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In vitro Seleção de Repressores Transcricionais Projetados para Silenciamento Epigenético Direcionado
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JoVE Journal Bioingegneria
In Vitro Selection of Engineered Transcriptional Repressors for Targeted Epigenetic Silencing

In vitro Seleção de Repressores Transcricionais Projetados para Silenciamento Epigenético Direcionado

DOI:
10.3791/64403-v

•

10:44 min

•

May 05, 2023

•

, , , , , , ,
1San Raffaele Telethon Institute for Gene Therapy (SR-Tiget),IRCCS San Raffaele Scientific Institute, 2Center for Omics Sciences,IRCCS San Raffaele Institute, 3Institute for Biomedical Technologies,National Research Council, 4Vita-Salute San Raffaele University

Capitoli

  • 00:05Introduction
  • 01:34Engineering a Fluorescence-Based Reporter Cell Line
  • 03:10Designing gRNAs for CRISPR/dCas9-Based Epigenetic Silencing of Target Gene
  • 04:13Arrayed Transient Delivery of CRISPR/dCas9-Based ETRs in Reporter Cell Line
  • 07:19Analyzing Transcriptional Activity of Target Gene Over Time
  • 08:11Results: dCas9 ETR-Mediated Epigenetic Silencing of Human B2M Gene by gRNAs
  • 09:23Conclusion

Summary

Traduzione automatica

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Aqui, apresentamos um protocolo para a seleção in vitro de repressores transcricionais projetados (ETRs) com alta, longa duração, estável, eficiência de silenciamento no alvo e baixa atividade fora do alvo em todo o genoma. Esse fluxo de trabalho permite reduzir um repertório inicial e complexo de ETRs candidatos a uma lista curta, adequada para avaliação adicional em cenários terapeuticamente relevantes.

Tags

Keywords: Epigenetic SilencingGene SilencingArtificial NucleasesEngineered Transcriptional RepressorsChromatin CompactionTranscriptional InhibitionGene DisruptionRNA InterferenceB2M GeneCRISPR Cas9Nucleofection

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