Стратегия отвара традиционной китайской медицины у модельных мышей с остеосаркомой
Summary
Протокол содержит детальный процесс стандартизации формулы отвара и техники зондирования на примере отвара Yiqi Jiedu на мышиной модели остеосаркомы. В нем описывается защита животных и повышается надежность данных исследований, предлагаются эффективные стратегии для изучения терапевтической эффективности и молекулярных механизмов формул отваров in vivo.
Abstract
Формула отвара является наиболее часто используемой лекарственной формой в традиционной китайской медицине и применяется в клинической практике на протяжении тысячелетий путем трансорального введения, которое характеризуется быстрым эффектом, легким всасыванием и индивидуальным лечением, основанным на конкретных синдромах пациентов. Качество формулы отвара напрямую отвечает за клиническую эффективность традиционной китайской медицины; Поэтому процесс стандартизации формулы отвара важен, чтобы избежать различий в качестве отвара, вызванных субъективными факторами. Между тем, из-за ограничений проведения клинических экспериментов мелкие животные-переносчики болезней человека, такие как мыши, часто используются в медицинских исследованиях для изучения терапевтической эффективности и комплексных механизмов различных вмешательств, в том числе формулы отвара для традиционной китайской медицины. Следовательно, в качестве важного метода трансорального введения, квалифицированная техника зондирования особенно важна для предотвращения потенциального повреждения пищевода и разлива лекарства, что обеспечит равное количество лекарства, вводимого каждому модельному животному, что приведет к точным экспериментальным результатам. Кроме того, стандартизированный метод приготовления смеси отвара и квалифицированная стратегия зондирования необходимы для защиты благополучия животных и минимизации количества используемых животных. Здесь мы сообщили о подробном процессе стандартизации формулы отвара и техники зондирования на примере отвара Yiqi Jiedu на мышиной модели остеосаркомы. Эффективность оценивали по объему опухоли. Этот протокол обеспечит максимальную защиту животных и повысит надежность данных исследований, тем самым обеспечивая эффективные стратегии для будущих исследований терапевтической эффективности и молекулярных механизмов формулы отвара для традиционной китайской медицины in vivo.
Introduction
Отварная формула является наиболее часто используемой лекарственной формой традиционной китайской медицины и жидкими лекарственными препаратами 1,2. Формула отвара традиционной китайской медицины обрабатывается путем отваривания трав в воде после замачивания с последующей процеживанием, чтобы избавиться от мухи.
Поскольку формула отвара может быть индивидуализирована в зависимости от клинических потребностей, особенно в соответствии с характеристиками доказательной медицины в традиционной китайской медицине, эта лекарственная форма путем трансорального введения применяется в клинической практике на протяжении тысячелетий с конкретными и незаменимыми преимуществами 3,4. Качество формулы отвара напрямую связано с клинической эффективностью. Поэтому формула отвара должна быть приготовлена на основе принципов стандартизированных методов отвара, чтобы обеспечить максимальную экстракцию и защиту активных ингредиентов3. Между тем, готовые к употреблению лекарства являются основной формой сырых китайских трав, используемых в клинической практике; стандарты качества и методы производства рецептурных лекарственных средств, готовых к приготовлению отваров, должны соответствовать положениям Китайской фармакопеи2. Кроме того, назначенные лекарственные средства, готовые к приготовлению отвара, должны быть замочены в холодной питьевой воде не менее чем на 30 мин, а затем отварены в специальной аптечной кастрюле путем нагревания5. Исследования показали, что большинство активных ингредиентов можно извлечь путем отваривания в течение двух раз, а Свод правил применения отваров традиционной китайской медицины в медицинских учреждениях также предписывает делать отвар дважды 4,6,7. Если назначаются специальные китайские травы, например, с твердой консистенцией или тоники, время приема отвара рекомендуется продлить. Посуда для отвара и емкости для хранения, которые непосредственно контактируют с рецептурой отвара, начиная с емкости, в которой замачиваются назначенные лекарства, должны быть химически стойкими и иметь крышки, такие как запеканки, керамика, стекло и нержавеющая сталь. Однако не следует использовать алюминиевые и обычные пластиковые изделия, а железо и другую едкую посуду следует запретить, чтобы избежать возможных химических реакций, которые снизят терапевтическую эффективность и даже окажут вредное воздействие 4,6,7.
