Topo cellule epiteliali mammarie forma Mammospheres durante la differenziazione lattogenica

Summary

HC11 differenziazione lattogenica può essere caratterizzata dalla formazione di strutture a cupola denominata mammospheres. Le strutture possono essere elencati mediante microscopia a contrasto di fase per aiutare a quantificare la differenziazione lattogenica.

Abstract

Una misura fenotipica comunemente usato per determinare il grado di differenziazione lattogenica nel topo colture di cellule epiteliali mammarie è la formazione di strutture cellulari a forma di cupola denominata mammospheres¹. Il HC11 linea cellulare è stata utilizzata come sistema modello per lo studio della regolazione della differenziazione mammaria lattogenica sia<em> In vitro</em> E<em> In vivo</em². Il HC11 cellule si differenziano e sintetizzare proteine ​​del latte in risposta al trattamento con ormoni lattogenica. In seguito la crescita di HC11 topo cellule epiteliali mammarie di confluenza, differenziazione lattogenica è stata indotta con l'aggiunta di una combinazione di ormoni lattogenica tra desametasone, insulina e prolattina, di cui il DIP. Il HC11 cellule indotte a differenziare sono stati fotografati a volte fino a 120 ore dopo l'induzione della differenziazione e del numero di mammospheres che è apparso in ogni cultura era enumerato. Le dimensioni del mammospheres individuale si correla con il grado di differenziazione e questo è raffigurato nelle immagini delle cellule differenziazione.

Protocol

Il HC11 cellule sono state coltivate a confluenza per 6 giorni in RPMI 1640 medium supplementato con 10% di siero di vitello fetale, insulina 5μg/ml, 10 HEPES mM, 10ng/ml fattore di crescita epidermico (EGF) per stabilire la competenza. Le cellule sono state lavate con PBS e mantenuti in terreni di coltura senza FEG per 24 ore. Per indurre la differenziazione lattogenica le cellule sono state incubate nei media differenziazione, cioè RPMI con desametasone (10 -6 M), l'insulina (5 mg / ml) e prolatti…

Discussion

Affinché questa tecnica per avere successo e di ottima qualità, le cellule epiteliali deve essere mantenuta a confluenza prima di essere indotto con gli ormoni lattogenica. Ci possono essere situazioni in cui ci sono mammospheres numerosi, il che rende difficile la quantificazione. Così, ai fini quantitativa è meglio fotografare la mammospheres in un punto momento in cui il numero di mammospheres è in grado di essere contati.

Mentre ci sono diversi marcatori molecolari per determinare i…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
RPMI		Invitrogen	21870076
Fetal Bovine Serum		Atlanta Biologicals	S11550
L-Glutamine		Gibco	25030
PenStrep		Gibco	15140
Hepes		Quality Biologicals	118089060
EGF		Sigma	E9644
Insulin		Gibco	12585-014
Dexamethasone		Sigma	D1756
Microscope		Olympus	IX71
Digital Camera		QImaging	Retiga 2000RV Fast 1394