Estrategia de sonda nasogástrica para la fórmula de decocción de la medicina tradicional china en ratones modelo de osteosarcoma
Summary
El protocolo proporciona un proceso de estandarización detallado de la fórmula de decocción y la técnica de sonda nasogástrica con la decocción de Yiqi Jiedu en el modelo de ratón con osteosarcoma como ejemplo. Describe la protección de los animales y mejora la fiabilidad de los datos de investigación, proporcionando estrategias eficaces para investigar la eficacia terapéutica y los mecanismos moleculares de las fórmulas de decocción in vivo.
Abstract
La fórmula de decocción es la forma de dosificación más utilizada en la medicina tradicional china y se ha aplicado en la práctica clínica durante miles de años mediante administración transoral, que se caracteriza por un efecto rápido, una fácil absorción y un tratamiento individualizado basado en los síndromes específicos de los pacientes. La calidad de la fórmula de decocción es directamente responsable de la eficacia clínica de la medicina tradicional china; Por lo tanto, el proceso de estandarización de la fórmula de decocción es importante para evitar diferencias en la calidad de la decocción causadas por factores subjetivos. Mientras tanto, debido a las limitaciones de la realización de experimentos clínicos, los pequeños animales portadores de enfermedades humanas, como los ratones, se utilizan a menudo en la investigación médica para explorar la eficacia terapéutica y los mecanismos integrales de diferentes intervenciones, incluida la fórmula de decocción para la medicina tradicional china. En consecuencia, como método importante de administración transoral, la técnica de sonda nasogástrica especializada es particularmente importante para evitar posibles daños en el esófago y derrames de fármacos, lo que garantizará que se administre una cantidad igual de medicamento a cada animal modelo, lo que conducirá a resultados experimentales precisos. Además, el método estandarizado de preparación de la fórmula de decocción y la estrategia de sonda nasogástrica calificada son necesarios para proteger el bienestar animal y minimizar el número de animales utilizados. Aquí, informamos un proceso de estandarización detallado de la fórmula de decocción y la técnica de sonda nasogástrica con la decocción de Yiqi Jiedu en un modelo de ratón con osteosarcoma como ejemplo. La eficacia se evaluó por el volumen tumoral. Este protocolo maximizará la protección animal y mejorará la fiabilidad de los datos de investigación, proporcionando así estrategias eficaces para futuras investigaciones sobre la eficacia terapéutica y los mecanismos moleculares de la fórmula de decocción para la medicina tradicional china in vivo.
Introduction
La fórmula de decocción es la forma de dosificación más utilizada de la medicina tradicional china y los medicamentos líquidos 1,2. La fórmula de decocción de la medicina tradicional china se procesa decociendo las hierbas en agua después de remojarlas, seguidas de un filtrado para desechar las heces.
Debido a que la fórmula de decocción puede individualizarse en función de las necesidades clínicas, especialmente en línea con las características del tratamiento basado en la evidencia en la medicina tradicional china, esta forma farmacéutica por vía transoral se ha aplicado en la práctica clínica durante miles de años con ventajas específicas e insustituibles 3,4. La calidad de la fórmula de decocción está directamente relacionada con la eficacia clínica. Por lo tanto, la fórmula de decocción debe prepararse en base a los principios de los métodos de decocción estandarizados para garantizar que los ingredientes activos se extraigan y protejan al máximo3. Mientras tanto, los medicamentos listos para la decocción son la principal forma de hierbas chinas crudas utilizadas en la práctica clínica; las normas de calidad y los métodos de producción de los medicamentos listos para la decocción prescritos deben cumplir con las disposiciones de la Farmacopea China2. Además, los medicamentos listos para la decocción prescritos deben remojarse en agua potable fría durante al menos 30 minutos antes de ser cocidos en una olla farmacéutica especial calentando5. Los estudios han demostrado que la mayoría de los ingredientes activos se pueden extraer decociendo dos veces, y el Código de Práctica para la Administración de Salas de Decocción de Medicinas Tradicionales Chinas en Instituciones Médicas también prescribe que la decocción se realice dos veces 4,6,7. Si se prescriben hierbas chinas especiales, como una con textura dura o tónicos, se recomienda extender el tiempo de decocción. Los utensilios de decocción y los recipientes de almacenamiento que entran en contacto directo con la fórmula de decocción, a partir del recipiente en el que se remojan los medicamentos listos para la decocción prescritos, deben ser químicamente estables y tener tapas, como cazuelas, cerámica, vidrio y acero inoxidable. Sin embargo, no se deben utilizar productos de aluminio y plástico ordinario, mientras que el hierro y otros utensilios corrosivos deben prohibirse para evitar posibles reacciones químicas, que reducirán la eficacia terapéutica e incluso producirán efectos nocivos 4,6,7.
