Myeloid dendritik hücreler kemik iliği öncüleri Kültür
Summary
Bu video fare kemik iliği myeloid dendritik hücrelerin ayırt etmek için prosedür göstermektedir. İzolasyon fare tibia ve femur, ve kemik iliği işleme göstermiştir. Hücre fenotipi ve CpG IL-12 üretimi takiben olgunlaşma gösteren farklılaşma öncesi ve sonrası hücre morfolojisi gösteren resimler ve rakamlar gösterilmektedir.
Abstract
Myeloid dendritik hücreler (DC) doğal ve adaptif immün mekanizmaları ve enfeksiyona karşı erken yanıt arasındaki etkileşimleri incelemek için sık sık kullanılır. Bu hücreler sunan en güçlü antijen olduğundan, DC'lere giderek antijen-spesifik immün yanıtlarının indüksiyonu çalışma bir aşı vektörü olarak kullanılan ediliyor. Bu video, biz, bir donör fare tibiaları ve femur hasat, kemik iliği işleme ve in vitro DC'ler ayırt prosedürü göstermektedir. Uyarılmasını takiben DC'ler değişim özellikleri: olgun DC'ler antijen sunumu ve etkileşim CD4 + ve CD8 + T hücreleri yeteneğine ise immatür dendritik hücreler, güçlü fagositlerdir. Bu değişiklik, fonksiyonel aktivite uyarılması ile hücre yüzey belirteçleri ve sitokin üretimi karşılık gelir. Birçok ajanlar olgun DC'ler, sitokinler ve toll-benzeri reseptör ligandlar dahil etmek için kullanılabilir. Bu video, CpG ya da sahte tedavi ile bir gecede uyarılmasını takiben, iki eş-uyarıcı moleküller, CD86 ve CD40, sitokin, IL-12 ekspresyonu akım sitometri karşılaştırmalar göstermektedir. Farklılaşma sonra, DC'ler daha bir aşı vektörü olarak kullanılmak üzere manipüle edilebilir ya da in vitro antijen-spesifik immün yanıt oluşturmak için peptid veya proteinleri kullanarak darbeli, ya da rekombinant viral vektörler kullanılarak transduced.
Protocol
Discussion
DC'ler doğal ve adaptif immün etkileşimlerin çalışmalar için yararlı olur ve bir aşı vektörü olarak istihdam edilebilir. Bu video, in vitro olarak izole etmek ve kemik iliği myeloid dendritik hücrelerin ayırt etmek için adımlar göstermiştir. Kültür dönemini takiben, bu hücrelerin mikroskobik hem olarak yapışık genellikle dendritler sahip hücreler, ve yapışmaz yuvarlak hücreler görüntülendi olabilir. DC'lerin antijen ile darbeli antijen sunumu için manipüle veya sitokin üretimi ve sitokinlerin ve /…
Acknowledgements
JB, Fen Bilimleri ve Mühendislik Araştırma Kurumu (NSERC) studentships tarafından desteklenmektedir. Bu proje için Destek Hibe MOP-67.066, Kanada Sağlık Araştırma Enstitüsü tarafından sağlanmıştır.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| recombinant murine GM-CSF | Reagent | Peptrotech | 315-03 |
Riferimenti
- Lutz, M. B., Kukutsch, N., Ogilvie, A. L., Rossner, S., Koch, F., Romani, N., Schuler, G. An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow. J. Immunol. Methods. 223, 77-92 (1999).
- Gilboa, E. DC-based cancer vaccines. J. Clin. Invest. 117, 1195-1203 (2007).
