Fabricação de eletrodos amperométrica

Summary

Este protocolo descreve como gerar eletrodos de fibra de carbono. Os eletrodos são posteriormente usados ​​para detectar liberação de catecolaminas a partir de vesículas com amperometria fibra de carbono.

Abstract

Eletrodos de fibra de carbono são cruciais para a detecção de liberação de catecolaminas a partir de vesículas em células isoladas para medições amperometria. Aqui, descrevemos as técnicas necessárias para gerar ruído baixo (<0,5 pA) eletrodos. As técnicas foram modificadas a partir de descrições publicados por pesquisadores anteriores (1,2). Eletrodos são feitos através da preparação de fibras de carbono e enfiar-los individualmente em cada tubo capilar usando um vácuo com um filtro para aspirar a fibra. Em seguida, o tubo capilar com fibras é puxado por um puxador de eletrodo, criando duas metades, cada uma com uma ponta fina pontas. Os eletrodos são mergulhados em epóxi, líquido quente misturado com o endurecedor de criar um selo de epóxi-vidro. Por último, os eletrodos são colocados em um forno para curar o epóxi. Manipulação cuidadosa dos eletrodos é fundamental para garantir que eles são feitos de forma consistente e sem danos. Este protocolo mostra como fabricar e cortar eletrodos amperométricos para a gravação a partir de células individuais.

Protocol

Parte 1: Preparação da fibra do carbono Cortar um feixe de fibras de carbono (usamos 7μm de diâmetro) em um comprimento que é de aproximadamente 1,25 X do comprimento da pipeta capilar. Remover o dimensionamento fervendo ~ 100 mL de acetona em um recipiente e acrescentar as fibras para a acetona, fervente por 30 minutos ou mais. Retire as fibras de acetona quente, e transferir para um copo limpo com 5-10 mL de acetona fresco. Fibras secas, colocando o pacote em um prato de 1…

Discussion

Este protocolo descreve como gerar e cortar eletrodos amperométricos. Durante as gravações amperométrico, um eletrodo de fibra de carbono é colocada contra a superfície de uma célula secretora. Exocytotic atividade é observado como picos amperométrico, o que indica a corrente eletroquímica causado pela transferência de elétrons após a oxidação das catecolaminas. Com a prática de realizar e cortar eletrodos amperométricos, os níveis de ruído pode ser muito melhorada ao longo de muitos dos eletrodos dis…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Epoxy Hardener 1,3-phenylene-diamene flakes	Reagent	Sigma Aldrich	P23954-100G04 716AJ	Aliquots are stored in a dessicator and should not be exposed to light.
Carbon Fibers	Material	Goodfellow	C005725
Micro-Hematocrit Capillary Tubes	Material	Fisher	NC9836768
Epoxy Resin	Reagent	Miller-Stephenson	Epon Resin 828
Dissecting Microscope	Instrument
Electrode Puller	Instrument	Narishige Japan	PP-830	1st pull = 24.8 degrees C; 2nd pull = 62.7 degrees C
Oven	Instrument			set to 100 degrees F.
Hot plate	Instrument			set to 55 degrees C