Rivista
/
/
In vitro Udvælgelse af konstruerede transkriptionelle repressorer til målrettet epigenetisk hæmning
JoVE Journal
Bioingegneria
This content is Free Access.
JoVE Journal Bioingegneria
In Vitro Selection of Engineered Transcriptional Repressors for Targeted Epigenetic Silencing
DOI:

10:44 min

May 05, 2023

, , , , , , ,

Capitoli

  • 00:05Introduction
  • 01:34Engineering a Fluorescence-Based Reporter Cell Line
  • 03:10Designing gRNAs for CRISPR/dCas9-Based Epigenetic Silencing of Target Gene
  • 04:13Arrayed Transient Delivery of CRISPR/dCas9-Based ETRs in Reporter Cell Line
  • 07:19Analyzing Transcriptional Activity of Target Gene Over Time
  • 08:11Results: dCas9 ETR-Mediated Epigenetic Silencing of Human B2M Gene by gRNAs
  • 09:23Conclusion

Summary

Traduzione automatica

Her præsenterer vi en protokol til in vitro-udvælgelse af konstruerede transkriptionelle repressorer (ETR'er) med høj, langsigtet, stabil, on-target hæmningseffektivitet og lav genom-wide, off-target aktivitet. Denne arbejdsgang gør det muligt at reducere et indledende, komplekst repertoire af kandidat-ETR'er til en kort liste, der er egnet til yderligere evaluering i terapeutisk relevante indstillinger.

Video correlati

Read Article