安培电极的制备
Summary
本协议描述了如何生成的碳纤维电极。随后，电极用于检测儿茶酚胺释放囊泡与碳纤维安培。
Abstract
碳纤维电极安培测量单细胞囊泡检测儿茶酚胺释放的关键。在这里，我们描述产生低噪声（<0.5 PA）电极所需的技术。从公布的描述，该技术已被修改以前的研究（1,2）。电极是由准备碳纤维和线程到每个毛细管单独使用一个过滤器，真空吸纤维。下一步，与纤维的毛细管被拉到一个电极拉马，创建两半，每一个细尖。电极浸在热，液体环氧树脂与固化剂混合，以创建一个环氧玻璃密封。最后，电极置于烘箱中固化环氧树脂。电极小心处理，以确保它们是一致和无损伤的关键。此协议显示了如何从单细胞记录安培的电极制造和切割。
Protocol
第1部分：碳纤维的制备切割长度〜1.25 X的毛细吸管长度的碳纤维束（使用7微米直径）。 煮沸删除上浆〜100毫升的容器中的丙酮，并添加纤维热，煮沸30分钟或更长的时间丙酮。 删除从温暖丙酮的纤维，并转移到一个干净的烧杯50-100毫升新鲜丙酮。 放置在一个开放的150毫米培养皿的捆绑和airdry通宵干纤维。 第2部分：消防抛光玻璃毛细管<l…
Discussion
本协议描述了如何生成和减少安培的电极。安培录音期间，碳纤维电极放在对一个分泌细胞的表面。 Exocytotic活动是观察安培的峰值，这表明的儿茶酚胺的氧化后的电子转移所造成的电化学电流。与实践和切割安培电极，可大大改善噪音水平超过许多市售电极。
Acknowledgements
我们感谢阿龙体育福克斯博士在芝加哥大学，在他的实验室，这一协议最初是设计，和威廉罗登（圣路易斯大学）协议的进一步发展。
我们感谢白厅基金会和美国国家科学基金会的支持。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Epoxy Hardener 1,3-phenylene-diamene flakes | Reagent | Sigma Aldrich | P23954-100G04 716AJ | Aliquots are stored in a dessicator and should not be exposed to light. |
| Carbon Fibers | Material | Goodfellow | C005725 | |
| Micro-Hematocrit Capillary Tubes | Material | Fisher | NC9836768 | |
| Epoxy Resin | Reagent | Miller-Stephenson | Epon Resin 828 | |
| Dissecting Microscope | Instrument | |||
| Electrode Puller | Instrument | Narishige Japan | PP-830 | 1st pull = 24.8 degrees C; 2nd pull = 62.7 degrees C |
| Oven | Instrument | set to 100 degrees F. | ||
| Hot plate | Instrument | set to 55 degrees C |
References
- Mundorf, M. L., Wightman, R. M. Amperometry and cyclic voltammetry with carbon fiber microelectrodes at single cells. Curr Protocols in Neurosci. 6 (14), 1-6 (2002).
- Machado, D. J., Montesinos, M. S., Borges, R. Good practices in single-cell amperometry. Methods in Molec. Biol. 440, 297-313 (2008).
Cite This Article
Pike, C. M., Grabner, C. P., Harkins, A. B. Fabrication of Amperometric Electrodes. J. Vis. Exp. (27), e1040, doi:10.3791/1040 (2009).