Из-за ограничений в проведении клинических экспериментов мелкие животные, являющиеся переносчиками болезней человека, такие как мыши, часто используются в медицинских исследованиях для изучения терапевтической эффективности и комплексных механизмов различных вмешательств, включая формулу отвара традиционной китайской медицины 8,9; Однако, в отличие от людей, в клинической практике отвары следует готовить каждый день, смешивать вместе и принимать 2 раза в день. Животные не могут добровольно принимать лекарства вовремя с необходимой дозировкой, и большинство экспериментов на животных, связанных с традиционной китайской медициной, в настоящее время представляют собой пероральное введение отваров через зонд. Формулы отваров, используемые для экспериментов на животных in vivo, должны быть приготовлены заранее, алицитированы, хранятся при -20 °C и разморожены непосредственно перед использованием 3,4,10. Кроме того, некачественная иммобилизация животных и манипуляции с иглами зонда увеличивают риск ненужных травм и негативных эмоций. Таким образом, как важный метод трансоральной доставки лекарств, квалифицированная техника зондирования особенно важна для предотвращения возможного повреждения пищевода и разлива лекарства, тем самым гарантируя, что каждое модельное животное получит равное количество назначенных растительных лекарств для достижения точных экспериментальных результатов. Здесь мы приводим протокол зондирования для формулы отвара традиционной китайской медицины.
Protocol
Representative Results
Discussion
Клиническая эффективность назначаемых трав в традиционной китайской медицине во многом связана с вводимой дозой и лекарственной формой; Поэтому в клинической практике, а также для повышения надежности результатов экспериментов необходимо разработать стандартизированную стратегию …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Текущая работа поддерживается грантами (1) Национального фонда естественных наук (81973877 и 82174408), (2) Национальной ключевой программы исследований и разработок Китая (2020YFE0201600), (3) проекта строительства Шанхайского приоритетного исследовательского центра (2022ZZ01009), (4) Шанхайского совместного инновационного центра промышленной трансформации подготовки больниц к ТКМ и (5) исследовательских проектов в рамках бюджета Шанхайского университета традиционной китайской медицины (2021LK047).
Materials
| 143B cell line | ATCC | CRL-8303 | osteosarcoma cell line |
| Anesthesia machine | Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd | R500IP | The Equipment of Anesthesia mice |
| Automatic cell counter | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Counting cells |
| BALB/c athymic mice | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Male | Animal |
| Barbed skullcap herb | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 20230606 | Decoction-ready medicines |
| Basement Membrane Matrix | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | re-suspende cells |
| Centrifuge tube (15 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Centrifuge the cells |
| Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | Component of gastric perfusion device |
| Gauze | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | Decoction filter |
| Ginseng | Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. | 20220704-2 | Decoction-ready medicines |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 2023071107 | Decoction-ready medicines |
| isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Anesthesia mice |
| Micro-volume syringe | Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd | 0-50 μL | Inject precise cells into the tibia |
| Phosphate-buffered saline | Beyotime Biotechnology | ST447 | wash the human osteosarcoma cells |
| Rubber bands | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | Fixing gauze on the measuring cup |
| Syringe (1 mL ) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | Component of gastric perfusion device |
| Trypsin (0.25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, Gibco | trypsin treatment of cells |
Riferimenti
- Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12 (2005).
- Chinese Pharmacopoeia Commission. . Pharmacopoeia of the People’s Republic of China. , (2015).
- An, Y., et al. Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction. Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).
- Chen, S., et al. Research strategies in standard decoction of medicinal slices. China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).
- Luo, F. Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components. Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).
- Liu, F., Chen, M. On the standardization of decocting methods of modern decoction. Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).
- Li, X., et al. Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction. J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).
- Li, X., et al. Herbal decoctosome is a novel form of medicine. Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).
- Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. Reflections on PK – PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine. Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).
- Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica. Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).
- . Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers Available from: https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers (2005)
- Chang, J., et al. Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models. J Vis Exp. (176), 63072 (2021).
- He, C. Laboratory animal science. , (2006).
- Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors. Fronti Pedia. 2, 93 (2014).
- Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized. J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).
- Recena Aydos, L., et al. Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models. Nutrients. 11 (12), 3067 (2019).