Debido a las limitaciones de la realización de experimentos clínicos, los pequeños animales portadores de las enfermedades humanas, como los ratones, se utilizan a menudo en la investigación médica para explorar la eficacia terapéutica y los mecanismos integrales de diferentes intervenciones, incluida la fórmula de decocción de la medicina tradicional china 8,9; Sin embargo, a diferencia de los humanos, las fórmulas de decocción deben prepararse todos los días, mezclarse y administrarse 2 veces al día en la práctica clínica. Los animales no pueden tomar voluntariamente sus medicamentos a tiempo con la dosis requerida, y la mayoría de los experimentos con animales relacionados con la medicina tradicional china se administran por vía oral con sonda nasogástrica en la actualidad. Las fórmulas de decocción utilizadas para los experimentos in vivo con animales deben prepararse con antelación, alícuotas, almacenarse a -20 °C y descongelarse justo antes de su uso 3,4,10. Además, la inmovilización de animales de baja calidad y la manipulación de agujas por sonda aumentan el riesgo de lesiones innecesarias y emociones negativas. Por lo tanto, como método importante de administración transoral de fármacos, la técnica de sonda nasogástrica especializada es particularmente importante para evitar posibles lesiones esofágicas y derrames de fármacos, asegurando así que cada animal modelo reciba la misma cantidad de medicamentos herbales recetados para lograr resultados experimentales precisos. Aquí, proporcionamos un protocolo de sonda nasogástrica para la fórmula de decocción de la medicina tradicional china.
Protocol
Representative Results
Discussion
La eficacia clínica de las hierbas prescritas en la medicina tradicional china se asocia en gran medida con la dosis administrada y la forma farmacéutica; Por lo tanto, el establecimiento de una estrategia de decocción estandarizada y un proceso de administración calificado son necesarios en la práctica clínica, así como en la mejora de la confiabilidad de los resultados experimentales.
En este estudio, primero proporcionamos una estrategia detallada para la decocción estandarizada de …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
El trabajo actual cuenta con el apoyo de subvenciones de (1) la Fundación Nacional de Ciencias de la Naturaleza (81973877 y 82174408), (2) el Programa Nacional Clave de Investigación y Desarrollo de China (2020YFE0201600), (3) el proyecto de construcción del Centro de Investigación de Alta Prioridad de Shanghái (2022ZZ01009), (4) el Centro de Innovación Colaborativa de Shanghái de Transformación Industrial de la Preparación de la MTC Hospitalaria y (5) los Proyectos de Investigación dentro del Presupuesto de la Universidad de Medicina Tradicional China de Shanghái (2021LK047).
Materials
| 143B cell line | ATCC | CRL-8303 | osteosarcoma cell line |
| Anesthesia machine | Shenzhen RWD Life Technology Co.,Ltd | R500IP | The Equipment of Anesthesia mice |
| Automatic cell counter | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Counting cells |
| BALB/c athymic mice | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Male | Animal |
| Barbed skullcap herb | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 20230606 | Decoction-ready medicines |
| Basement Membrane Matrix | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | re-suspende cells |
| Centrifuge tube (15 mL) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Centrifuge the cells |
| Elbow gavage needle (12-gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | Component of gastric perfusion device |
| Gauze | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | Decoction filter |
| Ginseng | Shanghai Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. | 20220704-2 | Decoction-ready medicines |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Traditional Chinese Medicine Tablet Co., Ltd. | 2023071107 | Decoction-ready medicines |
| isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Anesthesia mice |
| Micro-volume syringe | Shanghai high pigeon industry and trade Co., Ltd | 0-50 μL | Inject precise cells into the tibia |
| Phosphate-buffered saline | Beyotime Biotechnology | ST447 | wash the human osteosarcoma cells |
| Rubber bands | Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | Fixing gauze on the measuring cup |
| Syringe (1 mL ) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | Component of gastric perfusion device |
| Trypsin (0.25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, Gibco | trypsin treatment of cells |
Riferimenti
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