. BMC Cancer. 9, 29 (2009).
  23. Limani, P., et al. Selective portal vein injection for the design of syngeneic models of liver malignancy. American Journal of Physiology Gastrointestinal and Liver Physiology. 310 (9), 682-688 (2016).
  24. Lau, H. C. H., Kranenburg, O., Xiao, H., Yu, J. Organoid models of gastrointestinal cancers in basic and translational research. Nature Reviews. Gastroenterology & Hepatology. 17 (4), 203-222 (2020).
  25. Kobayashi, H., et al. The balance of stromal BMP signaling mediated by GREM1 and ISLR drives colorectal carcinogenesis. Gastroenterology. 160 (4), 1224-1239 (2021).
  26. Fumagalli, A., et al. Genetic dissection of colorectal cancer progression by orthotopic transplantation of engineered cancer organoids. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 114 (12), 2357-2364 (2017).
  27. Fumagalli, A., et al. Plasticity of Lgr5-Negative Cancer Cells Drives Metastasis in Colorectal Cancer. Cell Stem Cell. 26 (4), 569-578 (2020).
  28. de Sousa e Melo, F., et al. A distinct role for Lgr5(+) stem cells in primary and metastatic colon cancer. Nature. 543 (7647), 676-680 (2017).
  29. Lee, J. W., et al. Hepatocytes direct the formation of a pro-metastatic niche in the liver. Nature. 567 (7747), 249-252 (2019).
  30. Dunbar, C. E., et al. Gene therapy comes of age. Science. 359 (6372), 4672 (2018).
  31. George, L. A., et al. Hemophilia B gene therapy with a high-specific-activity factor IX variant. The New England Journal of Medicine. 377 (23), 2215-2227 (2017).
  32. Colella, P., Ronzitti, G., Mingozzi, F. Emerging issues in AAV-mediated in vivo gene therapy. Molecular Therapy. Methods & Clinical Development. 8, 87-104 (2018).
  33. Fripont, S., Marneffe, C., Marino, M., Rincon, M. Y., Holt, M. G. Production, purification, and quality control for adeno-associated virus-based vectors. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (143), e58960 (2019).
  34. Sands, M. S. AAV-mediated liver-directed gene therapy. Methods in Molecular Biology. 807, 141-157 (2011).
  35. O’Rourke, K. P., Ackerman, S., Dow, L. E., Lowe, S. W. Isolation, culture, and maintenance of mouse intestinal stem cells. Bio-protocol. 6 (4), 1733 (2016).
  36. Ellerstrom, C., Strehl, R., Noaksson, K., Hyllner, J., Semb, H. Facilitated expansion of human embryonic stem cells by single-cell enzymatic dissociation. Stem Cells. 25 (7), 1690-1696 (2007).
  37. Sato, T., et al. Single Lgr5 stem cells build crypt-villus structures in vitro without a mesenchymal niche. Nature. 459 (7244), 262-265 (2009).
  38. Oshima, G., et al. Advanced animal model of colorectal metastasis in liver: Imaging techniques and properties of metastatic clones. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (117), e54657 (2016).
  39. Anker, J. F., Mok, H., Naseem, A. F., Thumbikat, P., Abdulkadir, S. A. A bioluminescent and fluorescent orthotopic syngeneic murine model of androgen-dependent and castration-resistant prostate cancer. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (133), e57301 (2018).
  40. Baklaushev, V. P., et al. Luciferase expression allows bioluminescence imaging but imposes limitations on the orthotopic mouse (4T1) model of breast cancer. Scientific Reports. 7 (1), 7715 (2017).
  41. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (65), e3564 (2012).
  42. Schneider, C. A., Rasband, W. S., Eliceiri, K. W. NIH Image to ImageJ: 25 years of image analysis. Nature Methods. 9 (7), 671-675 (2012).
  43. Hara, A., et al. Roles of the mesenchymal stromal/stem cell marker meflin in cardiac tissue repair and the development of diastolic dysfunction. Circulation Research. 125 (4), 414-430 (2019).
  44. Hara, A., et al. Meflin defines mesenchymal stem cells and/or their early progenitors with multilineage differentiation capacity. Genes to Cells. 26 (7), 495-512 (2021).
  45. Wang, H., et al. RNAscope for in situ detection of transcriptionally active human papillomavirus in head and neck squamous cell carcinoma. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (85), e51426 (2014).
  46. Lattouf, R., et al. Picrosirius red staining: a useful tool to appraise collagen networks in normal and pathological tissues. The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 62 (10), 751-758 (2014).
  47. Lugli, A., et al. Recommendations for reporting tumor budding in colorectal cancer based on the International Tumor Budding Consensus Conference (ITBCC) 2016. Modern Pathology. 30 (9), 1299-1311 (2017).
  48. Sangisetty, S. L., Miner, T. J. Malignant ascites: A review of prognostic factors, pathophysiology and therapeutic measures. World Journal of Gastrointest Surgery. 4 (4), 87-95 (2012).
  49. Jung, B., Staudacher, J. J., Beauchamp, D. Transforming growth factor beta superfamily signaling in development of colorectal cancer. Gastroenterology. 152 (1), 36-52 (2017).
  50. Hapach, L. A., Mosier, J. A., Wang, W., Reinhart-King, C. A. Engineered models to parse apart the metastatic cascade. NPJ Precision Oncology. 3, 20 (2019).
  51. Jackstadt, R., et al. Epithelial NOTCH signaling rewires the tumor microenvironment of colorectal cancer to drive poor-prognosis subtypes and metastasis. Cancer Cell. 36 (3), 319-336 (2019).
  52. Lo, Y. -. H., Karlsson, K., Kuo, C. J. Applications of organoids for cancer biology and precision medicine. Nature Cancer. 1 (8), 761-773 (2020).
  53. van de Wetering, M., et al. Prospective derivation of a living organoid biobank of colorectal cancer patients. Cell. 161 (4), 933-945 (2015).
  54. Ben-David, U., et al. Genetic and transcriptional evolution alters cancer cell line drug response. Nature. 560 (7718), 325-330 (2018).
  55. Kattenhorn, L. M., et al. Adeno-associated virus gene therapy for liver disease. Human Gene Therapy. 27 (12), 947-961 (2016).

Tags

Keywords: Portal VeinColorectal CancerLiver MetastasisTumor StromaOrganoidsTumoroidsCASTumor MicroenvironmentMouse ModelSurgical ProcedureBuprenorphineAnesthesiaIncisionPeritoneum
check_url/it/62630?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citazione di questo articolo
Kobayashi, H., Gieniec, K. A., Ng, J. Q., Goyne, J., Lannagan, T. R. M., Thomas, E. M., Radford, G., Wang, T., Suzuki, N., Ichinose, M., Wright, J. A., Vrbanac, L., Burt, A. D., Takahashi, M., Enomoto, A., Worthley, D. L., Woods, S. L. Portal Vein Injection of Colorectal Cancer Organoids to Study the Liver Metastasis Stroma. J. Vis. Exp. (175), e62630, doi:10.3791/62630 (2021).
Scarica citazione
Ristampe e autorizzazioni

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image