Cultura de células dendríticas mieloides a partir de precursores de médula ósea

Summary

Este video muestra el procedimiento para la diferenciación de células dendríticas mieloides de la médula ósea de ratón. El aislamiento de la tibia y el fémur de ratón, y el procesamiento de la médula ósea se demuestran. Imágenes que demuestran la morfología celular, antes y después de la diferenciación, y figuras que representan el fenotipo celular y la IL-12 después de la maduración de la producción con CpG se muestran.

Abstract

Células dendríticas mieloides (DC) se utilizan con frecuencia para estudiar las interacciones entre los mecanismos de inmunidad innata y adaptativa y la respuesta temprana a la infección. Debido a que estos son los antígenos más potentes células presentadoras de los países en desarrollo se están utilizando cada vez más como un vector de la vacuna para estudiar la inducción de antígenos específicos de la respuesta inmune. En este vídeo, que muestran el procedimiento para la recolección de la tibia y el fémur de un ratón de los donantes, el procesamiento de la médula ósea y la diferenciación de los países en desarrollo in vitro. Las propiedades de cambio los países en desarrollo después de la estimulación: las células dendríticas inmaduras son fagocitos potentes, mientras que los países en desarrollo maduros son capaces de presentación del antígeno y la interacción con CD4 + y CD8 + T. Este cambio en la actividad funcional se corresponde con la regulación al alza de los marcadores de superficie celular y la producción de citoquinas. Muchos de estos agentes puede ser usado para los países en desarrollo maduro, incluyendo citoquinas y peaje-como los ligandos del receptor. En este vídeo, que muestran las comparaciones de citometría de flujo de la expresión de dos moléculas co-estimulantes, CD86 y CD40, y la citoquina, la IL-12, tras la estimulación durante la noche con el tratamiento con CpG o simuladas. Después de la diferenciación, países en desarrollo puede ser manipulado para su uso como vector de la vacuna o para generar antígenos específicos de la respuesta inmune in vitro de pulso con péptidos o proteínas, o transducidas con vectores virales recombinantes.

Protocol

Este protocolo ha sido adaptado de Lutz et al 1. Cosecha y el procesamiento de la médula ósea El aislamiento de la tibia y el fémur: la eutanasia de los donantes del ratón y el spray de las piernas con el 70% de etanol. Sujete el tobillo primera firmemente con unas pinzas romas y empezar a cortar la piel y la musculatura subyacente para exponer la tibia. Para evitar daños en el hueso, corte lento y paralelo a la tibia, dejando intacta la articulaci…

Discussion

Los países en desarrollo son útiles para estudios de interacciones inmune innato y adaptativo, y puede ser empleado como un vector de la vacuna. En este video, que han demostrado los pasos para aislar la médula ósea y diferenciar células dendríticas mieloides in vitro. Tras el período de cultivo, estas células se pueden visualizar al microscopio las células tanto como adherentes, que a menudo poseen las dendritas, y las células no adherentes y vuelta. Los países en desarrollo puede ser manipulado para la presentación de antígen…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
recombinant murine GM-CSF	Reagent	Peptrotech	315-03